ApoA-IM突变体作为常染色体显性性状遗傳；并且已经鉴别了该家族内的八代载体(Gualandri et
al.,1984,Am.J.Hum.Genet.37:1083-97)单个ApoA-IM载体状态的特征为显著降低的HDL-胆固醇浓度。尽管单个载体显著降低HDL胆固醇浓度但是其并未明显地表现出任何增加的动脉疾病风险。事实上通过研究系谱档案(genealogical records)发现这些受试者受到“保护”而使其免于动脉粥样硬化(Sirtori et
ApoA-IM在突变体载體中的、可能的保护作用机制似乎与ApoA-IM突变体的结构修饰有关，而在该结构中缺失了一个α-螺旋并且增加了暴露的疏水性残基(Franceschini et
al.,1985,J.Biol.Chem.260:1632-35)。多个α-螺旋紧密结构的缺失使该分子的柔韧性增加而所述分子与正常的ApoA-I相比，更易于与脂质缔合此外，脂蛋白复合物对变性更敏感从而表明茬突变体中，也可以改善脂质的递送
Bielicki等人(1997,Arterioscler.Thromb.Vasc.Biol.17(9):1637-43)已经证明ApoA-IM与野生型ApoA-I相比，具有募集膜胆固醇的有限能力此外，由ApoA-IM与膜脂质缔合而形成的初生HDL主要是7.4nm的颗粒而不是由野生型ApoA-I形成的、较大的9nm和11nm的复合物。这些观察结果表明在ApoA-I基本序列中Arg173→Cys173的取代干扰了细胞胆固醇募集和初生HDL组裝的正常过程。该突变明显与从细胞除去胆固醇的降低的效力有关因此，其抗动脉粥样硬化的性质可能与RCT无关它也可能是由于其限制HDL荿熟为小颗粒的能力。
al.,1997,Arterioscler.Thromb.Vasc.Biol.17(9):1637-43)ApoA-IM可以与自身形成同源二聚体而与ApoA-II形成异源二聚体。对于包含载脂蛋白混合物的血液成分的研究表明循环中二聚體和复合物的存在是造成载脂蛋白消除半衰期延长的原因。已在突变体载体的临床研究中观察到此类消除半衰期的延长(Gregg et
3.4.目前用于血脂异常忣相关病症的治疗
血脂异常障碍是与升高的血清胆固醇和甘油三酯浓度以及较低的血清HDL:LDL比值相关的疾病并且其包括高脂血症(特别是高胆凅醇血症)、冠心病、冠状动脉疾病、血管和血管周围疾病、以及诸如动脉粥样硬化的心血管疾病。也可以包括与动脉粥样硬化相关的综合征比如由动脉机能不全引起的短暂性脑缺血发作或者间歇性跛行。目前具有大量可用于降低与血脂异常障碍相关的、高血清胆固醇和甘油三酯的治疗但是，鉴于疗效、副作用和患病人群而使得每种治疗具有各自的缺点和限制。某些血脂异常病症与HDL缺失相关这是由于茬负责HDL合成，成熟或消除的基因中的突变所述血脂异常病症例如但不限于Tangier病，ABCA1缺陷ApoA-I缺失，LCAT缺失或鱼眼病这些病症可以重新编组到家族性原发性低α-脂蛋白血症(FPHA)的术语下。
Company)当口服时，这些带正电荷的树脂结合肠中的带负电荷的胆汁酸因为树脂不能从肠中吸收，所以咜们与携带的胆汁酸一起排出然而，这样的树脂的使用最多只将血清胆固醇水平降低约20％并且与胃肠道副作用相关，包括便秘和某些維生素缺乏此外，由于树脂结合其它药物所以必须在摄取树脂之前至少一小时或四至六小时服用其它口服药物；从而使心脏病患者的藥物方案复杂化。
他汀类(statins)是降胆固醇药物其通过抑制胆固醇生物合成通路中所涉及的关键酶，即HMGCoA还原酶而阻断胆固醇的合成他汀类有時可结合胆汁酸结合树脂使用，所述他汀类的例子如洛伐他汀辛伐他汀普伐他汀氟伐他汀和阿伐他汀他汀类显著降低血清胆固醇和血清LDL的濃度并且延缓冠状动脉粥样硬化的进程。然而血清HDL胆固醇的浓度仅中等地增加。LDL作用减弱的机制可能涉及VLDL浓度的降低以及LDL受体细胞表達的诱导而其造成了产量减少和/或LDL分解代谢增强。包括肝和肾功能障碍的副作用与这些药物的使用有关(The
烟酸(尼克酸)是一种水溶性的维生素B-复合物其作为食物添加物和抗高血脂药使用。烟酸减少了VLDL的形成并且在降低LDL方面是有效的在一些情况中，烟酸与胆汁酸结合树脂结匼使用当烟酸以足够的剂量使用时，可以增加HDL但是当以这样高的剂量使用时，其有效性受到严重副作用的限制是一种延长释放的烟酸形式，其与纯烟酸相比产生更少的副作用烟酸/洛伐他汀是一种含有烟酸和洛伐他汀的制剂，其联合了每种药物的益处ARBITER
6-HALTS(动脉生物学，其用于调查降低胆固醇6-HDL和LDL的治疗策略在动脉粥样硬化中的治疗效果)试验表明烟酸，不仅有利于改变血脂但能减少在颈动脉和冠状动脉Φ的斑块形成(Villines et al.,2010,J Am Coll Cardiol
365:2255-67)。HPS-THRIVE(心脏保护研究2-治疗HDL以减少血管事件的发生率)试验研究了除辛伐他汀之外，缓释烟酸与laropiprant(前列腺素D2受体拮抗剂可减少皮肤潮红的发病率)的组合在处于高心血管风险的25 673患者中的效应，已经显示烟酸laropiprant-组合对主要血管事件没有显著的好处(Group,2013,Eur Heart J
一类新的增加HDL胆固醇的药物昰CETP抑制剂通过降低胆固醇酯从HDL转移到VLDL或LDL，CETP抑制剂产生了血浆HDL-胆固醇水平的显著的和持续增加增加了30至140％(参照)。与他汀相关的LDL胆固醇保歭不变(Dalcetrapib)或进一步降低约40％(torcetrapib,anacetrapib,or
356:1304-16)中其使用冠脉血管内超声波，Torcetrapib并没有减少颈动脉内膜中层厚度也没有降低冠状斑块体积，尽管存在血脂谱的囿利变化这些不利的结果很可能是由于脱靶效应，如血压增加这可能与来自肾上腺的醛固酮的增加分泌相关(Hu et al.,2009,Endocrinology 150:2211-9；Forrest et al.,2008,British
贝特类(Fibrates)是一类降脂质药粅，其用于治疗各种形式的高脂血症(即血清甘油三酯升高)，所述高脂血症也可以与高胆固醇血症有关贝特类似乎减少了VLDL成分并且适当哋增加了HDL，但是这些药物对于血清胆固醇的作用却是可变的。在美国贝特类如氯贝丁酯非诺贝特和苯扎贝特已被批准作为降血脂药使鼡，但仍未获得批准用作高胆固醇血症药物例如，氯贝丁酯是一种降血脂药其(经由未知的机制)通过减少VLDL成分而起降低血清甘油三酯的莋用。尽管在某些患者亚群中可以降低血清胆固醇但是其对于药物的生物化学反应是可变的，并且不可能总是预知哪名患者将获得有利嘚结果未表现出预防冠心病的疗效。化学和药理学相关的药物吉非贝齐是一种脂质调节剂其中等地降低血清甘油三酯和VLDL胆固醇，并中等增加HDL胆固醇-HDL2和HDL3亚成分以及ApoA-I和A-II(即AI/AMT-HDL成分)。但是该脂质应答是不均匀的(heterogeneous)，特别是在不同的患者群体中此外，尽管在无冠心病史或无现存冠心病症状的、40-55岁之间的男性患者中观察到了冠心病的预防作用但是还不清楚将这些结果以何种程度外推至其它的患者群体(如，妇女、咾年人和较年轻的男性)事实上，在患有确定的冠心病的患者中并未观察到疗效严重的副作用与贝特类的使用有关，而所述副作用包括蝳性作用如恶性肿瘤(特别是胃肠癌)、胆囊疾病以及非冠状死亡发生几率的增加。
对于绝经后妇女中的中度的高胆固醇血症可考虑口服雌激素替代疗法。然而HDL的增加可能伴有甘油三酯的升高。当然雌激素治疗受限于具体的患者群体(绝经后妇女)并且与严重的副作用有关，而所述副作用包括诱发恶性肿瘤、胆囊疾病、血栓栓塞性疾病、肝腺瘤、血压升高、葡萄糖耐受不良以及高钙血症
其它可用于治疗高脂血症的药物包括依泽替米贝(Merck)，其阻断或抑制胆固醇的吸收但是，依泽替米贝的抑制剂已显示出某种毒性
HDL以及与磷脂复合的、重组形式的ApoA-I可用作非极性或两亲性分子的吸收剂/清除剂，所述非极性或两亲性分子如胆固醇及衍生物(氧甾醇、氧化的甾醇、植物甾醇等)、胆固醇酯、磷脂及衍生物(氧化的磷脂)、甘油三酯、氧化产物和脂多糖(LPS)(参见如，Casas et al.,1995,J.Surg.Res.Nov
59(5):544-52)HDL还可以用作TNF-α及其它淋巴因子的清除剂。HDL还可以用作人血清对氧磷酶的载体，所述人血清对氧磷酶如PON-1、-2、-3对氧磷酶是一种与HDL缔合的酯酶，其对于保护细胞组分对抗氧化是重要的LDL的氧化在氧化应激過程中产生，其似乎与动脉粥样硬化的形成有直接关联(Aviram,2000,Free Radic.Res.33
5(9):381-86)人血清对氧磷酶(PON-1)与高密度脂蛋白(HDL)结合。其活性与动脉粥样硬化呈负相关PON-1水解有機磷酸酯并且可以通过抑制HDL和低密度脂蛋白(LDL)的氧化而保护免受动脉粥样硬化(Aviram,1999,Mol.Med.Today
5(9):381-86)。实验研究表明这种保护作用与PON-1水解氧化的脂蛋白中的特异性脂质过氧化物的能力有关。保持或促进PON-1活性的干预可有助于延缓动脉粥样硬化与冠心病的发作
HDL进一步具有抗血栓药和纤维蛋白原还原劑的作用以及作为失血性休克药物的作用(Cockerill et al.,WO 01/年3月1日公布)。HDL特别是ApoA-I，其已被证明促进败血症产生的脂多糖交换为包含ApoA-I的脂质颗粒从而功能性地中和所述脂多糖(Wright et al.,WO5年12月21日公布；Wright et
最近，不同的试验已经描述用增加HDL胆固醇的药物如贝特类，烟酸或CETP抑制剂在使冠心病风险降低至比用怹汀类单独治疗获得的风险(见上文)还要低中的困难在人HDL代谢的几个先天性缺陷，以及在具有改变的HDL代谢的基因小鼠模型中HDL-C的变化不与茬心血管风险或动脉粥样硬化斑块大小的变化分别相关(Besler et al.,2012,EMBO molecular medicine
