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1、简要说明常用细胞破碎的主要方法、原理、特点、适用范围及细胞破碎今后的发展方向答:细胞的破碎:
用一定方法(机械法、物理法、化学法、酶法等)打开细胞壁或膜,使细胞的内含物有效地释放出来破碎方法
机械法非机械法固体剪切力液体剪切力干燥处理溶液作用
珠磨法压榨高压匀浆超声破誶酶溶法化学法物理
原理:机械运动产生剪切力的作用破细胞
利用高速旋转的叶片所产生的剪切力将组织细胞破碎。(10000~20000r/min)
破碎程度比上法高而其机械剪切力对生物大分子的破坏较少,处理量大
利用高压使细胞悬浮液通过针性阀,由于突然减压和高速冲击撞击环使细胞破裂适用:较柔软、易分散的组织细胞
由陶瓷的研钵和研杆组成。加入少量研磨剂(如精制石英砂、玻璃粉、硅藻土)
原理:进入珠磨機的细胞悬浮液与极细的玻璃小珠、石英沙、氧化铝等研磨剂(直径〈1mm〉一起快速搅拌或研磨研磨剂、珠子与细胞之间的互相剪切、碰撞,使细胞破碎,释放出内含物在珠液分离器的协助下,珠子被滞留在破碎室内浆液流出从而实现连续操作。
适用:微生物(细菌)与植物细胞
微生物细胞在高压下通过一个狭窄的孔道高速冲出因突然减压而引起一种空穴效应,使细胞破碎
适用:细菌(革兰氏阴性菌)
●频率为20kHZ以上的波,超过人耳可听范围其对细胞的破碎与空穴的形成有关。
一般样品浓度、声强、频率、介质的离子强度、pH、处理时間都对破碎有影响(冰浴+短时多次)
●高渗突然低渗,反复后可造成细胞破碎促使内含物释放。
●适用:处理胞壁较脆弱的微生物
●将材料深冷(-15℃~-20℃),形成水晶破坏胞膜疏水键,增加亲水性反复可破