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HPV、P16和Rb对宫颈肿瘤发生的影响及机制
[目的]①探讨人乳头瘤病毒(Humanpapillomavirus，HPV)联合宫颈液基细胞学(Thin-prepCytologyTest，TCT)检测在宫颈病变诊断中的临床意义，以及HPV负荷量与宫颈病变程度间的相关性。
②采用基因芯片检测及免疫组织化学技术，观察HPV基因亚型与Rb、p16蛋白在正常宫颈组织，CIN组织和宫颈癌组织中的表达特点及意义，有助于深入认识其在宫颈肿瘤发生发展中的作用。
[方法]①2005年11月～2006年11月，对我院妇科门诊就诊的2350名妇女，行宫颈TCT和高危型HPV检测(HC-Ⅱ)，并对TCT异常者行阴道镜下宫颈活检病理检查。
②对我院2003年1月～2007年3月间病理科保存的石蜡包埋组织切片110例，其中宫颈癌58例，CINⅡ-Ⅲ28例，CINⅠ14例，行HPV基因芯片分型检测。
③Rb、p16蛋白的检测应用免疫组化法，取我院病理科石蜡包埋组织切片180例为标本(包含上述行HPV分型检测的切片)，其中宫颈癌85例，CINⅡ-Ⅲ40例，CINⅠ35例，以及正常宫颈组织20例。
[结果]①HPV高危阳性患者共895例，阳性检出率为38.09％。在TCT结果为正常组、ASCUS、ASC-H、LSIL、HSIL中，HPV阳性率分别为27.60％、52.30％、61.31％、86.11％、91.25％。将HPV负荷量由低至高行数量分级后，TCT异常率分别为12.92％、25.93％、41.38％、50.52％、65.74％；病理结果异常率分别为10.11％、31.75％、41.38％、53.02％、54.23％。
②HPV在CINⅠ、CINⅡ-Ⅲ、宫颈癌三组之组织中，总阳性率分别为50.00％、64.29％、87.93％。在这些呈阳性的标本中，位于前三位的HPV型别为：CINⅠ组中依次是HPV16、HPV33、HPV11；CINⅡ-Ⅲ组中依次是HPV16、HPV58、HPV33；宫颈癌组中依次是HPV16、HPV18、HPV52℃INⅠ、CINⅡ-Ⅲ及宫颈癌中HPV单一、双重和多重感染致病力比较无差异．宫颈癌中HPV总阳性率与患者年龄、淋巴结有无转移以及肿瘤直径大小的关系密切。宫颈鳞癌以HPV16为主要亚型(68.49％)，腺癌以HPV18为主要亚型(36.36％)。
③p16蛋白在正常宫颈，CINⅠ、CINⅡ-Ⅲ及宫颈癌三组的组织中，表达的阳性比例分别为50.00％，69.70％、75.00％、89.47％。Rb蛋白在正常宫颈、CINⅠ、CINⅡ-Ⅲ及宫颈癌组织中，表达的阳性比例分别为100.00％、90.63％、80.95％、68.67％。Rb与P16蛋白表达在宫颈癌中呈负相关(P=0.0246)。p16蛋白在宫颈癌患者年龄、肿瘤直径中的表达差异有统计学意义，Rb在宫颈癌患者年龄中的表达差异有统计学意义。P16由弱至强阳性的表达中，HPV感染率为42.86％、77.78％、92.86％、100.00％(P=0.0020)。Rb由弱至强阳性的表达中，HPV感染率为94.44％、89.47％、75.00％、60.00％(P=0.1894)。
[结论]①在TCT异常者中，病变程度越高，高危型HPV感染率则越高，且宫颈病变发生率及严重程度与病毒负荷量密切相关，随着病毒负荷量增加，宫颈病变发生率增加，其病变程度也相应越重。
②对宫颈病变组织行基因芯片分型检测，证实HPV16为导致宫颈病变的主导亚型，多重型别感染不增加HPV的致病力。HPV感染呈现年轻化趋势。肿瘤直径越大，有淋巴结转移者的HPV感染率明显增加。宫颈鳞癌以HPV16为主要亚型，腺癌则以HPV18为主要亚型。
③应用免疫组化法证明：p16蛋白在宫颈病变组织的表达随病变程度加重而逐渐升高；而Rb蛋白的表达随病变程度加重则逐渐下降。两者在宫颈癌的表达中呈负相关。随着患者年龄增大(＞40)、淋巴结有转移，以及肿瘤直径≥4cm时，P16的表达会逐渐下降；随着患者年龄增大(＞40)，Rb的表达也会逐渐下降。HPV感染后E7与Rb优先结合，进而使P16蛋白表达升高，因此HPV致癌的中心环节就是HPVE7和Rb之间的相互作用。
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400-819-9993HPV 16/18精确分型及采样和储存方法用于宫颈癌筛査的研究--《北京协和医学院》2015年博士论文
HPV 16/18精确分型及采样和储存方法用于宫颈癌筛査的研究
