如何平衡比例装置测试技术和业务之间的比例

来源：蜘蛛抓取(WebSpider) 时间：2017-06-12 09:28 标签： 平衡比例装置

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江西西河机械设备有限公司（原江西西河机械厂）主要产品包含消防炮、炮塔、泡

摘要： 机械泵入式泡沫比例混合裝置的优点是:混合比精确,结构简单,操作方便,安全性能高,占地面积小.但由于该装置的核心设备尚未国产化,因此目前在石化项目中的应用较少.通过机械泵入式泡沫比例混合装置与传统的平衡比例装置式泡沫比例混合装置的比较,来说明其应用优势.并根据其在某大型石化项目的实践應用,指出需要注意的事项,旨在其他石化项目中可以应用和借鉴.  

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本发明涉及生物技术领域尤其涉及一种快速分析菌体裂解液中开环质粒和超螺旋质粒比例的检测方法。

超螺旋质粒在DNA疫苗、基因治疗和细胞治疗有着广泛应用随着基洇治疗和细胞治疗获得越来越多的关注和研究，对质粒DNA进行分析定量、检测其中超螺旋DNA含量在其工业化生产中显得至关重要传统的分析超螺旋质粒含量的方法有定性的琼脂糖凝胶电泳、定量的毛细管电泳和高效液相色谱法。琼脂糖凝胶电泳是分子生物学中最基本的一项技術虽然操作简单、对设备要求低，但是分辨率不高只能定性地检测超螺旋的比例。高效液相色谱法和毛细管电泳法可以更加精准地定量超螺旋质粒和开环质粒的含量但是昂贵的设备和耗材要求使在工艺研发初始阶段和质检设备体系不够完善的情况下，很难开展相关定量分析

本发明的目的在于开发一种基于亲硫性亲和填料的分析开环和超螺旋质粒的方法。该分析方法和常规的层析纯化实验类似无需專门的高效液相色谱仪和毛细管电泳仪，特别适合在质检设备体系不够完善、急需相关数据支持的工艺研发初始阶段使用

本发明提供了┅种快速分析开环质粒和超螺旋质粒比例的检测方法，包括以下几个步骤：

步骤A：将待测质粒溶液同饱和硫酸铵溶液混合均匀；

步骤B：通過亲和层析对样品进行分析

优选地，步骤A中选择0.22 μm或0.45 μm的滤器进行过滤

优选地，步骤B中的上样量为不超过一个柱体积

优选地，步骤B嘚操作过程为先用平衡比例装置流动相冲洗层析柱直至电导和紫外吸收基线稳定；然后将步骤A中获得的样品流经层析柱；再用平衡比例裝置流动相冲洗层析柱直至电导和紫外吸收基线稳定；最后用洗脱流动相以线性洗脱模式洗脱层析柱，监测紫外吸收值

优选地，步骤B中計算开环质粒和超螺旋质粒比例的方法为对开环质粒和超螺旋质粒的260 nm吸收峰进行积分，计算峰面积峰面积之比即为开环质粒和超螺旋嘚质粒比例。

本发明的分析开环质粒和超螺旋质粒比例的方法简单快速无需专门的高效液相色谱仪，实验室级别的制备层析仪也可实现如GE Healthcare的AKTA系列层析系统。

图1：4种菌体裂解液中的开环质粒和超螺旋质粒分析的层析图谱

下面结合附图，对本发明的较优实施例作进一步的詳细说明：

步骤B：层析分析（图1）

1）将步骤A中的混合液用0.22 μm针头滤器过滤推入层析仪的上样环；

6）用超纯水再生层析柱；

7）层析结束后，对开环质粒峰和超螺旋质粒峰进行积分得到开环质粒和超螺旋质粒的比例。

结果表明本发明的开环质粒和超螺旋质粒比例的分析方法具有快速简单的特点，一个样品的分析时间在30 min以内

以上所述仅为本发明的较佳实施案例，并不用以限制本发明不能认为具体实施只局限于这些说明。对于本发明的原则之内所做的任何修改、替换或改进等均应包含在本发明的保护范围内。

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