急求蛋白溶解度的计算计算公式

来源：蜘蛛抓取(WebSpider) 时间：2011-10-15 07:52 标签： 溶解度的计算

测定蛋白质等电点的几种方法

等電点：如果调节溶液的PH值使得其中的氨基酸呈电中性我们把这个PH值称为氨基酸的等电点：PI。PI是氨基酸的重要常数之一它的意义在于，粅质在PI处的溶解度的计算最小是分离纯化物质的重要手段。等电点的计算：对于所有的R基团不解离的氨基酸而言（即解离只发生在α-羧基和α-氨基上）计算起来非常简单：PI＝（PK1’+PK2’）/2若是碰到R基团也解离的，氨基酸就有了多级解离这个公式就不好用了，比如Lys、Glu、Cys等

  等电点：如果调节溶液的PH值使得其中的氨基酸呈电中性，我们把这个PH值称为氨基酸的等电点：PIPI是氨基酸的重要常数之一，它的意义在于物质在PI处的溶解度的计算最小，是分离纯化物质的重要手段等电点的计算：对于所有的R基团不解离的氨基酸而言（即解离只发生在α-羧基和α-氨基上），计算起来非常简单：PI＝（PK1’+PK2’）/2若是碰到R基团也解离的氨基酸就有了多级解离，这个公式就不好用了比如Lys、Glu、Cys等。
找出呈电中性的物质其左右PK’值的平均值就是氨基酸的等电点：PI＝（PK左’+PK右’）/2以Lys为例：在黑板上用简式演示<3>等电点的测定：等电聚焦法：这是一种特殊的电泳，其载体上铺有连续的PH梯度的缓冲液然后将氨基酸点样，只要该处的PH与氨基酸的PI不同则氨基酸就会带电，PH徝>PI时aa带-电；PH值<PI时，aa带+电
  通电后，氨基酸就会移动直到某处的PH＝PI，氨基酸才呈电中性不再移动，因此可以测出PI。等电点沉淀所有嘚氨基酸均为两性物质亦即它们至少含有一个酸性基（carboxyl）及一个碱性基（α-amino）。
氨基酸可以三种形式存在即正电荷（cation）、两性离子（zwitterion）或双极性离子（dipolar ion）及负电荷（anion）等三种，若在酸性溶液中带正电荷则在碱性溶液中带负电荷。
  若氨基酸在某一pH值下其净电荷为0且在電场中不移动时，称此pH值为它的pI值（等电点）因为净电荷为零，净电斥力不存在的缘故大部份蛋白质於等电点的pH值下，其溶解度的计算最小相反的，当溶液的pH值低於或高於pI所有蛋白质分子所带净电荷必为同号，彼此之间有相斥力不会凝结。
  所以将pH调到等电点的夶小，则大部份的蛋白质将会沉淀这种现象可以应用於估算某蛋白质的等电点。

大豆及其制品蛋白质溶解度的计算测定
本标准规定了大豆及其制品中蛋白质溶解度的计算测定的原理、试剂、仪器设备和测定方法
本标准适用于饲料检测单位、饲料企業、养殖场（户）、大中专院校对大豆及其制品的加工质量的检测和监控。
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下列术语和定义适用于本标准。
在一定的氢氧化钾溶液中溶解的蛋白质质量占试样中总蛋白质量的百分数通常采用氮溶解指数（NSI）和蛋白质分散指数（(PDI)来表示。
用一定浓度的氢氧化钾溶液提取试样中的可溶性蛋白质在催化剂作用下用浓硫酸将提取液中可溶性蛋白质的氮转化为硫酸铵。加入强碱进行蒸馏使氨逸出用硼酸吸收后，再用盐酸滴定测出试样中可溶性蛋白质含量；同时测定原始试样中粗蛋白质含量，计算出试样的蛋白溶解度的计算
a)  氢氧化钾（分析纯），无水硫酸钾、五水硫酸铜、氢氧化钠、硼酸、甲基红、溴甲酚绿、硫酸铵；
b)  浓硫酸、盐酸（分析纯）、95%乙醇、蒸馏水
称取2.360 g氫氧化钾，加水溶解后转移至1000 mL容量瓶中，用水定容至刻度
称取6 g硫酸钾和0.4 g硫酸铜，磨碎混匀
称取400 g氢氧化钠，加水溶解后转移至1000 mL容量瓶中，用水定容至刻度
称取20 g硼酸，加水溶解后转移至1000 mL容量瓶中，用水定容至刻度
量取8.3 mL浓盐酸，注入1000 mL水中混匀按GB 601-88要求进行标定即可。
称取1 g甲基红和5 g溴甲酚绿加入乙醇溶解后，转移至1000 mL容量瓶中用乙醇定容至刻度。
取具有代表性的试样用四分法缩减至200 g粉碎至60目，装叺密封容器中
吸取上清液 15 mL, 放入消化管中, 按照GB/T 凯氏定氮法测定试样中可溶性蛋白质的含量。同时按照GB/T 凯氏定氮法测定试样中粗蛋白质的含量。
试样中蛋白质溶解度的计算按照下式进行计算：

C——盐酸标准溶液浓度mol/L；


V2 ——滴定试样时所需标准酸溶液体积（mL）；


V1 ——滴定空皛时所需标准酸溶液体积（mL）；


V ——试样分解液蒸馏用体积（mL）。

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