准备从国外购买拉帕替尼多快耐药，要过海关需要什么手续吗

来源：蜘蛛抓取(WebSpider) 时间：2016-11-12 14:31 标签： 拉帕替尼多快耐药

【摘要】目的 :建立对拉帕替尼多赽耐药(lapatinib)耐药的乳腺癌SKBR3细胞株并筛选与拉帕替尼多快耐药耐药相关的基因方法:采用间隙大剂量冲击和逐步增加剂量相结合的方法诱导建立拉帕替尼多快耐药耐药的乳腺癌细胞模型;应用CCK-8(cell counting kit-8)和FCM法检测亲本、耐药细胞增殖及凋亡的情况,蛋白质印迹法检测人表皮生长因子受体2(human epidermal growth factor receptor 2,HER2)通路中相關蛋白的表达情况,应用人类全基因组表达谱芯片检测亲本和耐药细胞中基因表达的差异。结果 :CCK-8和FCM法检测结果显示,耐药SKBR3细胞对拉帕替尼多快耐药的敏感性明显降低,拉帕替尼多快耐药对亲本和耐药细胞的半数抑制浓度(half inhibition kinase1/2,ERK1/2)的表达水均明显低于亲本细胞全基因组芯片检测结果显示,差異表达基因(上调或下调)共1 598个,其中上调的基因为989个,下调的基因为609个。对差异表达基因进行功能分类,涉及氨基酸代谢、糖代谢、脂类代谢、细胞凋亡和细胞间黏附等相关细胞转导通路共391条结论:成功建立了拉帕替尼多快耐药获得性耐药的乳腺癌细胞株,细胞代谢等通路中基因的表達异常可能与乳腺癌细胞对拉帕替尼多快耐药的耐药有关。

人表皮生长因子受体2(humanepidermalgrowthfactorreceptor2,HER2)是HER家族的成员之一,该家族包括HER1(erbB1,EGFR)、HER2(erbB2,neu)、HER3(erbB3)及HER4(erbB4)研究显示,约25%~30%的乳腺癌患者中发现有HER2基因扩增或蛋白的过表达,可提示高危复发风险和预后不良[1]。拉帕替尼多快耐药(lapatinib)是一种口服的针对HER2/neu和EGFR的双重酪氨酸激酶抑制劑,可用于治疗对蒽环类、紫杉类与曲妥株单抗耐药的HER2阳性进展期或转移性乳腺癌患者[2]然而,初始治疗有效的患者可能在短期内发生获得性耐药,成为临床上一个棘手的难题[3]。有关乳腺癌细胞拉帕替尼多快耐药获得性耐药的机制国内外已有报道,研究发现可能与调控细胞生存和增殖的通路或蛋白有关[4,5]但是,拉帕替尼多快耐药获得性耐药的确切机制目前尚不完全清楚。因此,建立拉帕替尼多快耐药耐药乳腺癌细胞模型,篩选耐药相关基因,探索其耐药机制,具有重要的理论和实践意义本文以人乳腺癌细胞系SKBR3为研究对象,采用大剂量冲击和逐渐增加剂量相结合嘚方法,诱导建立拉帕替尼多快耐药耐药的细胞模型,并应用基因芯片的方法检测与拉帕替尼多快耐药耐药相关的基因。1材料与方法1.1材料人乳腺癌细胞系SKBR3(HER2高表达)购自美国模式培养物集存库(Americantypeculturecollection,ATCC),采用含10%胎牛血清和1%双抗(青霉素和链霉素)的RPMI1640培养液,置于37,CO2体积分数5%的细胞培养箱中进行培养根據细胞生长情况,每2~3d更换培养液1次并传代。拉帕替尼多快耐药由葛兰素史克英国公司惠赠,用DMSO溶解后配制成浓度为10mmol/L的母液,保存于-20冰箱中,使用时根据需要稀释成不同浓度的工 作液鼠抗人neu单克隆抗体、兔抗人磷酸化neu(phospho-neu,p-neu)单克隆抗体、鼠抗人HER3单克隆抗体、兔抗人p-HER3单克隆抗体、兔抗人p-Akt1/2/3单克隆抗体、鼠抗人p-ERK1/2单克隆抗体、辣根过氧化物酶(horseradishperoxidase,HRP)-羊抗兔IgG、HRP-羊抗鼠IgG,HRP-兔抗羊IgG及小鼠抗人-actin单克隆抗体均购自美国SantaCruz公司。CCK-8(cellcountkit-8)购自日本同仁株式会社化学研究所1.2拉帕替尼多快耐药耐药乳腺癌细胞模型的建立将SKBR3细胞接种于含拉帕替尼多快耐药的RPMI1640培养液中进行培养。拉帕替尼多快耐药的给药方式为间隙大剂量冲击和逐步增加剂量相结合,最初的诱导浓度为0.25mol/L,培养2~3d后,更换为不含拉帕替尼多快耐药的培养液,直至出现耐药的小克隆将數个培养瓶内的细胞消化后合并为1瓶继续培养。待细胞生长至80%~90%丰度后,再次用含有相同的浓度拉帕替尼多快耐药的培养液培养细胞,直至细胞鈳以耐受这一浓度后再提高浓度,继续培养,反复筛选,逐渐提高药物浓度使细胞依次能在0.250.501.02.05.0mol/L的环境下稳定生长和传代。培养至18个月时,SKBR3细胞基本鈳以耐受终浓度为5.0mol/L的拉帕替尼多快耐药,即建立了对拉帕替尼多快耐药耐药的乳腺癌细胞模型1.3生长抑制实验取对数生长期细胞,以1104个细胞/孔嘚密度接种于96孔培养板中,待细胞贴壁后,加入梯度浓度的拉帕替尼多快耐药(0.05、0.15、0.45、1.35、4.05和12.15mol/L)进行处理,分别设置空白对照组(无细胞仅有培养液)和阴性对照组[有细胞及药物溶剂DMSO(浓度<0.1%)

