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有关POD的问题，求各位高手指教！
我做的实验有三种植物的POD测出来是负值，千日红、银边草和太阳花，请问有相关研究的吗？能否帮忙告诉测出负值的原因和解决办法呢？求赐教！:work:
我在第一次测定POD的时候也出现过负值，但是只是局限于第一次。第二次再测得时候数据就没有哦出现过负值。第一个可能就是手生，不熟练。再一个就是测定过程中出现误差，导致出现负值，给你一份详细的POD测定方案以及测定过程中的注意事项。仔细看看.经供参考。
二&&愈创木酚过氧化物酶（POD）活性的测定----愈创木酚法
【实验原理】
　　　在过氧化物酶催化下，H2O2将愈创木酚氧化成茶褐色产物。此产物在470nm处有最大光吸收，故可通过测470nm下吸光值变化测定过氧化物酶活性。
【仪器、材料与试剂】
（一）仪器
　　　1. 分光光度计& &&&2. 台式离心机
（二）材料
　　　1. 磷酸氢二钠　2. 磷酸二氢钠
　　　3. 2-甲氧基酚　4. 30％H2O2
　　　5. 陶瓷小研钵　6. 2ml 离心管
（三）试剂
　　　1.&&0.2mol/L磷酸缓冲液(pH6.0)：
　　　A母液：0.2mol/L磷酸氢二钠溶液: 取Na2HPO4·12H2O（分子量358.14）71.7g；
　　　B母液：0.2mol/L磷酸二氢钠溶液：取NaH2PO4·2H2O（分子量156.01）31.2g。
分别用蒸馏水定容到1000ml。
0.2mol/L磷酸缓冲液(pH6.0)的配制：分别取A母液(Na2HPO4 )12.3ml和B母液(NaH2PO4 ) 87.7ml混匀即为100ml PBS(0.2M，pH6.0)；
【实验步骤】
　　　1. 酶液提取&&
　　　称取0.2g（可视情况调整）样品（新鲜叶片或根系）洗净后置于预冷的研钵中，分三次加入1.6ml （0.6 ml、0.5 ml、0.5 ml）50mmol/L预冷的磷酸缓冲液（pH7.8）在冰浴上研磨成匀浆，转入离心管中在4℃、12000g下离心20min，上清夜即为酶粗提液。
　　　2. 酶活性测定
　　（1）反应混合液的配制：取50mlPBS（pH6.0，0.2M）缓冲液于烧杯中，加入28μl愈创木酚（2-甲氧基酚）于磁力搅拌器上加热搅拌，直至溶解愈创木酚溶解，待溶液冷却后加入19μl 30％的H2O2，混匀后保存于冰箱中备用。
　（2）酶活性测定：取3ml反应液并加入40μl酶液后测定OD470值在40秒的变化。以PBS代替酶液为对照调零，
　　　3. 计算结果
　　　以每min OD值变化（升高）0.01为1个酶活性单位（u）。，按下式计算活性
　　　POD活性=（ΔA470×Vt）/（W×Vs×0.01×t）& &(u/g FW)
ΔA470：为反应时间内吸光度的变化；W为样品鲜重(g)；t为反应时间(min)；Vt为提取酶液总体积（ml）；Vs为测定时取用酶液体积（ml）。
【注意事项】
　　　1.&&反应液配制时由于愈创木酚难溶，应加热一段时间。加入H2O2前注意溶液冷却，防止H2O2的挥发。
　　　2.&&由于该反应迅速，加入酶液要立即进行吸光值的测定。
J.L. Muñoz-Muñoz, F. García-Molina, P.A. García-Ruiz, E. Arribas, J. Tudela, F. García-Cánovas, J.N. Rodríguez-López, Enzymatic and chemical oxidation of trihydroxylated phenols, Food Chemistry, Volume 113, Issue 2, 15 March 2009, Pages 435-444
F. Quintanilla-Guerrero, M.A. Duarte-Vázquez, B.E. García-Almendarez, R. Tinoco, R. Vazquez-Duhalt, C. Regalado, Polyethylene glycol improves phenol removal by immobilized turnip peroxidase,Bioresource Technology, Volume 99, Issue 18, December 2008, Pages
1. 酶液提取&&