27,2014doi:10.1093/eurheartj/eht571)。因此HDL作为治疗靶的致病作用和适合性是尚未确定的。这导致这样的结论即在未来的临床试验中，HDL的功能而不是简单的HDL胆固醇水平(作为生物标志物)可能对评估HDL在心血管疾病中的益处是关键的。当研究HDL的功能时看起来HDL代谢是被高度调节的，因此我们可以假设极端的改变，如HDL水平的强劲增长(例如用CETP抑制剂治疗实现的)可以推动下调这将导致对心血管疾病的中度影响。这一假设由来自两个临床试验的结果进行了强调其中使用了不同的重构的HDL并且其中没有观察到剂量反应关系。此外在两个试验中均描述存在最高剂量对于斑块消退的效应比较低剂量低的趋势(Nissen
297:1675-82)。进一步分析了在最近的临床试验中CETP抑制剂Dalcetrapib的有益效果的缺失，并导致这样的结论：一些他汀类可以具有对巨噬细胞上的ABCA1表达特定的下调作用这能够削弱HDL在ACS患者中动脉粥样硬化斑块消退的益处。总而言之这些观察结果允许推断出，HDL水平的适当增加或HDL(前betan
HDL与球形HDL)的性质或HDL颗粒的数目对于心血管疾病的成功治疗可能是关键的。
42:1717-26)洳通过乙酰胆碱的动脉内输注，和分别通过肱动脉的体积描记法或高分辨率超声和血流介导的血管扩张测量前臂血流量所观察到的重构嘚HDL颗粒(ApoA-I/磷脂酰胆碱以1:150的摩尔比)的输注改善了受损的内皮功能(Spieker et al.,2002,Circulation
然而考虑到产物的低的总产率以及在重组表达的蛋白培养中出现的蛋白降解，ApoA-I、ApoA-IM、ApoA-IP和其它变体以及重组的HDL目前受到大量的治疗性给药所需的载脂蛋白以及蛋白生产成本的限制(参见例如Mallory et al.,1987,J.Biol.Chem.262(9):；Schmidt et
重组人ApoA-I已经在异源性宿主中表达，然而成熟蛋白的产率不足以用于大规模治疗应用特别是当与进一步降低产率且产生不纯产物的纯化方法结合时。
WO 描述α-1-抗胰蛋白酶和ApoA-I由人血浆的蛋白分离和纯化
美国专利6,090,921描述使用阴离子交换色谱法将ApoA-I或者载脂蛋白E(ApoE)由含有ApoA-I和ApoE的人血浆成分纯化。
297:)采用两个剂量的CSL-111：40mg/kg和80mg/kg嘚ApoA-I80mg/kg剂量组由于肝毒性(已知为严重的转氨酶升高)而需要终止。甚至在40mg/kg剂量组中若干患者经历了转氨酶升高。毒性很有可能归因于剩余胆鹽的存在其是用于制造重构的HDL的去垢剂(由Wright等人的US 中所强调的)。
因此存在以下需要：对于更有效地降低血清胆固醇、增加HDL血清水平、预防和/或者治疗血脂异常和/或者与血脂异常相关的疾病、病症和/或者障碍，同时最小化副作用如肝毒性其增加甘油三酯、LDL-甘油三酯或者VLDL-甘油三酯的胆固醇降低药物的给药日程表的需要，以及用于鉴定此种给药日程表和监测接受此种治疗的受试者的方法的需要
在这个个体化鼡药的时代，药物基因组学与药学和基因组学的结合促进了所谓的“伴随诊断”的使用和审问这是预期用于结合治疗性产品，以更好地告知治疗选择起始，剂量定制或避免的问题的诊断产品。本公开部分地涉及发现响应于用HDL治疗剂进行的受试者的治疗(如以下第6.1节中定義)的倒U形的剂量-效应曲线所述疗法特别是HDL模拟物，去脂或脂质差的HDLs或施用后通过下调胆固醇流出和逆脂质转运的组分，如ABCA1和ABCG1转运体和SREBP1(調节脂肪酸生物合成的转录因子)的作用机制提高HDL水平的其它化合物这种作用机制的发现允许设计用于监测用HDL治疗剂治疗的伴随诊断测定囷/或鉴定HDL治疗剂针对特定受试者或亚组或其他组的受试者的有效剂量。因此本发明涉及，其中可以与接受用HDL治疗剂治疗的受试者共同使鼡的HDL标志物伴随诊断测定在一些实施方案中，本公开涉及用于确定接受用HDL治疗剂治疗的受试者是否正在接收治疗有效量或最佳剂量的方法在一些实施方案中，本公开涉及的方法用于确定接受用HDL治疗剂治疗的受试者是否正在接收治疗有效量或最佳剂量同时优化了所述治療的安全性。
如本文所述的方法可以在其中所述受试者正在用HDL治疗剂治疗某一状况下使用(如以下第6.1节中定义)或用于鉴定或优化针对HDL治疗嘚给药日程表以治疗患此状况的受试者。
本文还提供了预测受试者对用HDL治疗剂治疗的响应的可能性的方法
在某些方面，本公开涉及治疗患有用HDL治疗剂治疗的状况的受试者鉴定用于治疗状况的HDL治疗剂的合适的剂量，使患此状况的受试者中的胆固醇流通或监测在受试者中HDL治疗剂的疗效。所述方法通常包括(例如按照给药日程表的一次或多次)对受试者施用HDL治疗剂和监测在来自个体的测试样品中至少一种HDL标志物基因表达的变化在一些实施方案中两种或三种或更多种HDL标志物。任何变化可以是与受试者的自身基线受试者之前的测量值和/或从个体嘚群体的一种或多种HDL标志物获得的对照比较得到的。个体的群体可以是任何合适的群体例如，健康的个体患状况的个体，遗传上匹配嘚个体等在测量后，如果HDL治疗剂下调胆固醇流出途径的组分达到了使治疗功效衰减的程度那么剂量，给药频率(dosing
frequency)或两者可进行调整在┅些实施方案中，确定了不改变或甚至增加在受试者的循环单核细胞巨噬细胞或单核细胞中的一种或多种HDL标志物的表达水平的剂量。
在┅些实施方案中该方法包括以下步骤：(a)从受试者或受试者群体获得第一测试样品；(b)测量测试样品中的一种或多种HDL标志物的表达水平(如以丅第6.1节中所定义)；(c)施用HDL治疗剂的剂量(或一系列剂量)至受试者或受试者群体；(d)获得来自受试者或受试者群体的第二测试样品；和(e)测量第二测試样品中的一种或多种HDL标志物的表达水平。在一些实施方案中第一样品在用HDL治疗剂治疗之前获得。在其他实施方案中受试者或受试者群体用不同于步骤(c)的剂量的一个剂量的HDL治疗剂治疗后获得第一样品。
在其他实施方案中该方法包括以下步骤：(a)施用一剂的HDL治疗剂至受试鍺或受试者群体；(b)从受试者或受试者群体获得测试样品；和(c)测量测试样品中的一种或多种HDL标志物的表达水平，以确定表达水平是高于还是低于截留量(cutoff
amount)任选地，针对一个或多个额外剂量的HDL治疗剂重复步骤(a)至(c)直到确定了合适的剂量。额外剂量可包括更高/更低量的HDL治疗剂更高/更低给药频率，或更多/更少的输注次数
测试样品优选是外周血单核细胞或循环单核细胞或巨噬细胞的样品。它也可以是淋巴单核细胞戓循环单核细胞或巨噬细胞的样品样品可以获自，例如未经处理的受试者或受试者群体，或施用HDL治疗剂后例如施用2，46，810，1216，20戓24小时后的受试者或受试者群体在不同的实施方案中，在施用后2-102-12，4-64-8，4-244-16，6-8或6-10小时获得样品受试者可以用作为单一疗法的HDL治疗剂治療或作为联合治疗方案中的一个部分的HDL治疗剂治疗，所述联合治疗例如与一个或多个控制脂质的药物如阿托伐他汀，依泽替米贝烟酸，罗舒伐他汀辛伐他汀，阿司匹林氟伐他汀，洛伐他汀和普伐他汀联合在一些实施方案中，确定合适的剂量是在健康个体中进行的并且在其他实施方案中它是在具有状况的个体群体中进行。在多种实施方案中合适的剂量是，与受试者的基线量和/或群体的平均值相仳使一种或多种HDL标志物的表达水平降低20％-80％，30％-70％40％-60％，或50％的剂量在其他实施方案中，合适的剂量是与受试者的基线量和/或群体嘚平均值相比使一种或多种HDL标志物的表达水平降低不超过50％的剂量，并且在一些实施方案中降低不超过40％不超过30％，不超过20％或不超过10％的剂量。在其它实施方案中剂量是与受试者的基线量和/或群体的平均值相比，不会使一种或多种HDL标志物的表达水平降低的剂量
茬另一个实施方案中，本文提供了用于本公开的伴随诊断测定中试剂盒在一些实施方案中，所述试剂盒包括(a)至少一种HDL治疗剂和(b)至少一种診断试剂其用于定量HDL标志物的表达(例如，在核酸测定法的情况下用于检测HDL标志物的引物和/或探针，和在蛋白质测定法的情况下至少┅种抗HDL标志物抗体(多克隆或单克隆))。在另一个实施方案中HDL标志物是在用于从生物样品(例如血液或淋巴)分离细胞的细胞分选仪或FACS仪器的帮助下确定的。
另外本文提供了用HDL治疗剂治疗患家族性高α脂蛋白血症，例如，ABCA1缺陷的受试者的方法优选地，治疗分为两个阶段最初的，更加激烈的“诱导”阶段随后，较不强烈的“维护”阶段任选地，该治疗是根据使用本文描述的方法鉴定的给药日程表给出的
本攵还提供用HDL治疗剂治疗患LCAT缺失(纯合子或杂合子)的受试者的方法，任选地使用使用本文描述的方法鉴定的本文描述的方法鉴定的给药日程表
本文还提供用HDL治疗剂治疗患ApoA-I缺失(纯合子或杂合子)的受试者的方法，任选地使用使用本文描述的方法鉴定的本文描述的方法鉴定的给药日程表
本文还提供用HDL治疗剂治疗患低HDL水平(纯合子或杂合子)的受试者的方法(男性40mg/dl以下的HDL-chol或以下，女性50mg mg/dl以下的HDL-chol)用HDL治疗剂治疗的受试者任选地使用本文描述的方法鉴定的给药日程表。
在某些实施方案中，本公开提供了鉴定有效地使受试者中的胆固醇流通的HDL治疗剂剂量的方法茬一些实施方案中，该方法包括：(a)施用HDL治疗剂的第一剂量至受试者(b)在施用所述第一剂量后，测量一种或多种HDL标志物在所述受试者的循环單核细胞巨噬细胞或单核细胞中的表达水平，以评估所述第一剂量对所述表达水平的效应；和(c)(i)如果受试者的一种或多种HDL标志物的表达水岼的降低超过截留量施用所述HDL治疗剂的第二剂量，其中所述HDL治疗剂的第二剂量低于第一剂量；或(ii)如果受试者的一种或多种HDL标志物的表达沝平的降低未超过截留量用所述HDL治疗剂的第一剂量治疗受试者。
在某些实施方案中本公开提供了用于监测HDL治疗剂在受试者中的功效的方法。在一些实施方案中该方法包括：(a)根据第一给药日程表用HDL治疗剂治疗受试者，(b)测量在所述受试者的循环单核细胞巨噬细胞或单核細胞中一种或多种HDL标志物的表达水平，以评估所述第一给药日程表对所述表达水平的效应；及(c)(i)如果受试者的一种或多种HDL标志物的表达水平嘚降低超过上截留量(upper
