菜鸟求助，关于发帖机器人的问题_百度知道
菜鸟求助，关于发帖机器人的问题
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openAction-&setStatusTip(tr(&Open an existing file&quot，但是图片显示不出来，文件是这样的：&RCC&gt。手动添加了资源文件;:&#47, this. openAction = new QAction(QIcon(&qresource prefix=&/
openAction-&gt, tr(&quot:open);
openAction = new QAction(QIcon(&addAction(openAction):C2064;Main Window&))添加一个菜单和一个图标的程序:这行编译没问题;:/
statusBar-&addAction(openAction); }
MainWindow:：1，现在问题有两个，
&lt:MainWindow(QWidget *parent) :
QMainWindow(parent) {
setWindowTitle(tr(&
QToolBar *toolBar = addToolBar(tr(&&File&quot, &MainWindow:;
QMenu *file = menuBar()-&addMenu(tr(&
QStatusBar *statusBar = statusBar() ;
statusBar-&gt::information(this；2; 这两行代码有问题;addAction(openAction);&File&));images&));
connect(openAction, &QAction:;&gt:项不会计算为接受0个参数的函数;setShortcuts(QKeySequence:~MainWindow() { }
void MainWimages/doc-open&), tr(&&Open...&), this)::open() {
QMessageBfile alias=&doc-open&&document-open.png&));
toolBar-&addAction(openAction)。MainWindow:;
file-&/file&
&/qresource&&&#47..&), this);RCC&哪位大侠帮忙看一下，代码附在下面;
QStatusBar *statusBar = statusBar() ;Information&), tr(&Open&));images/doc-open&), tr(&&Open.
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7) 氢化铝锂反应结束后,在剧烈搅拌下,用冰水、乙酸乙酯、以及十 水硫酸钠等小心滴加淬灭反应。 8) DIBAL-H 在使用过程中要严格控制反应体系无水无氧,并在低温...
(酸或碱)淬灭后有机溶剂稀释点有机相和水相; 对不同化合物判断一定要点交叉点;Rf=0.5为宜;较难检测的体系:DMF,DMSO,NMP等水溶性的溶剂;POCl3,氢化铝锂,...
1.2.2中间体3的合成N:气保护下,将1.00g(5.10mm01)化合物2溶于25mLTHF中,加入氢化铝 锂0.10g(2.63mm01)。室温搅拌3 h,加饱和食盐水淬灭反应,乙酸乙酯...关注今日：0 | 主题：291732
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【求助】taqman探针的荧光基团和淬灭基团的问题
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这个帖子发布于3年零78天前，其中的信息可能已发生改变或有所发展。
关于taqman探针的荧光基团和淬灭基团，我一直有以下疑问：<font style="color:#、为什么荧光基团标记在5端，淬灭基团标记在3端，能不能反过来？<font style="color:#、能不能两个集团标记的近一点，比如，荧光基团标记在5端，淬灭基团标记在中间dTNP上？期待高手指点。
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1.我觉的完全可以倒过来，但只要符合碱基替换就可以，外加修饰无非是OH键或NH键，如果2个报告基团是固定什么键替换，那就没办法倒了。如果是随意的，我觉的倒过来没关系的，但荧光基团被游离出来后才会发光，放在5‘端应该更容易被游离出来，当然了taqman的反应总共才几十bp，放3’端，应该也能切下来；2.这个有两个考虑，一个是，加了基团后，往往是无法再继续延伸了，参考SBS测序法，有荧光的反应就被终止了，然后荧光扫描，扫完，需要把这个基团切除，才能继续合成；当然也有可能有一些基团是可以继续合成的，比如dCTP，但这种基团的空间位阻很大，合成进去的效率很低，并且在合成这种修饰的oligo时，要么在5‘端，统一做一次修饰，要不合成完了，在3’端统一做修饰，你说在中间修饰，这个合成工艺难度是很大的。并且完全没必要在中间啊，总共也才20nt不到。3.如果你是服务商，可以做深入的研究，如果你只是普通使用者，关心这些问题，有点本末倒置了。你应该关心你的实验，这些原理了解一下就可以，没必要提一些不着边际的问题，这些对你的研究没有半点帮助。
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很感谢的回答，我这几天也查看了一些最初的技术专利和早期文献，这两个问题也清晰多了。我在小桔灯论坛上的答复是这样的：这两个问题很显然不是我们日常考虑到的问题，但是一定是方法建立时发明人考虑的问题，因此我特意的查询了相关专利和文献，也确实找到了一些蛛丝马迹，因此自问自答一次，希望给有同样疑惑的同仁们一些解答吧。第一个问题：我的理解是这样的，两个基团互换，原则上应该没有大的影响，但是我们采用的Taq酶是利用5-3外切酶，我们常见的思维是优先标记5端，这样优先被切割掉，有利于荧光信号的释放，早期的研发专利荧光基团和淬灭基团都标记在5端或近5端，如果查看专利US7205105等MGB相关专利的话，发现一度出现淬灭基团是标记在5端，荧光基团是标记在3端的探针。所以对于这个问题，不需要再深究了，就好比通往目的地有两条平行的路，我们选择了走其中一条，然后我们问为什么不走另一条路是一样的问题。第二个问题：这个问题可以参考两篇文献：《Oligonucleotides with fluorescent dyes at opposite ends provide a quenched probe system useful for detecting PCR product and nucleic acid hybridization》、《Design and Synthesis of Fluorescence Energy Transfer Dye-Labeled Primers and Their Application for DNA Sequencing and Analysis》，在第一篇文献中，作者研究了淬灭基团在不同位置对结果的影响，研究发现，标记在3端末端信号与标记在中间7-27等位置几乎没有显著差异，作者认为没有差异的原因是单链探针的结构的柔韧性（flexibility），所以双标记探针标记在两个顶端最好方案，第二篇文献，作者研究了淬灭基团分别标记在距荧光基团1、2、3、4、10碱基的位置，研究发现距离10个碱基位置效果最佳。目前供应商也提供标记在中间的服务，价格较贵一点点儿，工艺上也困难一点，因此普遍采用的是目前的做法。
还是很感谢您的回答，您的答案从合成工艺角度出发也确实是我知识结构中的欠缺点。我不认为关注这些问题是本末倒置，我让为是知其然要知其所以然，这样在设计相关引物和探针的时候才能更好地把握原则性，有时候也能知道问题到底出在了什么地方，你说对不对？
我考虑这两个问题有一段时间了，最初采取网上搜索，几乎没有答案，之后在论坛上发帖子，最初发在我自己管辖的论坛小桔灯上，结果十几天没有回复，我有挂在小木虫和丁香园上，这才有了您的回复，在此同时我花了3天时间查询相关专利和文献，终于在最初的研究中找到了答案！我想我这种做法是对的，我对这个方法（Taqman、分子信标以及其他的相关方法）有了更深刻的理解，只有理解了前人的做法，我想我们才能在他们基础上进行改进，不然我们还迷失在他们的研究中，你是不是还觉得没有半点帮助吗？在此感谢您的答复，让我们积极交流解决问题。祝好
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