如何设计Sounorthern blot 探针的探针合成引物

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细胞与抗体服务抗体制备免疫学检测细胞服务热线电话:010-
&&技术服务
分子生物学平台
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高通量测序平台
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& Southern Blot
Southern Blot
&&Southern印迹杂交(Southern blot)是1975年由英国人southern创建,是研究DNA图谱的基本技术。Southern印迹杂交是进行基因组DNA特定序列定位的通用方法。一般利用琼脂糖凝胶电泳分离经限制性内切酶消化的DNA片段,将胶上的DNA变性并在原位将单链DNA片段转移至尼龙膜或其他固相支持物上,经干烤或者紫外线照射固定,再与相对应结构的标记探针进行杂交,用放射自显影或酶反应显色,从而检测特定DNA分子的含量。信诺金达提供DIG标记的Southern Blot技术服务。&
&&1. 待杂交目标基因序列及引物。
&&2. 引物的扩增反应条件(信诺金达也可提供引物设计扩增,费用另计)。
&&3. 待杂交的高质量DNA样品(如果需要信诺金达提取,费用另计)
&&& a. DNA完整性好,您需提供电泳图;
&&& b. DNA纯度高,您需提供分光光度检测结果及1&g基因组的酶切图;
&&& c. 勿用TE溶解DNA;
&&& d. DNA浓度不低于0.7&g/ul,杂交需模板DNA约40&g/泳道/次。如不能达到要求,您需自行纯化、浓缩和再检测工作,乙方不予处理;
&&& e. 如需长途运输至乙方,可将检测合格的DNA溶液编号密封,注意切勿泄漏,低温快递。
&&4. 其他乙方认为实验必须的相关资料或材料。如质量不合格或需重复实验,请继续提供。
&&5. 实验所需非常用内切酶及特殊内切酶。
服务基本流程
&&1.基因组DNA提取(如果需要);
&&2.探针设计合成(如果需要);
&&3. DIG探针标记;
&&4. Southern杂交检测;
&&5. 提交给您电子版检测报告,包括详细操作程序和实验结果等。
服务报告内容
&&1. 剩余模板和引物。
&&2. 实验报告(详细操作步骤,胶片,胶片分析等)
基因组DNA提取
获得高纯50&g基因组DNA
¥500/样品
DNA探针设计合成
引物设计、合成及验证
¥600/基因
DIG探针标记及Southern Blot检测
标记一条探针,杂交一张膜,每张膜(1-8个样品)
标记一条探针,杂交已有的膜。
⑦如果重复2次实验仍结果不理想(背景深等),将收取5000元/膜的基础费用。
⑧如果重复2次实验仍结果不理想(背景深等),将收取3000元/膜的基础费用。
发送到或电话咨询信诺金达技术部。
咨询电话:010-21144&&QQ:
地址:北京昌平区中关村生命科学园北清创意园1-222 电话:010-
北京信诺金达生物科技有限公司 版权所有 京ICP备号 京公网安备78关注今日:16 | 主题:243008
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【求助】如何设计Southern blot的探针合成引物?
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这个帖子发布于12年零209天前,其中的信息可能已发生改变或有所发展。
最近我想做Southern BLOT,正想用PCR方法进行探针合成。我要检测的基因的基因组序列和cDNA序列都已经清楚,cDNA模板也有了,我为下面的问题犯愁:1.合成的探针应该同一个外显子还是应该跨一个内含子?2.合成的探针长度应该为多长?其杂交温度如何确定?3.探针的GC含量应该为多少好?4.探针应该设计在保守区还是非保守区,或非编码区?以上问题,请各位大虾指点,谢谢。
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liwencock 编辑于
我的问题和你的一样,我也没有找到相应的详细资料,找到的多是程序和配溶液等。我认为最为重要的是你所提到的问题,这些解决不了的话,图片再漂亮,估计也说明不了什么问题。
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我的southern也是怎么也也做不出来,想来想去感觉还是探针的问题郁闷啊有没有人知道探针怎么合成的效果好啊我是自己做的
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