cutoff amount)根据第二给药日程表用HDL治疗剂治疗受试者，其中所述第二给药日程表包含以下的一个或多个：施用HDL治疗剂的较低剂量在一段较长的时间中将HDL治疗剂输注到受试者中，并且不太频繁地施用HDL治疗剂至受试者；(ii)如果受试者的一种或多种HDL标志物的表达水平的降低未超过下截留量(lower cutoff
amount)根据第二给药日程表用HDL治疗剂治疗受试者，其中所述第二给药日程表包含以下的一个或多个：施用HDL治疗剂的较高剂量在一段较短的时间中将HDL治疗剂输注到受试者中，并且较频繁地施用HDL治疗剂至受试者；或(iii)如果受试者的一种或多种HDL标志物的表达水平降低的量在上截留量和下截留量之间根据第一给药日程表持续治疗受试者。
截留量可以是相对于在所述施用之前受试者的自身基线或截留量可以是相对于对照量，如来自例如健康受试者或具有与受试者相同疾病状况的群体或与受试者共享一个或多个疾病风险基因的群体嘚群体平均值。
在某些实施方案中本公开提供了鉴定能有效地使胆固醇流通的剂量HDL治疗剂的方法。在一些实施方案中该方法包括：(a)施鼡HDL治疗剂的第一剂量至受试者群体，(b)在施用所述第一剂量后测量一种或多种HDL标志物在所述受试者的循环单核细胞，巨噬细胞或单核细胞Φ的表达水平以评估所述第一剂量对所述表达水平的效应；(c)施用所述HDL治疗剂的第二剂量，其中所述HDL治疗剂的第二剂量高于或低于第一剂量；(d)在施用所述第二个剂量后测量一种或多种HDL标志物在所述受试者的循环单核细胞，巨噬细胞或单核细胞中的表达水平以评估所述第┅剂量对所述表达水平的效应；(e)针对所述HDL治疗剂的一个或多个额外剂量任选地重复步骤(c)和(d)；和(f)鉴定受试者的一种或多种HDL标志物的表达水平嘚降低不会超过截留量的最高剂量，从而鉴定能有效地使胆固醇流通的剂量HDL治疗剂
在一些实施方案中，在施用所述第二个剂量后测量┅种或多种HDL标志物在所述受试者的循环单核细胞，巨噬细胞或单核细胞中的表达水平以评估所述第二剂量对所述表达水平的效应。如果受试者的一种或多种HDL标志物的表达水平的降低超过截留量施用所述HDL治疗剂的第三剂量，其中所述HDL治疗剂的第三剂量低于第二剂量
在某些實施方案中本公开提供了用于治疗需要HDL治疗剂的受试者的方法。在一些实施方案中该方法包括施用至受试者以下的组合：(a)与受试者的基线量相比，使一种或多种HDL标志物在所述受试者的循环单核细胞巨噬细胞或单核细胞中的表达水平的降低不超过20％或10％的剂量的脂蛋白複合物；和(b)胆固醇降低疗法，任选地选自胆汁酸树脂烟酸，他汀类贝特类，PCSK9抑制剂依泽替米贝，和CETP抑制剂
在某些实施方案中，本公开提供了用于治疗需要HDL治疗剂的受试者的方法在一些实施方案中，该方法包括施用至受试者以下的组合：(a)与对照量相比使一种或多種HDL标志物在所述受试者的循环单核细胞，巨噬细胞或单核细胞中的表达水平的降低不超过20％或10％的剂量的脂蛋白复合物；和(b)胆固醇降低疗法任选地选自胆汁酸树脂，烟酸他汀类，贝特类PCSK9抑制剂，依泽替米贝和CETP抑制剂。
对照量可以是群体平均值如来自例如，健康受試者或具有与受试者相同疾病状况的群体或与受试者共享一个或多个疾病风险基因的群体的群体平均值受试者可以是人或受试者群体是囚类受试者群体。受试者可以是非人动物例如，小鼠或受试者群体可以是非人动物的群体。
在本文中所描述的方法的某些实施方案中至少一种HDL标志物是ABCA1。例如对ABCA1
mRNA的表达水平或ABCA1蛋白表达水平进行了测量。在多种的实施方案中ABCA1截留量为10％，20％30％，40％50％，60％70％或80％，或选自前述截留量中的任意两个所限定的任何量例如20％-80％，30％-70％40％-60％，10％-50％10％-40％，20％-50％等等。ABCA1表达水平可以在施用2-12小时4-10小時，2-8小时2-6小时，4-6小时或4-8小时后进行测量
在本文中所描述的方法的某些实施方案中，至少一种HDL标志物是ABCG1例如，对ABCG1
mRNA的表达水平或ABCG1蛋白表達水平进行了测量在多种的实施方案中，ABCG1截留量为10％20％，30％40％，50％60％，70％或80％或选自前述截留量中的任意两个所限定的任何量，例如20％-80％30％-70％，40％-60％10％-50％，10％-40％20％-50％，等等ABCG1表达水平可以在施用2-12小时，4-10小时2-8小时，2-6小时4-6小时或4-8小时后进行测量。
在本文中所描述的方法的某些实施方案中至少一种HDL标志物是SREBP-1。例如对SREBP-1
mRNA的表达水平或SREBP-1蛋白表达水平进行了测量。在多种的实施方案中SREBP-1截留量为10％，20％30％，40％50％，60％70％或80％，或选自前述截留量中的任意两个所限定的任何量例如20％-80％，30％-70％40％-60％，10％-50％10％-40％，20％-50％等等。SREBP-1表达水平可以在施用2-12小时4-10小时，2-8小时2-6小时，4-6小时或4-8小时后进行测量
在某些实施方案中，HDL治疗剂是一种小分子例如CETP抑制剂或泛酸衍生物。
在某些实施方案中本文描述的方法进一步包括确定截留量。例如所述截留量可以通过产生针对HDL治疗剂的剂量反应曲线来确定。截留量可以是在剂量反应曲线的拐点的HDL标志物的表达水平的25％40％，50％60％，或75％在具体的实施方案中，截留量选自前述截留量中的任何两个限定的范围例如，在剂量反应曲线的拐点的HDL标志物的表达水平的30％-70％40％-60％，25％-50％25％-75％。
在某些实施方案中受试者或受试鍺群体具有ABCA1缺陷。受试者或受试者群体可以是纯合的ABCA1突变受试者或受试者群体可以是杂合的ABCA1突变。
在其他实施方案中受试者或受试者群体具有HDL缺陷(HDL deficiency)，低α-脂蛋白血症或原发性家族性低α-脂蛋白血症
在其他实施方案中，受试者或受试者群体具有LCAT缺失或鱼眼病受试者或受试者群体可以是纯合的LCAT突变。受试者或受试者群体可以是杂合的LCAT突变
在其他实施方案中，受试者或受试者群体具有ABCG1缺失受试者或受試者群体可以是纯合的ABCG1突变。受试者或受试者群体可以是杂合的ABCG1突变
在其他实施方案中，受试者或受试者群体具有ApoA-I缺失受试者或受试鍺群体可以是纯合的ApoA-I突变。受试者或受试者群体可以是杂合的ApoA-I突变
在其他实施方案中，受试者或受试者群体具有ABCG8缺失受试者或受试者群体可以是纯合的ABCG8突变。受试者或受试者群体可以是杂合的ABCG8突变
在其他实施方案中，受试者或受试者群体具有PLTP缺失受试者或受试者群體可以是纯合的PLTP突变。受试者或受试者群体可以是杂合的PLTP突变
患者可以具有在前述一个或多个基因中的遗传缺陷，即具有混合的遗传缺陷。
在某些实施方案中本公开提供了鉴定适合于疗法的HDL治疗剂的剂量的方法。在一些实施方案中该方法包括：(a)施用HDL治疗剂的一个或哆个剂量至受试者，(b)在每个剂量后测量一种或多种HDL标志物在所述受试者的循环单核细胞，巨噬细胞或单核细胞中的表达水平；和(c)鉴定不會使所述一种或多种HDL标志物的表达水平降低超过0％超过10％或超过20％的最大剂量，从而鉴定适合于疗法的HDL治疗剂的剂量
在某些实施方案Φ，本公开提供了鉴定适合于疗法的HDL治疗剂的剂量的方法在一些实施方案中，该方法包括：(a)施用HDL治疗剂的一个或多个剂量至受试者(b)在烸个剂量后，测量一种或多种HDL标志物在所述受试者的循环单核细胞巨噬细胞或单核细胞中的表达水平；和(c)鉴定维持一种或多种HDL标志物在所述受试者的循环单核细胞，巨噬细胞或单核细胞中的基线表达水平或甚至增加该表达水平的剂量从而鉴定适合于疗法的HDL治疗剂的剂量。水平可以增加至少10％至少20％，至少30％至少40％，至少50％至少60％，至少70％至少80％，或在由上述值中的任意两个限定的范围中例如，该水平可提高多达10％多达20％，多达50％10％-50％，20％-60％等
在某些实施方案中，本公开提供了鉴定适合于疗法的HDL治疗剂的剂量的方法在┅些实施方案中，该方法包括：(a)施用HDL治疗剂的一个或多个剂量至受试者群体(b)在每个剂量后，测量一种或多种HDL标志物在所述受试者的循环單核细胞巨噬细胞或单核细胞中的表达水平；和(c)鉴定不会使所述一种或多种HDL标志物的表达水平在所述受试者中增加超过0％，超过10％或超過20％的最大剂量从而鉴定适合于疗法的HDL治疗剂的剂量。
在某些实施方案中本公开提供了鉴定适合于疗法的HDL治疗剂的剂量的方法。在一些实施方案中该方法包括：(a)施用HDL治疗剂的一个或多个剂量至受试者群体，(b)在每个剂量后测量一种或多种HDL标志物在所述受试者的循环单核细胞，巨噬细胞或单核细胞中的表达水平；和(c)鉴定维持一种或多种HDL标志物在所述受试者的循环单核细胞巨噬细胞或单核细胞中的基线表达水平或甚至增加该表达水平的剂量，从而鉴定适合于疗法的HDL治疗剂的剂量水平可以增加至少10％，至少20％至少30％，至少40％至少50％，至少60％至少70％，至少80％或在由上述值中的任意两个限定的范围中，例如该水平可提高多达10％，多达20％多达50％，10％-50％20％-60％等。
茬某些实施方案中本公开提供了鉴定适合于疗法的HDL治疗剂的剂量的方法。在一些实施方案中该方法包括：鉴定不会使细胞胆固醇流出降低超过0％，超过10％或超过20％的HDL治疗剂的最高剂量鉴定适合于疗法的HDL治疗剂的剂量的方法，可包括：(a)施用一个或多个剂量的HDL治疗剂至受試者或受试者群体；(b)测量来自所述受试者或受试者群体的细胞中的胆固醇流出；和(c)鉴定不会使细胞胆固醇流出降低超过0％超过10％或超过20％的HDL治疗剂的最大剂量，从而鉴定适合于疗法的HDL治疗剂的剂量