  • 答：拉帕替尼多快耐药（lapatinib）——┅种新的EGFR靶向治疗药物 乳腺癌晚期新药 Tykerb,是葛兰素史克公司研制的 临床试验显示,对于那些已对罗氏的赫赛汀(...

  • 答：大量临床实践证明，对中晚期病人进行大剂量放、化疗或对产生耐药的患者再次进行化疗只能导致虚弱的生命更加垂危，加速了患者死亡临床常常可以见到，患者死因不是因为癌...

  • 答：希罗达(Xeloda)是新型的选择性口服化疗药物通过三步酶链反应在肿瘤细胞内被转化为5-FU，继而杀死肿瘤细胞由于希罗達只被肿瘤组织内特有的TP酶激活而转化...

       中国国家食品药品监督管理局(CFDA)批准/与卡培他滨联用用于治疗HER2过表达且既往接受过包括蒽环类、紫杉类和曲妥珠单抗治疗的晚期或转移性乳腺癌。

       为考察/与卡培他宾联合治疗乳腺癌的有效性及安全性的三期临床试验中入选患者HER2过度表达，为晚期或转移的乳腺癌患者蒽环类抗生素、紫杉烷类及曲妥单抗無效的患者。患者随机给与拉帕替尼多快耐药1250 mg,每日1次且在第1～14天每天给予2500 mg/m2，21天一循环终末点为肿瘤进展时间。

2阳性（荧光素原位杂交法确认）95%患者经过蒽环类抗生素、紫杉烷类及曲妥单抗治疗。4个月后拉帕替尼多快耐药与卡培他宾联合治疗组与单用卡培他宾的肿瘤进展时间分别为27.1和18.6周67名转移实体瘤患者，拉帕替尼多快耐药治疗8周发现对曲妥单抗耐药的患者有效，能延长患者肿瘤进展时间

mg,患者耐受性良好，对各种实体肿瘤有效包括乳腺癌及头颈部癌症。在于5-氟尿嘧啶、亚叶酸钙及依立替康合用治疗肿瘤的试验中25名患者口服拉帕替尼多快耐药，同时给与静脉注射上述三种药物与传统化疗相比药物剂量降低40%，19名可评价患者中4名有部分反应，9名疾病处于稳定状態在对恶性唾液腺瘤的研究中，拉帕替尼多快耐药能延长患者肿瘤稳定期6个月以上且患者耐受性好。

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