平板计数培养基琼脂培养后，为什么会出现一块一块的

来源：蜘蛛抓取(WebSpider) 时间：2017-06-07 00:54 标签： 琼脂平板培养法
食品常规理化分析
主题：【求助】普通平板计数琼脂培养细菌能培养出霉菌吗?
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发表于： 08:20:42
不知道论坛里是否有朋友试过做霉菌培养时用的是普通培养基或者用专用培养基用的是普通培养箱培养霉菌
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检验方法：　　霉菌和酵母的计数方法，与菌落总数的测定方法基本相似。主要步骤为：　　将样品制作成10倍梯度的稀释液，选择3个合适的稀释度，吸取1mL于平皿，倾注培养基后，培养观察，计数。　　对霉菌的计数，还可以采用显微镜直接镜检计数的方法。　　具体检测标准参见：　　GB，《中华人民共和国国家标准 食品卫生微生物检验 霉菌和酵母计数》说明：　　1．样品的处理。为了准确测定霉菌和酵母数，真实反映被检食品的卫生质量，首先应注意样品的代表性。对大的固体食品样品，要用灭菌刀或镊子从不同部位采取试验材料，再混合磨碎。如样品不太大，最好把全部样品放到灭菌均质器杯内搅拌2min。液体或半固体样品可用迅速颠倒容器25次来混匀。　　2．样品的稀释：为了减少榈稀释倍数的误差，在连续递增稀释时，每一稀释度应更换一根吸管。在稀释过程中，为了使霉菌的孢子充分散开，需用灭菌吸管反复吹吸50次。　　3．培养基的选择：在霉菌和酵母计数中，主要使用以下几种选择性培养基。　　马铃薯-葡萄糖-琼脂培养基（PDA）：霉菌和酵母在PDA培养基上生长良好。用PDA作平板计数时，必项加入抗菌素以抑制细菌。　　孟加拉红（虎红）培养基：该培养基中的孟加拉红和抗菌素具有抑制细菌的作用。孟加拉红还可抑制霉菌菌落的蔓延生长。在菌落背面由孟加拉红产生的红色有助于霉菌和酵母菌落的计数。　　高盐察氏培养基：粮食和食品中常见的曲霉和青霉在该培养基上分离效果良好，它具有抑制细菌和减缓生长速度快的毛霉科菌种的作用。　　4．倾注培养。每个样品应选择3个适宜的稀释度，每个稀释度倾注2个平皿。培养基熔化后冷却至45℃，立即倾注并旋转混匀，先向一个方向旋转，再转向相反方向，充分混合均匀。培养基凝固后，把平皿翻过来放温箱培养。大多数霉菌和酵母在25－30℃的情况下生长良好，因此培养温度25~28℃。培养3d后开始观察菌落生长情况，共培养5d观察记录结果。　　5．菌落计数及报告：选取菌落数10~150之间的平板进行计数。一个稀释度使用两个平板，取两个平板菌落数的平均值，乘以稀释倍数报告。固体检样以g为单位报告，液体检样以mL 单位报告。关于稀释倍数的选择可参考细菌菌落总数测定。　　6．霉菌直接镜检计数法：对霉菌计数，可以采用直接镜检的方法进行计数。　　在显微镜下，霉菌菌丝具有如下特征： 　　平行壁：霉菌菌丝呈管状，多数情况下，整个菌丝的直径是一致的。因此在显微镜下菌丝壁看起来象两条平行的线。这是区别霉菌菌丝和其他纤维时最有用的特征之一。　　横隔：许多霉菌的菌丝具有横隔，毛霉、根霉等少数霉菌的菌丝没有横隔。　　菌丝内呈粒状：薄壁、呈管状的菌丝含有原生质，在高倍显微镜下透过细胞壁可见其呈粒状或点状。　　分枝：如菌丝不太短，则多数呈分枝状，分枝与主干的直径几乎相同，有分枝是鉴定霉功得出可靠的特征之一。　　菌丝的顶端：常呈钝圆形。　　无折射现象。　　凡有以上特征之一的丝状均可判定为霉菌菌丝。　　观察视野中有无菌丝，凡符合下列情况之一者为阳性视野。　　一根菌丝长度超过视野直径1/6；　　一根菌丝长度加上分枝的长度超过视野直径1/6；　　两根菌丝总长度超过视野直径1/6；　　三根菌丝总长度超过视野直径1/6；　　一丛菌丝可视为一个菌丝，所有菌丝（包括分枝）总长度超过视野直径1/6。　　根据对所有视野的观察结果，计算阳性视野所占比例，并以阳性视野百分数（%）报告结果。计算公式： 　　每件样品阳性视野（%）=（阳性视野数 / 观察视野数）×100您的位置：&