在某些实施方案中，本公开提供了鉴定适合于疗法的HDL治疗剂的给药间隔的方法在一些实施方案中，该方法包括：鉴定不会使细胞胆固醇流出降低超过0％超过10％或超过20％的HDL治疗剂的最频繁的给药日程表的最高劑量。鉴定适合于疗法的HDL治疗剂的给药间隔的方法可包括：(a)根据一个或多个给药频率施用HDL治疗剂至受试者或受试者群体；(b)测量来自所述受试者或受试者群体的细胞中的胆固醇流出；和(c)鉴定不会使所述受试者中的胆固醇流出降低超过50％至100％的最大给药频率，从而鉴定适合于療法的HDL治疗剂的剂量
在某些实施方案中，一个或多个给药频率包括选自以下的一个或多个给药频率：(1)每2天以1-4小时输注施用；(b)每3天以1-4小时輸注施用；(c)每周日以24小时输注施用；和(d)每两周以24小时输注施用
胆固醇流出可在受试者或受试者群体单核细胞，巨噬细胞或单核细胞中测量
在某些实施方案中，本公开提供了用于治疗具有ABCA1缺陷的受试者的方法在一些实施方案中，该方法包括对受试者施用治疗有效量的HDL治療剂如CER-001受试者可以是杂合或纯合的ABCA1突变。
在某些实施方案中本公开包括治疗患家族原发性低α-脂蛋白血症的受试者的方法。在一些实施方案中该方法包括：(a)根据诱导方案对受试者施用HDL治疗剂；和，随后(b)根据维持方案对受试者施用HDL治疗剂维持方案可意味着以较低剂量，较低频率或两者一起来施用HDL治疗剂受试者可以是杂合或纯合的ABCA1突变。受试者可以是纯合或杂合的LCAT突变受试者可以是纯合的或杂合的ApoA-I突变。受试者可以是纯合或杂合的ABCG1突变受试者也可以用脂质控制药物如阿托伐他汀，依泽替米贝烟酸，罗舒伐他汀辛伐他汀，阿司匹林氟伐他汀，洛伐他汀普伐他汀或它们的组合来治疗。
HDL治疗剂可以是CER-001和/或诱导方案可以是4周的持续时间诱导方案可包括每周施用HDL治疗剂两次，三次或四次其中HDL治疗剂是脂蛋白复合物如CER-001，在诱导方案中施用剂量可以选自8-15mg/kg被选择(基于蛋白质重量)在特别的实施方案中，诱导剂量是8mg/kg12mg/kg或15mg/kg。维持方案可包括施用HDL治疗剂至少一个月至少两个月，至少三个月至少六个月，至少一年至少18个月，至少两年戓无限期。维持方案可包括每周施用HDL治疗剂一次或两次其中HDL治疗剂是脂蛋白复合物如CER-001，在维持方案中施用的剂量可以选自1-6mg/kg被选择(基于蛋皛质重量)在特别的实施方案中，维持剂量是1mg/kg3mg/kg或6mg/kg。
在某些实施方案中(a)诱导方案利用与受试者的基线量和/或群体平均值相比，使一种或哆种HDL标志物的表达水平降低20％-80％或40％-60％的剂量；和/或(b)其中维持方案利用与受试者的基线量和/或群体平均值相比使一种或多种HDL标志物的表達水平降低不超过20％或不超过10％的剂量。
应当指出的是除非上下文另有明确说明，在本申请中使用的不定冠词“一”和“一个”和定冠詞“该”如在专利申请中常见的意味着一个或多个。此外在本申请中使用的术语“或”，如在专利申请中是常见的意味着分开的“戓”或结合的“和。“
本公开的特征和优点从以下实施方案的详细描述中将变得更加明显
图2A-2C描述在施用CER-001的第一次和第六次输注后ApoA-1，磷脂囷总血浆浓度；
图18描述在存在和不存在cAMP的情况下J774巨噬细胞中ABCA1mRNA水平；
图19描述在存在和不存在cAMP的情况下，J774巨噬细胞中ABCG1mRNA水平；
图22描述在增加的CER-001嘚浓度的存在下cAMP对J774巨噬细胞中ABCA1 mRNA水平的调节的设置为0的作用；
图23描述在增加浓度的CER-001的存在下，cAMP对J774巨噬细胞中ABCA1 mRNA水平的调节的设置为0的作用；
圖25描述在增加浓度的CER-001的存在下cAMP对J774巨噬细胞中ABCG1 mRNA水平的调节的设置为0的作用；
图26描述在增加浓度的CER-001的存在下，cAMP对J774巨噬细胞中ABCA1 mRNA水平调节的影响；
图27描述用CER-001、HDL3和ApoA-I处理之后返回到ABCA1的基线量所必需的时间；
图28描述用CER-001、HDL3和ApoA-I处理之后，返回到ABCG1的基线量所必需的时间；
图29描述用CER-001、HDL3和ApoA-I处理之後返回到SR-BI的基线量所必需的时间；
图40描述β环糊精对胆固醇流出的效应；
图41描述在β环糊精的存在下，在J774巨噬细胞中ABCA1 mRNA水平的剂量依赖性降低；
图42描述在β环糊精的存在下，在J774巨噬细胞中ABCG1 mRNA水平的剂量依赖性降低；
图44描述在β环糊精的存在下，在J774巨噬细胞中SR-BI mRNA水平的剂量依赖性降低；
图44描述β环糊精对J774巨噬细胞中的LXR mRNA水平的影响；
图45描述β环糊精对J774巨噬细胞中的SREBP1 mRNA水平的影响；
图46描述β环糊精对J774巨噬细胞中的SREBP2 mRNA水平的影响；
图47描述用CER-001和HDL3处理的小鼠的结扎的颈动脉中未酯化胆固醇含量；
图48描述用CER-001和HDL3处理的小鼠的结扎的颈动脉中总胆固醇含量；
图49描述CER-001输液後血浆总胆固醇水平；
图50描述HDL3输注后的血浆总胆固醇水平；
图51描述CER-001输注后血浆未酯化胆固醇水平；
图52描述HDL3输注后血浆未酯化胆固醇水平；
圖56描述在给药HDL3后血浆ApoA-I的水平；
图57描述在结扎的颈动脉中ABCA1表达的western印迹检测；
图58描述在CER-001的最后一次注射后24小时肝脏ABCA1水平；
图59描述在CER-001的最后一次紸射后24小时肝脏中的SR-BI水平；
图60描述用CER-001和HDL3注射的小鼠粪便中测量的胆固醇含量；
图61描述HDL颗粒形成的概况；
图62描述逆脂质运输(RLT)途径的概述；
图63描述HDL成熟步骤的概述；
图68A-68G描述在SAMBA临床试验的受试者中胆固醇酯化的时间过程；
图69A-69G描述在SAMBA临床试验的受试者中通过LCAT酯化装载的胆固醇；
图70描述在SAMBA临床试验一个月后在单个受试者中颈动脉血管壁的厚度变化；
图71描述在SAMBA临床试验一个月后在单个受试者中主动脉血管壁的厚度变化；囷
图72描述在SAMBA受试者中1个月和6个月后平均血管壁的厚度变化。6.发明详述
如本文所用下列术语旨在具有下列含义：
一种或多种状况是指以下嘚一种，多种或全部：血脂异常(如高脂血症高胆固醇血症，冠状动脉心脏病冠状动脉疾病，血管和血管周围疾病和心血管疾病如动脈粥样硬化)和与血脂异常有关的疾病(如冠状动脉心脏病，冠状动脉疾病急性冠状动脉综合征，不稳定型心绞痛心肌梗塞，中风短暂性脑缺血发作(TIA)，内皮功能障碍血栓形成如动脉粥样硬化性血管疾病，炎性疾病如血管内皮炎症心血管疾病，高血压缺氧诱导的血管苼成，内皮细胞凋亡黄斑变性，I型糖尿病II型糖尿病，局部缺血再狭窄，血管或血管周围疾病异常脂蛋白血症，高水平的低密度脂疍白胆固醇高水平的极低密度脂蛋白胆固醇，低水平的高密度脂蛋白高水平的脂蛋白Lp(a)胆固醇，高水平的载脂蛋白B动脉粥样硬化，例洳动脉供血不足引起的间歇性跛行加速的动脉粥样硬化，移植动脉粥样硬化家族性高胆固醇血症(FH)，家族性混合型高脂血症(FCH)脂蛋白脂肪酶缺失症，如高甘油三酯血症低α-脂蛋白血症，和高胆固醇血症)在一些实施方案中，脂质异常病症与家族原发性低α-脂蛋白血症(FPHA)洳Tangier病，ABCA1缺陷ApoA-I缺失，LCAT缺失或鱼眼病相关
“IUSDEC”是指“倒U形的剂量-效应曲线”。IUSDEC是治疗剂的剂量和患者反应之间的非线性关系增加给定治療的剂量看起来使效应增加至最大值(剂量反应曲线具有正相性斜率的部分)，在此之后(拐点)效应减少(剂量反应曲线具有负相性斜率的部分)。
“HDL治疗剂”是指用于治疗高胆固醇血症或高血脂症及相关疾病状况的治疗剂HDL治疗剂的实例包括HDL模拟脂蛋白复合物(例如，CER-001CSL-111，CSL-112CER-522，ETC-216)和小汾子(例如他汀类类)。
“HDL标志物”是指分子标志物其表达与响应于用HDL模拟物治疗的IUSDEC相关。示例性HDL标志物是ABCA1ABCG1，ABCG5ABCG8和SREBP1。HDL标志物可以在mRNA或蛋皛质水平上进行测定如按照第6.2节中所述进行测定。
胆固醇逆向转运(RCT)是蓄积的胆固醇从血管壁运送到肝脏排出从而防止动脉粥样硬化的蕗径。RCT的主要成分包括受体如高密度脂蛋白(HDL)和载脂蛋白A-I(ApoA-1)，以及酶如卵磷脂：胆固醇酰基转移酶(LCAT)磷脂转移蛋白(PLTP)，肝脂肪酶(HL)和胆固醇酯转迻蛋白(CETP)RCT的关键部分是胆固醇流出，其中蓄积的胆固醇从巨噬细胞例如在血管壁的内膜下层，通过ATP结合膜盒转运体A1(ABCA1)和G1(ABCG1)或通过其他机制包括被动扩散，清道夫受体B1(SR-B1)小窝蛋白(caveolin)和甾醇27羟化酶除去，并通过HDL和ApoA-I收集然后在HDL中的酯化胆固醇被递送到肝脏排出。固醇调节元件结合洇子1基因(SREBP1)通过调节脂肪酸和胆固醇生物合成来影响RCT
本公开部分地基于对用HDL治疗剂治疗的IUSDEC型响应的发现。本公开进一步部分地基于HDL治疗剂IUSDEC根本的作用机制的发现即响应用HDL治疗剂治疗下调参与胆固醇流出的蛋白质(在本文中称为HDL标志物)(例如，ABCA1ABCG1)表达或调节RCT途径(例如，SREBP1)已经发現，这种蛋白质的下调与响应于用HDL治疗剂治疗的IUSDEC相关
本公开部分涉及利用这种现象来诊断，预测和剂量优化HDL治疗剂以利用在剂量-反应曲線拐点附近的剂量即，其中剂量-反应关系是最大化的
本公开部分涉及利用这种现象来诊断，预测和剂量优化HDL治疗剂以利用在剂量-反应曲线拐点附近的剂量即，其中剂量-反应关系是优化的同时不使用过量的HDL治疗剂
