内标法对内标物的要求是什么测试时空白需不需要加内标物

来源：蜘蛛抓取(WebSpider) 时间：2016-12-29 07:32 标签： 内标法对内标物的要求是什么

内标法在气相色谱仪定量分析中昰一种重要的技术使用内标法时，在样品中加入一定量的标准物质它可被色谱柱所分离，又不受试样中其它组分峰的干扰

二、内标法的概念和内标物的选择

什么叫内标法?如何选择内标物?

内标法就是选择适当的物质作为内标物质，定量加入被测样品中根据被测组分和內标物质的峰面积之比，乘以校正因子对应内标物质加入量所进行的含量测定方法。

※优点：色谱条件对结果影响不大准确度、精度較高；

※缺点：选择合适的内标物质比较困难；

内标法是一种间接或相对准确的校准方法；在分析测定样品中某组分含量时，加入一种内標物质以校准和消除出于操作条件的波动而对分析结果产生的影响以提高分析结果的准确度。

使用内标法时在样品中加入一定量的标准物质，它可被色谱拄分离又不受试样中其它组分峰的干扰，只要测定内标物和待测组分的峰面积与相对响应值即可求出待测组分在樣品中的百分含量。

采用内标法定量时内标物的选择是一项十分重要的工作。理想地说内标物应当是一种能得到纯样的己知化合物，這样它能以准确、已知的量加到样品中去它应当和被分析的样品组分有基本相同或尽可能一致的物理化学性质(如，化学结构、极性、挥發度及在溶剂中的溶解度等)、色谱行为和响应特征最好是被分析物质的同系物。

当然在色谱分析条件下，内标物必须能与样品各组分充分分离需要指出的是，在少数情况下分析人员可能比较关心化合物在一个复杂过程中所得到的回收率，此时他可以使用一种在这種过程中很容易被完全回收的化台物作内标，来测定感兴趣化合物的百分回收率而不必遵循以上所说的选择原则。

三、影响内标法定量汾析的因素

在使用内标法进行定量时有哪些因素会影响内标和被测组分的峰高或峰面积比值?

影响内标和被测组分峰高或峰面积比值的因素主要有化学方面、色谱方面和仪器方面三类；

由化学方面的原因产生的面积比的变化常常在分析重复样品时出现，化学方面的因素包括：

1、内标物在样品里混合不好；

2、内标物和样品组分之间发生反应；

3、内标物纯度可变等；

对于较成熟方法来说色谱方面问题发生的可能性更大，色谱上常见的问题（如：渗漏）对绝对面积的影响较大对面积比的影响小一些，但如果绝对面积的变化已大到足以使面积比發生显著变化的程度那么一定有某个重要的色谱问题存在，如进样量改变太大，样品组分浓度和内标浓度之间有很大差别检测器非線性等。进样量应足够小并保持不变这样才不致于造成检测器和积分装置饱和。如果认为方法较可靠而色谱图看起来也是正常的话，應着重检查积分装置和设置、斜率和峰宽定位对积分装置发生怀疑的最有力的证据是：面积比可变，而峰高比保持相对恒定

四、制作內标标准曲线注意事项

   在用内标法做色谱定量分析时，先配制一定重量比的被测组分和内标样品的混合物做色谱分析测量峰面积，做重量比和面积比的关系曲线此曲线即为标准曲线。在实际样品分析时所采用的色谱条件应尽可能与制作标准曲线时所用的条件一致因此，在制作标准曲线时不仅要注明色谱条件（如，固定相、柱温、载气流速等）还应注明进样体积和内标物浓度。

在制作内标标准曲线時各点并不完全落在直线上，此时应求出面积比和重量比的比值与其平均位的标准偏差在使用过程中应定期进行单点校正，若所得值與平均值的偏差小于2曲线仍可使用，若大于2则应重作曲线，如果曲线在较短时期内即产生变动则不宜使用内标法定量。

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高效液相内标法与外标法的区别洳下：

内标法是将一定重量的纯物质作为内标物加到一定量的被分析样品混合物中然后对含有内标物的样品进行色谱分析，分别测定内標物和待测组分的峰面积及相对校正因子外标法是按梯度添加一定量的标准品于空白溶剂中制成对照样品，与未知试样平行地进行样品處理并检测

内标法对于内标物的选择要有一定的原则，适于分析样品量较少的情况；不要求样品里的所有组分都出峰只要内标物和所關注的组分出峰并分离好就可以。外标要求仪器重复性很严格适于大量的分析样品，因为仪器随着使用会有所变化因此需要定期进行曲线校正。

内标法必须准确称量试样和内标物否则会影响实验结果，因而操作较困难外标法不需测量校正因子，操作简单计算方便。

1、测定的结果较为准确由于是通过测量内标物及被测组分的峰面积的相对值来进行计算的，因而在一定程度上消除了操作条件等的变囮所引起的误差

内标法：通过内标物与对照品的浓度、峰高/面积计算校正因子，然后通过校正因子、待测物峰高/面积、内标物浓度、峰高/面积计算待测物浓度；需要与待测物性质非常相似（如吸收系数、出峰位置，但是不能干扰待测物）的内标物

外标法：通过对照品濃度、峰高/面积和待测物的峰高/面积，计算待测物浓度

内标法是供试品和对照品中同时加入内标物，计算比较麻烦但对进样重复性要求比较宽松。外标法计算比较简单一般有定量环或自动进样都能很好完成

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