【摘要】：研究目标评估HPV16/18精确分型用于宫颈癌筛查的作用和意义以及采样和储存方法用于HPV DNA检测的稳定性和有效性。为HPV DNA检测可广泛应用于我国宫颈癌筛查及宫颈癌防治策略的制定提供科学依据。研究方法首先,我们于2014年5月对河南新密市宫颈癌基线筛查队列人群进行了随访。该人群在基线完成了cobas、HC2医生采样、HC2自采样、careHPV医生采样和careHPV自采样5种HPV DNA检测,在随访时对该人群进行了cobas HPV检测。对比cobas HPV检测与其他4种检测检出高危型HPV的一致性及检出宫颈癌前病变的有效性和准确性。前瞻性评估基线高危型HPV、HPV16及HPV 16/18持续感染对宫颈癌前病变发生风险的预测作用。同时通过一项以人群为基础的横断面研究评估HPV 16/18用于ASC-US和LSIL人群分流的作用。其次,通过一项以人群为基础的横断面研究收集研究对象的宫颈脱落细胞标本,将其保存在不同的储存介质中,采用careHPV和HC2对其进行HPV DNA检测,对比评估两种方法用于不同储存介质检出HPV的一致性。我们开展了一项以医院为基础实验流行病学研究。在阴道镜门诊按照随机采样顺序采用干拭子和细胞学采样刷收集细胞学结果异常或者HPV DNA阳性妇女的宫颈脱落细胞标本,将其分别放入离心管和置于细胞学保存液中。将研究对象的两份标本按照随机原则在室温条件下放置2天、7天、14天和28天。采用cobas进行HPV DNA检测。评估细胞学标本和干拭子标本用于cobas检测的一致性及其检出宫颈癌前病变的有效性。研究结果1. cobas、HC2医生采样、HC2自采样、careHPV医生采样和careHPV自采样五种检测方法检出该部分人群CIN2+的灵敏度和特异度分别为94.4%和63.1%,94.4%和63.9%,91.7%和51.9%,94.4%和65.5%,80.6%和61.5%。对于基线病理诊断结果为阴性的人群,cobas检测高危型HPV、HPV16、HPV16/18阳性人群3年后发生CIN2+的风险分别为基线高危型HPV阴性人群的9.00(95%CI：1.91-42.35)倍、22.47(95%CI：4.52-111.78)倍和19.02(95%CI：3.80-95.12)倍。基线HC2医生采样和careHPV医生采样3年后患CIN2+的风险均比基线HC2医生采样和careHPV医生采样阴性人群高,RR值分别为9.71(95%CI:2.05-45.88)和4.07(95%CI：1.18-14.01)。高危型HPV、HPV16和HPV16/18持续性感染的人群发生CIN2+的风险分别为基线cobas检测HPV阴性人群的24.14(95%CI：4.57-127.49)倍、58.01(95%CI：10.93-307.95)倍和47.68(95%CI：8.88-256.17)倍。在细胞结果为ASC-US和LSIL的妇女中,HPV 16/18检出CIN2+的灵敏度和特异度分别为81.8%(95%CI：52.3%-94.7%)和90.9%(95%CI:87.2%-93.6%); 66.7%(95%CI:35.4%-87.9%)和83.8% (95%CI:73.3%-90.7%)。2. careHPV vs HC2 (STM)、careHPV vs HC2 (TCM)以及HC2C(TCM) vs HC2(STM)检出高危型HPV总体一致率和Kappa(K)值分别为95.8%(K=0.82)、96.7%(κ=0.86)和97.2%(k=0.88)。careHPV、HC2 (STM)和HC2 (TCM)检出宫颈上皮内瘤变2级及以上(CIN2+)的灵敏度和特异度分别为70.0%和87.5%,100.0%和87.9%,90.0%和87.4%。细胞学标本和干拭子标本用于cobasHPV检测检出高危型HPV、HPV 16、HPV 18和其他高危型HPV的一致率分别为93.8%,97.8%,99.4%和93.2%, Kappa值分别为0.87、0.94、0.94和0.86。细胞学标本和于拭子标本检出CIN2+的灵敏度和特异度分别为89.9%和53.2%,91.9%和52.2%。细胞学标本和干拭子标本检出CIN3+的灵敏度和特异度分别为92.9%和48.6%,93.5%和47.0%。结论1. cobas检测、HC2医生采样和careHPV医生采样检测检出宫颈癌前病变的一致性较好。基线感染高危型HPV 16/18的人群发生CIN2+的风险明显增高。HPV 16/18持续性感染与宫颈癌前病变发生密切相关。因此,采用HPV DNA检测进行宫颈癌一线筛查时,HPV16和HPV18精确分型对高危型HPV阳性人群分流管理有重要的意义。2. careHPV检测与HC2用于不同标本储存液检测检出高危型HPV的一致性较好。作为一种简单、快速、准确、方便和廉价的HPV DNA检测方法,careHPV有望用于广大欠发达地区宫颈癌的筛查。干拭子标本和细胞学标本在不同储存时间组用于cobas检测均有较好的一致性。不施加任何措施将干拭子标本在室温条件下干放1个月不会影响cobas检测结果的准确性以及检出宫颈癌前病变的有效性。干拭子标本将促进cobas HPV检测在地收入地区宫颈癌筛查项目中的推广。
【学位授予单位】：北京协和医学院【学位级别】：博士【学位授予年份】：2015【分类号】：R737.33
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