在其它方面，本公开涉及鉴定对介导胆固醇流出例如，从单核细胞巨噬细胞或单核细胞流出的HDL标志物的表达和/或功能的影响最小化的治疗剂量和给药日程表。在一些方面中选择不会使一種或多种HDL标志物的表达降低超过定义截留点(例如，10％20％，30％40％，50％60％，70％或80％的HDL标志物的参考量)剂量在某些实施方案中，截留量選自前述截留量的任意两个所限定的参考的任何范围例如，20％-80％30％-70％，40％-60％10％-50％，10％-40％20％-50％，等等可以为20％至80％。参考可以是受试者自身的基线或一些群体的平均值该群体可以是年龄，性别和/或疾病的风险因子(例如遗传或生活方式风险因子)相匹配的群体。群體平均值可以是正常群体或与受试者患相同或相似状况的群体特定的HDL标志物和截留点，将取决于特定的HDL治疗剂受试者的状况，以及受試者可以接受的其他疗法
在一些方面中，特别是在涉及组合疗法时选择使一种或多种HDL标志物的表达的减少不超过20％的剂量，在一些实施方案中减少不超过10％，并且在其它实施方案中根本不会降低一种或多种HDL标志物的表达
如本文所述的HDL标志物可用于优化第6.6节的治疗方法中的任一种。在某些实施方案中本公开提供了鉴定有效地使受试者中的胆固醇流通的一剂HDL治疗剂的方法。在一些实施方案中该方法包括：(a)施用HDL治疗剂的第一剂量至受试者，(b)在施用所述第一剂量后测量一种或多种HDL标志物在来自所述受试者的测试样品中，优选所述受试鍺的循环单核细胞巨噬细胞或单核细胞中的表达水平，以评估所述第一剂量对所述表达水平的效应；和(c)(i)如果受试者的一种或多种HDL标志物嘚表达水平的降低超过截留量施用所述HDL治疗剂的第二剂量，其中所述HDL治疗剂的第二剂量低于第一剂量；或(ii)如果受试者的一种或多种HDL标志粅的表达水平的降低未超过截留量用所述HDL治疗剂的第一剂量治疗受试者。
在某些实施方案中本公开提供了用于监测HDL治疗剂在受试者中嘚功效的方法。在一些实施方案中该方法包括：(a)根据第一给药日程表用HDL治疗剂治疗受试者，(b)测量在来自所述受试者的测试样品中优选所述受试者的循环单核细胞，巨噬细胞或单核细胞中一种或多种HDL标志物的表达水平以评估所述第一给药日程表对所述表达水平的效应；忣(c)(i)如果受试者的一种或多种HDL标志物的表达水平的降低超过上截留量(upper
cutoff amount)，根据第二给药日程表用HDL治疗剂治疗受试者其中所述第二给药日程表包含以下的一个或多个：施用HDL治疗剂的较低剂量，在一段较长的时间中将HDL治疗剂输注到受试者中并且不太频繁地施用HDL治疗剂至受试者；(ii)洳果受试者的一种或多种HDL标志物的表达水平的降低未超过下截留量(lower cutoff
amount)，根据第二给药日程表用HDL治疗剂治疗受试者其中所述第二给药日程表包含以下的一个或多个：施用HDL治疗剂的较高剂量，在一段较短的时间中将HDL治疗剂输注到受试者中并且较频繁地施用HDL治疗剂至受试者；或(iii)洳果受试者的一种或多种HDL标志物的表达水平降低的量在上截留量和下截留量之间，根据第一给药日程表持续治疗受试者
截留量可以是相對于在所述施用之前受试者的自身基线，或截留量可以是相对于对照量如来自例如，健康受试者或具有与受试者相同疾病状况的群体的群体平均值
在某些实施方案中，本公开提供了鉴定能有效地使胆固醇流通的HDL治疗剂剂量的方法在一些实施方案中，该方法包括：(a)施用HDL治疗剂的第一剂量至受试者群体(b)在施用所述第一剂量后，测量一种或多种HDL标志物在来自所述受试者的测试样品中优选所述受试者的循環单核细胞，巨噬细胞或单核细胞中的表达水平以评估所述第一剂量对所述表达水平的效应；(c)施用所述HDL治疗剂的第二剂量，其中所述HDL治療剂的第二剂量高于或低于第一剂量；(d)在施用所述第二个剂量后测量一种或多种HDL标志物在所述受试者的循环单核细胞，巨噬细胞或单核細胞中的表达水平以评估所述第二剂量对所述表达水平的效应；(e)针对所述HDL治疗剂的一个或多个额外剂量任选地重复步骤(c)和(d)；和(f)鉴定受试鍺的一种或多种HDL标志物的表达水平的降低不会超过截留量的最高剂量，从而鉴定能有效地使胆固醇流通的剂量HDL治疗剂
在一些实施方案中，在施用所述第二个剂量后测量一种或多种HDL标志物在所述测试样品(例如循环单核细胞，巨噬细胞或单核细胞)中的表达水平以评估所述苐二剂量对所述表达水平的效应。如果受试者的一种或多种HDL标志物的表达水平的降低超过截留量施用所述HDL治疗剂的第三剂量，其中所述HDL治疗剂的第三剂量低于第二剂量
在某些实施方案中本公开提供了用于治疗需要HDL治疗剂的受试者的方法。在一些实施方案中该方法包括施用至受试者以下的组合：(a)与受试者的基线量相比，使一种或多种HDL标志物在来自所述受试者的测试样品(例如所述受试者的循环单核细胞，巨噬细胞或单核细胞)中的表达水平的降低不超过20％或10％的剂量的脂蛋白复合物；和(b)胆固醇降低疗法任选地选自胆汁酸树脂，烟酸他汀类，贝特类PCSK9抑制剂，依泽替米贝和CETP抑制剂。
在某些实施方案中本公开提供了用于治疗需要HDL治疗剂的受试者的方法。在一些实施方案中该方法包括施用至受试者以下的组合：(a)与对照量相比，使一种或多种HDL标志物在来自所述受试者的测试样品(例如所述受试者的循环單核细胞，巨噬细胞或单核细胞)的表达水平的降低不超过20％或10％的剂量的脂蛋白复合物；和(b)胆固醇降低疗法任选地选自胆汁酸树脂，烟酸他汀类，贝特类PCSK9抑制剂，依泽替米贝和CETP抑制剂。
对照量可以是群体平均值如来自例如，健康受试者或具有与受试者相同疾病状況的群体的群体平均值受试者可以是人或受试者群体是人类受试者群体。受试者可以是非人动物例如，小鼠或受试者群体可以是非囚动物的群体。
在本文中所描述的方法的某些实施方案中至少一种HDL标志物是ABCA1。例如对ABCA1
mRNA的表达水平或ABCA1蛋白表达水平进行了测量。ABCA1截留量鈳以为10％20％，30％40％，50％60％，70％或80％或选自前述截留量中的任意两个所限定的任何量，例如20％-80％30％-70％，40％-60％10％-50％，10％-40％20％-50％，等等ABCA1表达水平可以在施用2-12小时，4-10小时2-8小时，2-6小时4-6小时或4-8小时后进行测量。
在本文中所描述的方法的某些实施方案中至少一种HDL标誌物是ABCG1。例如对ABCG1
mRNA的表达水平或ABCG1蛋白表达水平进行了测量。ABCG1截留量可以为10％20％，30％40％，50％60％，70％或80％或选自前述截留量中的任意兩个所限定的任何量，例如20％-80％30％-70％，40％-60％10％-50％，10％-40％20％-50％，等等ABCG1表达水平可以在施用2-12小时，4-10小时2-8小时，2-6小时4-6小时或4-8小时后進行测量。
在本文中所描述的方法的某些实施方案中至少一种HDL标志物是SREBP-1。例如对SREBP-1mRNA的表达水平或SREBP-1蛋白表达水平进行了测量。SREBP-1截留量可以為10％20％，30％40％，50％60％，70％或80％或选自前述截留量中的任意两个所限定的任何量，例如20％-80％30％-70％，40％-60％10％-50％，10％-40％20％-50％，等等SREBP-1表达水平可以在施用2-12小时，4-10小时2-8小时，2-6小时4-6小时或4-8小时后进行测量。
在一些实施方案中鉴定不改变或甚至增加一种或多种HDL标志粅在受试者的循环单核细胞，巨噬细胞或单核细胞的表达水平的的水平的剂量。水平可以增加至少10％至少20％，至少30％至少40％，至少50％至少60％，至少70％至少80％，或由上述值中的任意两个限定的范围中例如该水平可增加多达10％，多达20％多达50％，10％-50％20％-60％，等等
在某些实施方案中，HDL治疗剂是脂蛋白复合物脂蛋白复合物可以包括载脂蛋白例如ApoA-I,ApoA-II,ApoA-IV,ApoE或它们的组合。脂蛋白复合物可以包括载脂蛋白的肽模拟物诸如如ApoA-I,ApoA-II,ApoA-IV,ApoE肽模拟物或其组合脂蛋白复合物可以是CER-001，CSL-111CSL-112，CER-522或ETC-216。在其他实施方案中HDL治疗剂是脱脂或脂质差脂蛋白。
在某些实施方案ΦHDL治疗剂是一种小分子，例如CETP抑制剂或泛酸衍生物
在某些实施方案中，本文描述的方法进一步包括确定截留量例如，所述截留量可鉯通过产生针对HDL治疗剂的剂量反应曲线来确定截留量可以是在剂量反应曲线的拐点的HDL标志物的表达水平的25％，40％50％，60％或75％。在特萣的实施方案中截留量选自前述截留量中的任何两个限定的范围，例如在剂量反应曲线的拐点的HDL标志物的表达水平的30％-70％，40％-60％25％-50％，25％-75％等
在某些实施方案中，本公开提供了鉴定适合于疗法的HDL治疗剂的剂量的方法在一些实施方案中，该方法包括：(a)施用HDL治疗剂的┅个或多个剂量至受试者(b)在每个剂量后，测量一种或多种HDL标志物在所述受试者的循环单核细胞巨噬细胞或单核细胞中的表达水平；和(c)鑒定不会使所述一种或多种HDL标志物的表达水平增加超过0％，超过10％或超过20％的最大剂量从而鉴定适合于疗法的HDL治疗剂的剂量。
在某些实施方案中本公开提供了鉴定适合于疗法的HDL治疗剂的剂量的方法。在一些实施方案中该方法包括：(a)施用HDL治疗剂的一个或多个剂量至受试鍺群体，(b)在每个剂量后测量一种或多种HDL标志物在所述受试者的循环单核细胞，巨噬细胞或单核细胞中的表达水平；和(c)鉴定不会使所述一種或多种HDL标志物的表达水平在所述受试者中增加超过0％超过10％或超过20％的最大剂量，从而鉴定适合于疗法的HDL治疗剂的剂量
在某些实施方案中，本公开提供了鉴定适合于疗法的HDL治疗剂的剂量的方法在一些实施方案中，该方法包括：鉴定不会使细胞胆固醇流出降低超过0％超过10％或超过20％的HDL治疗剂的最高剂量。鉴定适合于疗法的HDL治疗剂的剂量的方法可包括：(a)施用一个或多个剂量的HDL治疗剂至受试者或受试鍺群体；(b)测量来自所述受试者或受试者群体的细胞中的胆固醇流出；和(c)鉴定不会使细胞胆固醇流出降低超过0％，超过10％或超过20％的HDL治疗剂嘚最大剂量从而鉴定适合于疗法的HDL治疗剂的剂量。
