如果pcr电泳条带图的解读很强,是否荧光定量pcr结果就高

新手求指教:请问做实时荧光定量PCR还需要跑电泳吗感觉跑电泳也就是看RNA的完整性,直接用紫外分光检测器不是可以直接测出浓度和纯度吗总觉得跑电泳没必要啊。。

紫外分光光度计检测的是RNA的浓度及是否有蛋白、酚类(就是在氯仿离心取上清的时候是不是吸到了中间层和下层已经酒精洗异丙醇是否完全)的污染,而RNA电泳则是检测提取的RNA这个过程中是否有降解如果是miRNA还好一些,如果是mRNA一旦你的目的mRNA被降解了(也就是RNA电泳出现了3條以上的条带或者18s,28s不合格)那后续实验也就没有必要了。所以我认为,要想出一个靠谱的实验也为了避免实验结果显示的乱七八糟,还是做一下比较好还有一种电泳则是cDNA电泳,那是半定量必须要做的一步但对于QPCR来说,做了无非是锦上添花不做也无可厚非。甚臸有时候就是浪费时间而已。。

不知道你说的跑电泳是PCR之前还是之后呢1.如果是之前的RNA电泳,所指的完整性为是否是标准的三条带:5S、18S、28S紫外测OD是指总体的完整性,一般以1.9-2.0为指标看有没降解还可以顺便看下有无蛋白残留和盐离子浓度。RNA的质量对做反转录和基因表达嘚结果非常重要2.如果你指的是PCR之后的…………不对,PCR之后没RNA了不过还是多嘴说一句吧,定量PCR之后还想跑下电泳的情况一般是怀疑扩增曲线可能不是目的片段,那可以辅助跑个电泳对比marker看扩增产物是不是你要的东西3.这个实验做出来容易,做出你想要的结果不容易如果是刚开始做的话,还是多尝试多摸索吧!

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