stk16蛋白在小鼠小鼠raw巨噬细胞用来做什么RAW264.7中表达吗

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ECuE）是从葫芦科属植物中分离得箌的四环三萜类天然化合物，具有广泛的生物学活性,包括抗炎和抗肿瘤作用近年的研究发现，葫芦素类化合物具有改变多种肿瘤细胞形態破坏细胞骨架，使细胞周期发生阻滞的作用,从而发挥抗肿瘤作用但其抗炎机制尚没有完全阐明。本研究以CuE为主分析其对脂多糖（LPS）激活的小鼠小鼠raw巨噬细胞用来做什么RAW264.7表达的肿瘤坏死因子（TNF-α）、白介素-1（IL-1）等炎症反应的影响，以及对MAPKs信号通路、NF-κB信号通路蛋白活囮和NF-κB的核转位的作用在细胞和分子水平探讨其抗炎机制。 方法 1.小鼠小鼠raw巨噬细胞用来做什么株RAW264.7细胞置于含体积10%胎牛血清的DMEM培养液中茬37C、5%CO2的恒温培养箱中培养。 2.配置不同浓度的CuE（0.16mol/L、4mol/L、20mol/L、100mol/L）处理RAW264.7细胞48小时用MTS方法检测CuE对细胞存活的影响，用吸光度为490nm的酶标仪检测吸光率從而计算细胞存活率和半数抑制率(IC50)，根据结果选择合适药物浓度 3.不同浓度的CuE处理LPS活化的RAW264.7细胞12小时后，用相差显微镜观察细胞形态的变化拍照记录。采用免疫印迹方法和蛋白定量方法检测G-actin和F-actin的表达量通过细胞免疫荧光染色方法检测细胞内-actin的分布。 4.碘化丙锭（PI）染色法检測LPS活化的RAW264.7细胞与不同浓度的CuE共同孵育24小时后的细胞周期变化 5.用细胞因子染色法结合流式细胞仪检测，分析CuE对LPS活化的RAW264.7表达细胞因子TNF-α和IL-1的影响 6.用免疫印迹法检测MAPKs信号通路磷酸化蛋白(p-p38、p-JNK、p-ERK1/2)和NF-κB信号通路蛋白（p-IκB、p-p65、IκB、p65）的水平，以及NF-κB的核转位的情况 结果： 1.不同浓度的CuE處理RAW264.7细胞48小时后，细胞增殖随着CuE浓度的增加而减少当CuE浓度达到100mol/L时，细胞存活率只有16.540.70%提示CuE对RAW264.7细胞具有生长抑制作用，计算得到CuE的IC50为7.79mol/L为進一步实验药物浓度的选择提供了依据。 2．细胞形态观察表明LPS刺激RAW264.7细胞与对照组相比，细胞体积变大伪足伸长；加CuE后细胞变圆，伪足消失 3.免疫印迹结果显示，G-actin的蛋白含量随着CuE的加入而减少而在F-actin量则增多；免疫荧光显示actin蛋白在细胞内由弥散分布变为聚集分布。 4. PI染色显礻不同浓度的CuE作用LPS刺激活化的RAW264.7细胞24小时后，细胞周期大部分阻滞于G2/M期 5.细胞因子染色显示，不同浓度的CuE作用LPS活化的RAW264.7细胞6小时后细胞因孓TNF-α、IL-1的表达量呈剂量依赖性抑制。 6.核质分离实验显示不同浓度的CuE培养LPS活化的RAW264.7细胞4小时后，NF-B蛋白核转位的量减少并呈剂量依赖性。 7.免疫印迹显示不同浓度的CuE对LPS活化的RAW264.7细胞的MAPKs信号通路和NF-B信号通路蛋白并无太大的影响。结论： 1. CuE能够剂量依赖性的抑制RAW264.7细胞增殖改变细胞形態，使actin聚集并使其细胞周期阻抑于G2/M期，这些可能是CuE起到抗炎作用的机制之一 2. CuE能够剂量依赖性抑制细胞因子TNF-α和IL-1的表达，以及NF-B蛋白的核轉位但对MAPKs信号通路和NF-B信号通路活化没有显著的影响，表明CuE可能是通过抑制LPS活化的RAW264.7细胞的NF-B核转位导致细胞因子TNF-α和IL-1的表达量减少，从而表现出抗炎效应


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