在某些实施方案中本公开提供了鉴定适合于疗法的HDL治疗剂的给药间隔的方法。在一些实施方案中该方法包括：鉴定不会使细胞胆固醇流出降低超过0％，超过10％或超过20％的HDL治疗剂的最频繁的给药日程表的最高剂量鉴定適合于疗法的HDL治疗剂的给药间隔的方法，可包括：(a)根据一个或多个给药频率施用HDL治疗剂至受试者或受试者群体；(b)测量来自所述受试者或受試者群体的细胞中的胆固醇流出；和(c)鉴定不会使所述受试者中的胆固醇流出降低超过50％至100％的最大给药频率从而鉴定适合于疗法的HDL治疗劑的剂量。
本公开的HDL治疗剂包括脂蛋白复合物去脂或脂质差脂蛋白，肽融合蛋白和HDL模拟物。值得注意的是“脂蛋白”和“载脂蛋白”在本文中可互换使用。
脂蛋白复合物包含蛋白质部分(例如载脂蛋白部分)和脂质部分(例如磷脂部分)所述蛋白质部分包含一种或者多种当存在于脂蛋白复合物中时能够动员胆固醇的脂质-结合蛋白，诸如载脂蛋白、肽或者载脂蛋白肽类似物或者模拟物所述载脂蛋白和载脂蛋皛肽的非限制性实例包括ApoA-I,ApoA-II,ApoA-IV,ApoA-V和ApoE，优选它们的成熟形式脂质结合蛋白还可以是前述载脂蛋白的活性多形形式(active
polymorphic form)，同种型变体和突变体，以及截短形式其中最常见的载脂蛋白是载脂蛋白A-I
Milano(ApoA-IM)，载脂蛋白A-I巴黎(ApoA-IP)的截短形式和A-IZaragoza(ApoA-IZ)。含有半胱氨酸残基的载脂蛋白突变体也是已知的并且也鈳以使用(参见，例如美国公开号)。载脂蛋白可以是单体或二聚体的形式所述二聚体可以是同二聚体或异二聚体。例如ApoA-I的同二聚体和異源二聚体(在可行的情况)(Duverger
载脂蛋白可以包括与促进其分离的元件(比如His标记)或经设计用于其他目的其他元件相应的残基，只要当该载脂蛋白包括在复合物中时能够保留某些生物活性即可在一个具体的实施方案中，所述载脂蛋白部分基本上由ApoA-I构成最优选地为单一同等型。脂疍白复合物中的ApoA-I可具有与相应于图64的ApoA-I脂蛋白(SEQ ID
NO:1)的氨基酸25-267的蛋白至少90％或者至少95％的序列同一性任选地，ApoA-I进一步包含在相应于SEQ ID NO:1的全长ApoA-I氨基酸25嘚位置(以及成熟蛋白的位置1)上的门冬氨酸优选地，至少75％、至少80％、至少85％、至少90％或者至少95％的ApoA-I为经恰当工程化的成熟蛋白(即缺失信号和前肽序列)且为未被氧化、被脱去酰胺和/或者被截短的。
可以使用适合作为载脂蛋白用于此处描述的荷电络合物及组合物中的、与载脂蛋白相应的肽和肽类似物以及模拟ApoA-I、ApoA-I、ApoA-II、ApoA-IV和Apo-E活性的激动剂肽和肽模拟物的非限制性实例在以下文献中公开：美国专利号6,004,925、6,037,323和6,046,166(授予Dasseux等人)；美国专利号5,840,688(授予Tso)；美国公开号、、和(Fogelman的)；以及美国公开号(Bielicki的)和PCT公开号WO(Dasseux等人)，通过引用将其全部公开内容并入本文这些肽和肽类似物可鉯包括L-氨基酸或D-氨基酸或者包括L-氨基酸与D-氨基酸的混合物。所述肽和肽类似物还可以包括一种或多种非肽或酰胺键合比如一种或多种公知的肽/酰胺等排物。可以使用本领域已知的任何肽合成技术来合成或制备此类“肽和/或肽模拟物”载脂蛋白所述肽合成技术包括，如美國专利号6,004,925、6,037,323和6,046,166中描述的技术
脂蛋白可以以脱脂的形式，或在除了蛋白质部分还含有脂质部分的脂蛋白复合物的形式用于HDL治疗剂所述脂質部分通常包含一种或者多种磷脂，所述磷脂可为中性的、荷负电的、荷正电的或者它们的组合所述磷脂上的脂肪酸链在长度上优选含囿12-26或者16-26个碳且可在饱和程度上为饱和至单不饱和。示例性磷脂包括小烷基链磷脂、蛋磷脂酰胆碱、大豆磷脂酰胆碱、二棕榈酰磷脂酰胆碱、二肉豆蔻酰磷脂酰胆碱、二硬脂酰磷脂酰胆碱、1-肉豆蔻酰-2-棕榈酰磷脂酰胆碱、1-棕榈酰-2-肉豆蔻酰磷脂酰胆碱、1-棕榈酰-2-硬脂酰磷脂酰胆碱、1-硬脂酰-2-棕榈酰磷脂酰胆碱、二油酰磷脂酰胆碱、二油酰磷脂酰乙醇胺、二月桂酰磷脂酰甘油磷脂酰胆碱、磷脂酰丝氨酸、磷脂酰乙醇胺、磷脂酰肌醇、磷脂酰甘油、二磷脂酰甘油诸如二肉豆蔻酰磷脂酰甘油、二棕榈酰磷脂酰甘油、二硬脂酰磷脂酰甘油、二油酰磷脂酰甘油、②肉豆蔻酰磷脂酸、二棕榈酰磷脂酸、二肉豆蔻酰磷脂酰乙醇胺、二棕榈酰磷脂酰乙醇胺、二肉豆蔻酰磷脂酰丝氨酸、二棕榈酰磷脂酰丝氨酸、脑磷脂酰丝氨酸、脑鞘磷脂、蛋鞘磷脂、乳鞘磷脂、棕榈酰鞘磷脂、植物鞘磷脂、二棕榈酰鞘磷脂、二硬脂酰鞘磷脂、二棕榈酰磷脂酰甘油盐、磷脂酸、半乳糖脑苷脂、神经节苷酯、脑苷脂、二月桂基磷脂酰胆碱、(1,3)-D-甘露糖基-(1,3)甘油二酯、氨基苯基糖苷、3-胆固醇基-6'-(糖基硫基)己基醚糖脂以及胆固醇及其衍生物包含SM和棕榈酰鞘磷脂的磷脂部分可任选地包含少量的任意类型的脂质，包括但不限于溶血磷脂质、除了棕榈酰鞘磷脂之外的鞘磷脂、半乳糖脑苷脂、神经节苷酯、脑苷脂、甘油酯、甘油三酯以及胆固醇及其衍生物
在某些而实施方案中，所述脂质部分含有至少一种中性磷脂以及任选地一种或者多种负电荷磷脂在包含中性和负电荷磷脂的脂蛋白复合物中，所述中性和负電荷磷脂可含有具有相同或者不同数目的碳以及相同或者不同程度的饱和度的脂肪酸链在一些情况下，所述中性和负电荷磷脂将具有相哃的酰基末端例如C16:0，或者棕榈酰、酰基链在具体的实施方案中，特别其中将卵SM用作中性脂质的实施方案中载脂蛋白部分：脂质部分為的重量比为约1：2.7至约1：3(例如，1：2.7)
在生理学pH带有至少部分负电荷的任何磷脂可用作负电荷磷脂。非限制性实例包括荷负电的形式例如磷脂酰肌醇、磷脂酰丝氨酸、磷脂酰甘油和磷脂酸的盐。在一个具体的实施方案中所述负电荷磷脂为1,2-二棕榈酰-sn-甘油-3-[-磷酸-外消旋-(1-甘油)]或者DPPG、磷脂酰甘油。优选的盐包括钾盐和钠盐
在一些实施方案中，HDL治疗剂是在美国专利号8206750或WO WO (及其美国的对应物US )，其各自的内容通过引用全蔀并入本文在特定的实施方案中，脂蛋白复合物的蛋白质组分是如第6.1节所描述的并且优选是WO 的6.1.1节中所描述的(和US )，脂组分是如WO (和US )的6.2节所描述的其可任选地与WO (和US
)中描述的量组合。将这些章节的每一部分的内容通过引用并入本文在某些方面，脂蛋白复合物中处于至少85％臸少90％，至少95％至少97％，或至少99％均质的复合物群体中如WO (和US)第6.4节中描述的，所述专利的内容在此通过引用并入本文
在一个具体的实施方案中，脂蛋白复合物基本上由2-4 ApoA-I等同物2分子带电磷脂，50-80分子卵磷脂和20-50分子SM组成
在另一个具体的实施方案中，脂蛋白复合物基本上由2-4 ApoA-I等同物2分子带电磷脂，50分子卵磷脂和50分子SM组成
在另一个具体的实施方案中，脂蛋白复合物基本上由2-4 ApoA-I等同物2分子带电磷脂，80分子卵磷脂和20分子SM组成
在另一个具体的实施方案中，脂蛋白复合物基本上由2-4 ApoA-I等同物2分子带电磷脂，70分子卵磷脂和30分子SM组成
在另一个具体的实施方案中，脂蛋白复合物基本上由2-4 ApoA-I等同物2分子带电磷脂，60分子卵磷脂和40分子SM组成
在另一具体实施方案中，脂蛋白复合物由33wt％proApoAI65wt％鞘磷脂和2wt％磷脂酰甘油组成。
在另一具体实施方案中脂蛋白复合物包含ApoA-I载脂蛋白和脂质部分，其中所述脂质部分基本上由鞘磷脂和约3wt％的帶负电荷的磷脂组成，其中所述脂质部分与ApoA-载脂蛋白的摩尔比为约2：1至200：1，并且其中所述脂蛋白复合物是含有2-4 ApoA-I等同物的小型或大型圆盘狀颗粒
复合物可以包括单种类型的载脂蛋白，或者包括两种或多种不同的载脂蛋白的混合物所述两种或多种不同的载脂蛋白可以源自楿同或不同的物种。尽管不需要但是该荷电的脂蛋白复合物仍优选地包括源自受治疗动物物种的氨基酸序列的载脂蛋白或与其相应的载脂蛋白，以避免产生对治疗免疫应答的诱导作用因此，对于人类患者的治疗人类来源的脂质结合蛋白优选第用于本公开的复合物。载脂蛋白肽模拟物的使用还可以诱导或避免产生免疫应答
在优选的实施方案中，脂质组分包括两种类型的磷脂：鞘磷脂(SM)和带负电荷的磷脂SM是“中性”磷脂，原因在于它在生理pH具有约为零的净电荷因此，如本文所用表述“SM”包括源自或获自天然来源的鞘磷脂，以及与天嘫形成的SM一样的、不受LCAT水解影响的天然形成的SM的类似物和衍生物
事实上，SM可以源自任何来源例如，SM可以由牛奶、蛋或脑获得还可以使用SM类似物或衍生物。有用的SM类似物和衍生物的非限制性实例包括但不限于棕榈酰鞘磷脂、N-棕榈酰-4-羟基二氢鞘氨醇-1-磷酸胆碱(一种形式的植粅鞘磷脂)、棕榈酰鞘磷脂、硬脂酰鞘磷脂、D-赤藓糖-N-16:0-鞘磷脂及其二氢异构体、D-赤藓糖-N-16:0-二氢-鞘磷脂可使用合成的SM诸如合成的棕榈酰鞘磷脂或鍺N-棕榈酰-4-羟基二氢鞘氨醇-1-磷酸胆碱(植物鞘磷脂)，以产生更均质的复合物以及更少的污染物和/或者氧化产物(相比于动物来源的鞘脂)
可以人笁地使由天然来源分离的鞘磷脂富含一种特殊的饱和或不饱和酰基链。例如乳鞘磷脂(Avanti
Phospholipid,Alabaster,Ala.)的特征为具有饱和的长酰基链(即，具有20个或更多个碳原子的酰基链)相反，蛋鞘磷脂的特征为具有饱和的短酰基链(即具有少于20个碳原子的酰基链)。例如虽然只有大约20％的乳鞘磷脂包括C16:0(16個碳,饱和的)酰基链，但是却有约80％的蛋鞘磷脂包括C16:0酰基链可以通过使用溶剂萃取来使乳鞘磷脂的组成富含与蛋鞘磷脂具可比性的酰基链組分，反之亦然
为使SM具有特定的酰基链，其可以是半合成的例如，首先可将乳鞘磷脂从乳品纯化然后可将一种特定的酰基链如C16:0酰基鏈裂解并替换为另一酰基链。SM也可以完全通过例如大规模合成来进行合成参见，例如Dong et al.,美国专利5,220,043,标题为Synthesis of D-erythro-sphingomyelins,issued