　　　称取0.2g（可视情况调整）样品（新鲜叶片或根系）洗净后置于预冷的研钵中，分三次加入1.6ml （0.6 ml、0.5 ml、0.5 ml）50mmol/L预冷的磷酸缓冲液（pH7.8）在冰浴上研磨成匀浆，转入离心管中在4℃、12000g下离心20min，上清夜即为酶粗提液。
& &楼主您好！请问一下“预冷的磷酸缓冲液（pH7.8）”这个溶液怎么制取？
（2）酶活性测定：取3ml反应液并加入40μl酶液后测定OD470值在40秒的变化。以PBS代替酶液为对照调零，
& && && && && && &再问一个，“40μl酶液”是上文“上清夜即为酶粗提液”中的酶粗提液吗？ : Originally posted by 我的LJ at
1. 酶液提取&&
　　　称取0.2g（可视情况调整）样品（新鲜叶片或根系）洗净后置于预冷的研钵中，分三次加入1.6ml （0.6 ml、0.5 ml、0.5 ml）50mmol/L预冷的磷酸缓冲液（pH7.8）在冰浴上研磨成匀浆，转入离心管中在 ... PH7.8的磷酸缓冲液是22.875mlA母液+2.125mlB母液，定容至100ml，再多的话同比例增加。放4℃冰箱里几个小时候就是预冷了。
40μl酶液就是酶的那个上层清液 : Originally posted by haha at
PH7.8的磷酸缓冲液是22.875mlA母液+2.125mlB母液，定容至100ml，再多的话同比例增加。放4℃冰箱里几个小时候就是预冷了。
40μl酶液就是酶的那个上层清液... 谢谢！原来是这样的:D : Originally posted by 凌浩 at
我在第一次测定POD的时候也出现过负值，但是只是局限于第一次。第二次再测得时候数据就没有哦出现过负值。第一个可能就是手生，不熟练。再一个就是测定过程中出现误差，导致出现负值，给你一份详细的POD测定方案以及 ... 请问一下楼主，你有没有用紫外吸收法测定CAT 的详细方法啊？ : Originally posted by Miss木子 at
请问一下楼主，你有没有用紫外吸收法测定CAT 的详细方法啊？... CAT的测定我一直都是用的这个方法，你看跟你的额一样不？如果一样的话，还可以讨论一下……
【实验原理】
过氧化氢酶(Catalase,CAT),是一种广泛存在于生物组织中的氧化还原酶，它能催化H2O2分解为水和氧气,清除组织中的过氧化氢。H2O2在240nm处有一个吸收高峰,其吸光度与H2O2的含量成正比,过氧化氢酶能分解过氧化氢,使反应溶液吸光度(A240)随反应时间而降低。单位时间内吸收的差值就是过氧化氢酶的活性。
【仪器、材料与试剂】
（一）仪器
1. 分光光度计
2. 台式离心机
（二）材料
植物叶片等植物材料
（三）试剂
1&&0.15mol/L磷酸缓冲液（pH7.0）： 取A母液(Na2HPO4) 228.75 ml 和B母液(NaH2PO4) 146.25 ml混合后用蒸馏水定容至500ml。
2&&0.3％H2O2: 吸取0.5ml 30％的H2O2，用PBS (pH7.0)定容至50ml。
【实验步骤】
1. 酶液提取&&
称取0.2g（可视情况调整）样品（新鲜叶片或根系）洗净后置于预冷的研钵中，分三次加入1.6ml （0.6 ml、0.5 ml、0.5 ml）50mmol/L预冷的磷酸缓冲液（pH7.8）在冰浴上研磨成匀浆，转入离心管中在4℃、12000g下离心20min，上清夜即为CAT粗提液。
2 酶活性测定
（1）反应混合液的配制：取100ml PBS（0.15M，pH7.0），加入0.1546ml 30%的H2O2摇匀即可。
（2）取2.9 ml反应液加入0.1ml酶液，以PBS为对照调零，测定OD240值在40s内的变化。
3 结果计算：酶活性计算：以每min OD值减少0.01为1个酶活性单位（u）。
CAT=/（W×Vs×0.01×t）& & (u/g FW)
ΔA240：为反应时间内吸光度的变化；W为样品鲜重(g)；t为反应时间(min)；Vt为提取酶液总体积（ml）；Vs为测定时取用酶液体积（ml）。 : Originally posted by 凌浩 at
CAT的测定我一直都是用的这个方法，你看跟你的额一样不？如果一样的话，还可以讨论一下……
【实验原理】
过氧化氢酶(Catalase,CAT),是一种广泛存在于生物组织中的氧化还原酶，它能催化H2O2分解为水和氧气,清除组 ... 你好，感谢你的分享，我有两个问题：1、”加入0.1546ml 30%的H2O2摇匀即可“，加入的是30%的H2O2吗？那为什么还要配制0.3%的H2O2？