>平板计数琼脂使用常见的问题及使用方法
平板计数琼脂使用常见的问题及使用方法
提供者：杰辉生物（北京）科技发展有限公司 &&发布时间：&&阅读次数：265次&&
&平板计数琼脂使用常见的问题及使用方法平板计数琼脂使用常见问题：1. 低血清培养基能用肉眼判断其pH值吗？答：低血清培养基中酚红的含量与普通培养基中的酚红含量不同，不能通过肉眼观察或通过经验来判定pH值，建议使用pH计进行测定。2. 低血清培养基的缓冲系统是什么？答：平衡盐一般是由无机盐及葡萄糖组成的。平衡盐有Hanks&系统、Earle&s系统、Dulbecco&s磷酸缓冲盐系统等。199系列培养基、MEM系列培养基均有Hanks&系统的培养基及Earle&s系统的培养基。但是有些培养基均不是以上常规的平衡盐系统，例如RPMI 1640培养基、F12培养基。MEM（SLM）低血清培养基的平衡盐系统也不是常规的平衡盐系统，该平衡盐系统的缓冲能力强于常规平衡盐系统的缓冲能力。3. 谷氨酰胺溶液和碳酸氢钠的配制方法是什么？答：以0.2mol/L的 L-谷氨酰胺配制为例：称取L-谷氨酰胺2.92g，加注射用水100ml，充分搅拌混匀。用0.2&m滤膜正压过滤除菌。溶液应在4℃下避光保存，2周内使用。以7.5% NaHCO3的配制为例：称取NaHCO37.5g溶于100ml蒸馏水中过滤除菌。4. 什么培养基中可以省去加酚红？答：酚红在培养基中用作pH值的指示剂：中性时为红色，酸性时为黄色，碱性时为紫色。酚红本身对生物制品质量并不会产生影响，可以通过纯化技术去除，但酚红在无血清培养基可能带来胞内钠/钾失衡，影响细胞生长，当然这种作用能被血清所中和或减轻。 酚红并不是培养基中必需的一种成分，很多国外的疫苗或抗体生产企业在生产过程中都使用无酚红培养基。5. 放置在冰箱中的培养基颜色会发生变化，为什么？答：培养基保存于4℃冰箱中，培养基内CO2 会逐渐溢出，造成培养基越来越偏碱性。而培养基中酸碱指示剂（通常为phenol red）的颜色也会随碱性增加而更偏暗红。培养基偏碱后再用于细胞培养将造成细胞生长停滞或死亡。培养基偏碱时，可以通入无菌过滤的CO2，以调整pH值。6. 无血清培养与有血清培养使用的抗生素量一样吗？答：当在无血清培养基中添加抗生素时，降低至少在有血清培养基中所使用浓度的50%。因为血清中的蛋白会结合和灭活一些抗生素。而在无血清培养条件下，抗生素不被灭活。平板计数琼脂使用方法：1、&&&称取本品23.5g，加入蒸馏水或去离子水1 L，搅拌加热煮沸至完全溶解，分装三角瓶，121℃高压灭菌15min，备用。2、&&&样品的稀释及处理，略。3、&&&根据商检的标准要求或对标本污染情况的估计，选择2&3个稀释度，分别在10倍递增稀释的同时，即以吸取该稀释度的吸管移1mL稀释液于灭菌平皿内，每个稀释度做两个平皿。4、&&&稀释液移入平皿后，应及时将凉至45℃的琼脂培养基（可放置于45℃水浴箱保温）注入平皿约15mL，并转动平皿使混合均匀。同时将琼脂培养基倾入加有1mL稀释液的灭菌平皿内作空白对照。5、&&&待琼脂凝固后，翻转平板，置36&1℃温箱内培养48&2h。6、&&&观察结果并进行计数。25-250个菌落为合适范围。&
关键词：&&&&&&&&&&&&
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我在平板计数琼脂上做的细菌培养,可是整个平皿长满了白色的菌落,没有明显界限,为什么啊
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污染了杂菌,或者是接种的菌太多了,长出了很多菌落,再有就是培养时间过长.
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看来是无菌技术不到位，被污染了
个人操作没问题。按照规定来的，还可能是被哪种情况污染了呢？
菌浓度太高了。。。。
这肯定是污染了，从倒平板到划平板，建议仔细操作
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