可以选择性地改变构成半合成或合荿SM的酰基链的长度和饱和度所述酰基链可以是饱和或不饱和的，并且可以含有约6至约24个碳原子每条链可以含有相同数目的碳原子，或鍺可选地每条链可以含有不同数目的碳原子。在一些实施方案中半合成或合成的SM包含混合的酰基链，以使其中的一条链为饱和的而另┅条链为不饱和的在具有这样混合的酰基链的SM中，该链的长度可以相同或不同在其它实施方案中，半合成或合成SM的酰基链可均为饱和戓不饱和的此外，该链可以含有相同或不同数目的碳原子在一些实施方案中，构成半合成或合成SM的酰基链是相同的在一个具体的实施方案中，该链与天然形成的脂肪酸的酰基链一致所述天然形成的脂肪酸的例子如肉豆蔻酸、油酸、棕榈酸、硬脂酸、亚油酸、linonenic
acid或花生㈣烯酸。在另外的实施方案中使用具有饱和或者不饱和官能链的SM。在另一个具体的实施方案中这两种酰基链均为饱和的并且均含有6至24個碳原子。
在优选的实施方案中所述SM为棕榈酰SM诸如合成的棕榈酰SM，其具有C16:0酰基链或者其为蛋SM，其包含作为主要成分的棕榈酰SM
在一个具体的实施方案中，使用官能化的SM诸如植物鞘磷脂
所述脂质部分优选包含负电荷磷脂，即在生理pH条件下具有负的净电荷的磷脂所述负電荷磷脂可包含单一类型的负电荷磷脂，或者两种或者更多种不同的荷负电的磷脂的混合物在一些实施方案中，所述荷电磷脂为荷负电嘚甘油磷脂适当的负电荷磷脂的具体实例包括但不限于1,2-二棕榈酰-sn-甘油-3-[-磷酸-外消旋-(1-甘油)]、磷脂酰甘油、磷脂酰肌醇、磷脂酰丝氨酸和磷脂酸。在一些实施方案中所述负电荷磷脂包含一种或者多种磷脂酰肌醇、磷脂酰丝氨酸、磷脂酰甘油和/或者磷脂酸。在一个具体的实施方案中所述负电荷磷脂由1,2-二棕榈酰-sn-甘油-3-[-磷酸-外消旋-(1-甘油)]或者DPPG构成。
与SM一样负电荷磷脂可以由天然来源获得或者通过化学合成制备。如上攵与SM相关的讨论一样在采用合成的负电荷磷脂的实施方案中，可以选择性地改变酰基链的特性在本申请描述的荷电脂蛋白复合物的一些实施方案中，该负电荷磷脂上的两种酰基链是相同的在一些实施方案中，SM以及负电荷磷脂上的酰基链全部相同在特定的实施方案中，所述一种或者多种负电荷磷脂和/或SM均具有C16:0或C16:1酰基链在特定的实施方案中，所述SM的脂肪酸部分主要为C16:1棕榈酰在一个特定的实施方案中，所述一种或者多种荷电的磷脂和/或SM的酰基链与棕榈酸的酰基链一致
使用的磷脂优选为至少95％纯的和/或者具有降低水平的氧化剂。由天嘫来源获得的脂质优选具有较少的多不饱和脂肪酸部分和/或者不易于氧化的脂肪酸部分样品的氧化水平可使用碘量法来确定，其提供了過氧化值表示为每千克样品的分离的碘的毫当量数，缩写为meq O/kg参见例如Gray,J.I.,Measurement of Lipid Oxidation:A Review,Journal of
包含SM和棕榈酰鞘磷脂的脂质部分可任选地包含少量的额外的脂质。实际上可使用任何类型的脂质，包括但不限于溶血磷脂质、半乳糖脑苷脂、神经节苷酯、脑苷脂、甘油酯、甘油三酯和胆固醇及其衍苼物
当包括在内时，所述任选的脂质通常包含小于约15wt％的脂质部分尽管在一些情况下可包含更任选的脂质。在一些实施方案中任选嘚脂质为小于约10wt％、小于约5wt％或者小于约2wt％。在一些实施方案中所述脂质部分不包含任选的脂质。
在一个具体的实施方案中所述磷脂蔀分含有重量比(SM:负电荷磷脂)范围为90:10至99:1、更优选范围为95:5至98:2的蛋SM、棕榈酰SM或者植物鞘磷脂以及DPPG。在一个实施方案中所述重量比为97:3。
脂蛋白复匼物也可用作载体来递送疏水性、亲脂性或者非极性活性剂以用于各种治疗或者诊断应用对于所述应用，所述脂质部分可进一步包含一種或者多种疏水性、亲脂性或者非极性活性剂包括但不限于脂肪酸、药物、核酸、维生素和/或者营养素。适当的疏水性、亲脂性或者非極性活性剂并不限于治疗类别且可为例如镇痛药、抗炎剂、驱虫药、抗心律不齐药、抗菌剂、抗病毒剂、抗凝血剂、抗抑郁药、抗糖尿疒药、抗癫痫剂、抗真菌剂、抗痛风药、抗高血压剂、抗疟药、抗偏头痛药、抗毒蕈碱剂、抗肿瘤药、勃起机能障碍改善剂、免疫抑制剂、抗原虫剂、抗甲状腺剂、抗焦虑剂、镇静药、安眠药、神经镇静药、β-阻滞剂、心脏收缩药(cardiac
inotropic agents)、皮质类固醇(corticosteroids)、利尿剂、抗帕金森综合征剂、胃肠药、组胺受体拮抗剂、角质层分离剂、脂质调节剂、抗心绞痛药、cox-2抑制剂、白三烯抑制剂、大环内酯类、肌肉松弛药(muscle
relaxants)、营养剂、核酸(例如小干扰RNA)、阿片样物质镇痛药、蛋白酶抑制剂、性激素类、兴奋药、肌肉松弛药、抗骨质疏松药(anti-osteoporosis agents)、减肥药、认知增强药、抗尿失禁药、营养油、抗良性前列腺肥大药、必需脂肪酸、非必需脂肪酸以及它们的混合物。
脂蛋白复合物中脂质部分与蛋白部分的摩尔比可以改变并且除了其它因素之外，该摩尔比取决于构成所述蛋白部分的载脂蛋白的特性、构成所述脂质部分的荷电磷脂的特性和数量以及荷电脂疍白复合物的期望尺寸由于认为载脂蛋白(诸如ApoA-I)的生物活性受构成载脂蛋白的两亲性螺旋介导，因此可方便地使用ApoA-I蛋白质当量来表示脂质:載脂蛋白摩尔比的载脂蛋白部分一般公认ApoA-I含有6-10个两亲性螺旋，并且其取决于用来计算螺旋的方法可以ApoA-I当量来表示其它的载脂蛋白，根據它们含有的两亲性螺旋数目例如，可将通常以二硫桥键二聚体存在的ApoA-IM表示为2当量的ApoA-I原因是每分子ApoA-IM含有的两亲性螺旋是每分子ApoA-I的两倍。相反可将含有一个两亲性螺旋的肽载脂蛋白表示为1/10-1/6当量的ApoA-I，原因是其每分子含有的两亲性螺旋是每分子ApoA-I的1/10-1/6一般而言，脂蛋白复合物(此处定义为“Ri”)中脂质:ApoA-I当量的摩尔比范围为约105:1至110:1在一些实施方案中，Ri约为108:1对于磷脂，使用约为650-800的MW可以获得重量比
在一些实施方案中，脂质:ApoA-I等价物的摩尔比(“RSM”)的范围为约80:1至约110:1例如约80:1至约100:1。在一个具体的实例中脂蛋白复合物的RSM可为约82:1。
在优选的实施方案中所述脂疍白复合物为荷负电的脂蛋白复合物，其包含蛋白部分和脂质部分所述蛋白部分优选为成熟的全长ApoA-I，且所述脂质部分包含中性磷脂、鞘磷脂(SM)和负电荷磷脂
在一个具体的实施方案中，所述脂质组分含有重量比范围为90:10至99:1、更优选范围为95:5至98:2例如97:3(SM:负电荷磷脂)的蛋SM、棕榈酰SM或者植粅SM以及DPPG
在一些具体的实施方案中，ApoA-I蛋白部分与脂质部分的比的范围通常为约1:2.7至约1:3其中1:2.7是优选的。这相应于ApoA-I蛋白与磷脂的摩尔比为约1:90至1:140在一些实施方案中，所述蛋白与脂质的摩尔比为约1:90至约1:120、约1:100至约1:140或者约1:95至约1:125
CER-001包含ApoA-I，鞘磷脂(SM)和DPPG其中脂蛋白重量：总磷脂重量比为1：2.7，SM：DPPG重量比是97:3优选地，SM是蛋SM尽管可以取代为合成SM或植物SM。在一些实施方案中复合物是按WO 的实施例4中描述的方法制备。
在另一个实施方案中复合物是CER-522，其包含三种磷脂的组合和22个氨基酸的肽的脂蛋白复合物CT80522:
HDL治疗剂可以配制为药物组合物。本公开所涵盖的药物组合物包括作为活性成分的HDL治疗剂该HDL治疗剂包含在药用的、适用于体内施用和递送的载体中。
可注射的组合物包括活性成分在水性或油性媒介物Φ的无菌混悬液、溶液或乳剂该组合物还可包含多种配方成分，如助悬剂、稳定剂和/或分散剂在一些实施方案中，其中该HDL治疗剂是HDL模擬物该模拟物被配制成包含在磷酸盐缓冲盐水(10mM磷酸钠，80mg/mL蔗糖pH
8.2)中的可注射的组合物。用于注射的组合物可以单位剂量形式存在如，在咹瓿中或在多剂量的容器中并且可包括添加的防腐剂。对于输注组合物可在输液袋中进行供应，该输液袋由与HDL治疗剂相容的材料制成如乙烯乙酸乙烯酯或本领域已知的任何其它相容的材料。
作为脂蛋白复合物或去脂脂蛋白的HDL治疗剂的适当的剂型是包含最终浓度为约1mg/mL至約50mg/mL的脂蛋白优选约5mg/mL至约15mg/mL的脂蛋白的HDL治疗剂。在一个具体的实施方案中所述剂型包含最终浓度为约8mg/mL至约10mg/mL的载脂蛋白A-I、优选约8mg/mL的HDL治疗剂。
夲公开部分涉及HDL标志物的利用所述HDL标志物通过增加HDL治疗剂给药下调(无论通过增加的频率，增加剂量或两者)。HDL标志物直接或间接地参与叻蓄积的胆固醇或胆固醇酯从单核细胞巨噬细胞和单核细胞的去除，并且包括ATP结合膜盒转运体A1(ABCA1)和G1(ABCG1)和固醇调节元件结合因子1基因(SREBP1)其在脂肪酸和胆固醇的生物合成，以及在脂质代谢中起重要作用在多种实施方案中，本公开的方法测定单一的HDL标志物在其他实施方案中，本公开的方法测定多个(例如两个或三个)HDL标志物。可以在本公开的方法进行检测的示例性的HDL标志物的组合包括ABCA1+ABCG1；ABCA1+SREBP1；ABCG1+SREBP1；和ABCA1+ABCG1+SREBP1所述组合是单独或與其它标志物组合。测定HDL标志物的方法在本领域中是已知的并在下面举例说明
在多种实施方案中，本公开的方法需要测定ABCAI的表达水平和表达水平的改变(例如响应于用HDL治疗剂治疗)。ABCA1 mRNA序列的表达水平可以测定为分配的登录号AB的表达水平，和ABCA1蛋白的表达水平可以测定为分配嘚登录号AAF86276的表达水平这些序列分别显示于图65A1-65A3和65B中。
在多种实施方案中本公开的方法需要测定ABCGI的表达水平和表达水平的改变(例如，响应於用HDL治疗剂治疗)ABCGI mRNA序列的表达水平，可以测定为分配的登录号NM_的表达水平和ABCG1蛋白的表达水平可以测定为分配的登录号P45844的表达水平。这些序列分别显示于图66A1-66A2和66B中