2、调零的PBS，PH是7.8的那个吗？期待回复:D : Originally posted by
你好，感谢你的分享，我有两个问题：1、”加入0.1546ml 30%的H2O2摇匀即可“，加入的是30%的H2O2吗？那为什么还要配制0.3%的H2O2？
2、调零的PBS，PH是7.8的那个吗？期待回复:D... 调零的PBS应该是pH7.0那个 : Originally posted by
你好，感谢你的分享，我有两个问题：1、”加入0.1546ml 30%的H2O2摇匀即可“，加入的是30%的H2O2吗？那为什么还要配制0.3%的H2O2？
2、调零的PBS，PH是7.8的那个吗？期待回复:D... 请问你做出来了吗？我也想知道到底是30%的呢还是0.3%的请赐教。感激不尽。 您好！你测的那几种酶？测的怎么样了？ 请问一下，要是我用液氮研磨的话会影响结果吗？？？？ : Originally posted by
您好！你测的那几种酶？测的怎么样了？ 你也测这几个酶吗？亲?可以互相学习一下哈。加我qq有关链轮传动包角大小的问题，请熟悉的朋友指教，谢谢！_百度知道
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中下部的链轮包角90度，上面二个包角120度。
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上面第二个应该是135度吧。如果都从切点延长出来的话是一个三角形，上面的角是180-90-45=45.那么链轮的包角应该是四边形360-90×2-45=135
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出门在外也不愁请问大家一个有关视频播放的问题，望大家指教，谢谢！_百度知道
查下视频的格式，然后百度下这种格式的播放器，下载安装后应该就能播放，可以试试
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出门在外也不愁ps6每一次安装就完成不，和系统哪里的设置有关？？请高手指教,谢谢！！_百度知道
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这个应该是朋友使用的安装程序有问题，你可以更换个别的版本的来安装使用。
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你好。应用程序无法安装或安装了的应用程序不能运行_百度经验请参考：《百度经验》《应用程序无法安装或安装了的应用程序不能运行》如果有用，请点“有用”和“关注。
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出门在外也不愁查看: 4594|回复: 11
关于新办企业税收优惠政策--与税务局沟通，请各位指教
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本帖最后由 cpaweixl 于
19:57 编辑
我公司于2006年7月成立，是一家民营化工企业，2010年经审批，享受西部大开发税收优惠政策，现在企业符合《产业结构调整指导目录（2005年版）》、《产业结构调整指导目录（2011年版）》、《外商投资产业指导目录（2007年修订）》和《中西部地区优势产业目录（2008年修订）》范围，正在根据国家税务总局公告2012年第12号文件要求进行2011年度所得税减免备案。另外，我公司根据桂政发〔2010〕76 号广西壮族自治区人民政府关于印发进一步促进民营经济发展的若干措施的通知：六、加大对民营经济的税收优惠（二十八）减免企业所得税地方分享部分。对新办的以国家鼓励类产业项目为主营业务，主营业务收入占全部收入的50%以上的民营企业，自项目取得第一笔经营收入所属纳税年度起至2015 年12 月31 日止，予以免征企业所得税地方分享部分。我公司认为我公司符合上述免征地方分享部分所得税的条件，向主管税务机关提出申请，但主管税务机关称桂政发〔2010〕76 号所指的新办企业应是该文下文之日（）后成立的企业，我公司成立于2006年7月，因此认为我公司不符合免税条件。我们认为，桂政发〔2010〕76 号虽是地方政策的文件，但文中所指的新办企业应以财政部