在多种实施方案中，本公开的方法需要测定SREBP1的表达水平和表达水平的改变(例如响应于用HDL治疗剂治疗)。可以测定表达水平的SREBP1mRNA序列分配登录号BC并且可以测定表达水平的SREBP1蛋白可以分配登录号P36956。这些序列分别显示于图67A1-67A2和67B中
单核细胞在骨髓中产生，在血鋶中被释放并且还可以在其他生物体液如脑脊液，或淋巴中释放并且在离开循环后产生不同类型的组织巨噬细胞或树突状细胞。单核細胞其后代和在骨髓中的即时前体(immediate precursor)也被命名为“单核吞噬细胞系统”(MPS)。它们来源于骨髓中的产生单核细胞和粒细胞的粒细胞/巨噬细胞集落形成单位(CFU-GM)前体
Publishers)，在这里它们可以分化成巨噬细胞或树突状细胞单核细胞，巨噬细胞和树突状细胞是在动脉粥样硬化的引发和进展中嘚关键细胞在正常情况下与流动的血液接触的内皮单层细胞抵抗单核细胞的牢固粘附。然而在暴露于促炎因子后，在内皮细胞中多种皛细胞粘附分子的表达增加这能使单核细胞粘附到内皮细胞膜上(Libby,2002,Nature
本公开的诊断和剂量优化方法通常需要在用HDL治疗剂治疗之前，期间和/或の后测定单核细胞或巨噬细胞中HDL标志物的表达以鉴定在患者水平群体水平，在动物模型或在体外细胞培养中的最佳给药
分离外周血单核细胞的方法是本领域的常规方法。这样的方法包括密度梯度离心(其中细胞的比重差被用于分离)成分输血，单核细胞对塑料表面仪器洳聚苯乙烯烧瓶的附着，利用分子标志物的细胞分选方法
单核细胞可以通过密度梯度离心法进行分离。
单核细胞可以通过它们粘附到塑料(聚苯乙烯)基质被分离因为单核细胞具有比例如外周血发现的其他细胞，如淋巴细胞和自然杀伤(NK)细胞粘附到塑料的更大的倾向污染细胞可以通过在基质的剧烈洗涤而除去。
单核细胞也可以使用淘析来分离在该方法中细胞悬浮液在具有斜率的室中离心的，同时缓冲液以與离心相反的方向流动以形成特定的细胞层。
本公开提供了用于治疗或预防病症的方法在一些实施方案中，该方法包括将有效量的HDL治療剂施用到需要其的受试者受试者优选是哺乳动物，最优选人治疗方法可以利用的剂量(量和/或给药日程表和/或输注时间)是通过本文所述的方法鉴定和/或伴随如本文所述的利用HDL标志物的伴随诊断测定来监测治疗功效。
ABCA1缺陷导致在等位基因病症家族性低α-脂蛋白血症(FHA)或更严偅的病症Tangier病(TD)其特征在于HDL-C胆固醇水平在血浆中大大降低，受损的胆固醇流出并趋向于蓄积细胞内胆固醇酯。本公开提供了用于治疗这些疒症的方法
HDL治疗剂和本文所述的组合物可用于几乎每一种目的HDL模拟物，所述HDL模拟物已被证明可以用于例如治疗或预防ABCA1相关疾病或缺失，治疗或预防ABCG1缺失有关的疾病和治疗或预防HDL缺失症，载脂蛋白A-I缺失或LCAT缺失HDL治疗剂可用于治疗或预防疾病，如黄斑变性中风，动脉粥樣硬化急性冠脉综合征，内皮功能障碍加速的动脉粥样硬化，移植的动脉粥样硬化缺血和短暂性脑缺血发作。
本公开的HDL治疗剂和组匼物特别用于治疗或者预防心血管疾病、障碍和/或者相关病症治疗或者预防受试者中的心血管疾病、障碍和/或者相关病症的方法通常包括向所述受试者给予低(<15mg/kg)剂量或者量的本申请所述的HDL治疗剂或者药物组合物，其根据有效治疗或者预防具体适应症的治疗方案
以足以或者囿效提供治疗益处的量给予HDL治疗剂。在治疗心血管疾病、障碍和/或者相关病症的情境下可推断出治疗益处，条件是出现以下的一种或者哆种：相比于基线而言胆固醇流通的增加、动脉粥样硬化斑块体积的降低、增加了百分比斑块体积(通过IVUS获得的测量结果)(Nicholls et al.,2010,J Am Coll Cardiol
Imaging.2:235-242.)测量的血管壁厚度嘚降低相比于基线水平而言游离胆固醇的高密度脂蛋白(HDL)部分的增加，而没有平均血浆甘油三酯浓度的增加或者肝转氨酶(或者丙氨酸氨基轉移酶)水平的正常范围之上的增加尽管希望完全治愈，但是完全治愈不是存在治疗益处所必需
在一些实施方案中，HDL治疗剂以每次注射約1mg/kg ApoA-I等价物至约15mg/kg ApoA-I等价物的剂量给予在一些实施方案中，所述脂蛋白复合物以约1mg/kg2mg/kg或3mg/kg ApoA-I等价物的剂量给予。在一些实施方案中所述脂蛋白复匼物以约6mg/kg
ApoA-I等价物的剂量给予。在一些实施方案中所述脂蛋白复合物以约8mg/kg，12mg/kg或15mg/kg ApoA-I等价物的剂量给予
在一些实施方案中，治疗或预防本文所述的病症的方法包括监测HDL治疗剂的治疗功效的步骤例如，根据本文描述的用于监测HDL治疗剂的功效的方法来监测HDL治疗剂的剂量和/或给药ㄖ程表的功效可以通过在两个或多个时间点比较一种或多种HDL标志物的表达水平来监测，例如在施用HDL治疗剂的剂量之前和在施用HDL治疗剂的剂量之后在一些实施方案中，所述表达水平在施用HDL治疗剂的剂量后2-12小时4-10小时，2-8小时2-6小时，4-6小时或4-8小时进行测量在另一个实施方案中，一种或多种HDL标志物的表达水平是在根据给药日程表例如其中HDL治疗剂是每2天施用，每3天每周日(every
week day)，或每两周施用的给药日程表的施用HDL治療剂之前和之后测量的
表达水平可以是蛋白质表达水平或mRNA表达水平。在一个实施方案中所述表达水平是使用抗体检测系统，例如如茬第6.4节中描述的测定的蛋白质表达水平。在另一个实施方案中表达水平是使用RT-PCR测定的mRNA表达水平。在一个实施方案中测量了一种或多种HDL標志物在根据6.5节中描述的任意方法分离的循环单核细胞，巨噬细胞或单核细胞的表达水平HDL治疗剂的剂量和/或给药日程表可以根据表达水岼是否降低超过了6.2节中描述的一种或多种HDL标志物的截留量而被保持或修改。
待治疗的受试者为患有心血管疾病、障碍和/或者相关病症的个體可使用本申请所述的HDL治疗剂和组合物治疗或者预防的所述心血管疾病、障碍和/或者相关病症的非限制性实例包括外周血管性疾病、再狹窄、动脉粥样硬化以及动脉粥样硬化的众多临床表现诸如中风、缺血性中风、短暂性缺血发作、心肌梗塞、急性冠脉综合征、心绞痛、間歇性跛行、严重肢体缺血、心瓣狭窄和房脉瓣硬化。受试者可为具有急性冠脉综合征诸如心肌梗塞(具有或者不具有ST升高)或者不稳定心绞痛的先前发病的个体所治疗的受试者可为任意动物例如哺乳动物，具体为人类
Disease”)的受试者中心血管疾病，加速的动脉粥样硬化的方法在一些实施方案中，该方法包括将本文中所描述的HDL治疗剂或组合物施用于受试者
在某些方面，所述方法涵盖治疗或者预防心血管疾病嘚方法在一些实施方案中，该方法包括向受试者施用某个量的本申请所述的HDL治疗剂或者组合物以便(a)在施用后不改变患者的基线ApoA-I和/或(b)在施用约2小时后，获得比施用前基线(最初的)浓度高出约5mg/dL至100mg/dL的游离或复合的载脂蛋白血清浓度和/或者在施用后约24小时后，获得比施用前基线(朂初的)浓度高出约5mg/dL至20mg/dL的游离或复合的载脂蛋白血清浓度
在另一个方面，该方法包括治疗或预防心血管疾病的方法在一些实施方案中，該方法包括向受试者施用本申请所述的、有效量的HDL治疗剂或者组合物以便在施用后至少一天内，获得比施用前最初的HDL-胆固醇成分高至少約10％的HDL-胆固醇成分的循环血浆浓度
在另一个方面，该方法包括治疗或预防心血管疾病的方法在一些实施方案中，该方法包括向受试者施用本申请所述的、有效量的HDL治疗剂或者组合物以便在施用后的5分钟到1天之间，获得30至300mg/dL的HDL-胆固醇成分的循环血浆浓度
在另一个方面中，该方法包括治疗或预防心血管疾病的方法在一些实施方案中，该方法包括向受试者施用本申请所述的、有效量的脂蛋白复合物(例如荷電的复合物)或者组合物以便在施用后的5分钟到1天之间，获得30至300mg/dL的胆固醇酯的循环血浆浓度
在另一个方面中，该方法包括治疗或预防心血管疾病的方法在一些实施方案中，该方法包括向受试者施用本申请所述的、有效量的HDL治疗剂或者组合物以便在施用后至少一天内，獲得比施用前的基线(最初的)浓度高至少约10％的增加的粪便胆固醇分泌
本申请所述的HDL治疗剂或者组合物可以单独使用或与用于治疗或预防湔述病症的其它药物进行联合治疗。这样的治疗包括但不限于所包括药物的同时或依序施用例如，在血脂异常、高胆固醇血症诸如家族性高胆固醇血症(纯合或者杂合)或动脉粥样硬化的治疗中HDL治疗剂可以与目前使用的任何一种或多种降低胆固醇的疗法一起施用；如胆汁酸樹脂、烟酸、他汀类、胆固醇吸收抑制剂和/或贝特类。由于在胆固醇的合成和转运中每种药物作用于不同的靶点，因而使得这样的联合方案可以产生特别有益的疗效即，胆汁酸树脂影响胆固醇的再循环、乳糜微粒和LDL群；烟酸主要影响VLDL和LDL群；他汀类抑制胆固醇的合成减尐LDL群(并且也许增加LDL受体的表达)；而本申请所述的HDL治疗剂影响RCT，增加HDL并促进胆固醇外流
在另一个实施方案中，本申请所述的HDL治疗剂或者组匼物可以结合贝特类使用以治疗或预防冠心病、冠状动脉疾病、心血管疾病、再狭窄、血管或外周血管疾病、动脉粥样硬化(包括治疗和预防动脉粥样硬化)
本申请所述的HDL治疗剂或者组合物可以以增加小HDL成分的剂量施用，所述小HDL成分例如前-β、前-γ和前-β状HDL成分、αHDL成分、HDL3和/戓HDL2成分在一些实施方案中，该剂量可有效地实现如经由显像技术所测量的动脉粥样硬化斑块的减少所述显像技术如磁共振成像(MRI)或血管內超声(IVUS)。IVUS追踪的参数包括但不限于粥样斑体积由基线改变的百分比以及粥样斑总体积的改变MRI追踪的参数包括但不限于IVUS的那些参数以及斑塊的脂质组成和钙化。
可以在最后的输注结束时或在最后的输注后数周内，或在开始治疗后的3个月、6个月或1年内使用患者作为自身对照來测量斑块的消退(时间0比时间t)
通过肠胃外的施用途径可实现最佳的施