国家税务总局关于享受企业所得税优惠政策的新办企业认定标准的通知（财税[2006]1号）中的口径为准，不应随意解释为下文后成立的企业，否则税法就失去了应有的统一性和严肃性，而且，如果是以下文后成立的企业为新办企业，对下文前从事同一行业的企业是不公平的，这也和税法上的公平原则相违背，会导致这些企业失去竞争力，从而会注销原来的老企业，重新注册新公司谋取税收优惠，这显然不是76号文的立法意图。
财政部 国家税务总局关于享受企业所得税优惠政策的新办企业认定标准的通知
财税[2006]1号
颁布时间：发文单位：财政部 国家税务总局
各省、自治区、直辖市、计划单列市财政厅（局）、国家税务局、地方税务局，新疆生产建设兵团财务局，财政部驻各省、自治区、直辖市、计划单列市财政监察专员办事处：
　　随着社会经济的不断发展和企业改革的逐步深化，出现了享受企业所得税优惠政策的新办企业认定标准不够明确的问题。经研究，现对享受企业所得税定期减税或免税的新办企业的认定标准重新明确如下：
　　一、享受企业所得税定期减税或免税的新办企业标准
　　1.按照国家法律、法规以及有关规定在工商行政主管部门办理设立登记，新注册成立的企业。
　　2.新办企业的权益性出资人（股东或其他权益投资方）实际出资中固定资产、无形资产等非货币性资产的累计出资额占新办企业注册资金的比例一般不得超过25％。
　　其中，新办企业的注册资金为企业在工商行政主管部门登记的实收资本或股本。非货币性资产包括建筑物、机器、设备等固定资产，以及专利权、商标权、非专利技术等无形资产。新办企业的权益性投资人以非货币性资产进行出资的，经有资质的会计（审计、税务）事务所进行评估的，以评估后的价值作为出资金额；未经评估的，由纳税人提供同类资产或类似资产当日或最近月份的市场价格，由主管税务机关核定。
　　二、新办企业在享受企业所得税定期减税或免税优惠政策期间，从权益性投资人及其关联方累计购置的非货币性资产超过注册资金25％的，将不再享受相关企业所得税减免税政策优惠。
　　三、本通知自文发之日起执行。国家税务局、地方税务局关于新办企业的具体征管范围按本通知规定的新办企业标准认定。对文发之前，国家税务局或地方税务局实际征管的企业，其征管范围不作调整，已批准享受新办企业所得税优惠政策的新办企业，可按规定执行到期。
　　四、《国家税务总局关于企业所得税几个具体问题的通知》（国税发[号）中，有关“六、新办企业的概念”及其认定条件同时废止。
　　财政部国家税务总局
二○○六年一月九日
本帖最后由 cpaweixl 于
16:38 编辑
无人关注还是过于简单？
本帖最后由 haihan235 于
15:24 编辑
不是没有人关注，关键是专家们看不懂。从2006年到现在，专家们一直在纠结这个文件。总是不明白这个文件所表达的所得税精神。
你可否发表一下高见
首先你肯定不是新办企业。
其次地方分享部分免税是否一定要新办企业，这个地方定。
现在人家说不行有道理，因为文件就写的是新办才行。虽然道理上有点讲不通。
看看税务局有无具体细则吧。
另外看看所得税法29条及财税【2008】21号第三条，看看是否对你有启示。
意见：首先，桂政发〔2010〕76 号文中所指的新办企业应以财政部 国家税务总局关于享受企业所得税优惠政策的新办企业认定标准的通知（财税[2006]1号）中的口径为准；其次，对新办的以国家鼓励类产业项目为主营业务，主营业务收入占全部收入的50%以上的民营企业，自项目取得第一笔经营收入所属纳税年度起至2015 年12 月31 日止，予以免征企业所得税地方分享部分（除非76号文明指，否则在此期间均可享受）。
广西壮族自治区国家税务局& & & & 答复时间：& & & &&& 22:53:08
以上是自治区国税局的回复，也比较模糊，还请各位解读一下
新办企业，应该从时间和设立条件两方面理解，一从时间上来说， 是以政府文件下文之后成立的公司，二、设立条件方面符合财税[2006]1号的规定，不知这种理解是否正确
从你描述的情形看，可以这么考虑！&
cpaweixl 发表于
回复 haihan235 的帖子
你可否发表一下高见
该文件反映了一个所得税上的精神和灵魂——所有权属，总局曾经这问题一度意见不一，自从828号文出台后，就明确了。
haihan235 发表于
该文件反映了一个所得税上的精神和灵魂——所有权属，总局曾经这问题一度意见不一，自从828号文出台后，就 ...
能否说得清楚一些
视野专家能否给些意见?
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