高效离子色谱法测定乳及乳制品中低聚果糖含量--《乳业科学与技术》2012年01期
高效离子色谱法测定乳及乳制品中低聚果糖含量
【摘要】：建立离子色谱法定量测定乳及乳制品中低聚果糖的方法,应用CarboPacTMPA1(4mm×250mm)阴离子交换柱、氢氧化钠和醋酸钠淋洗液梯度淋洗、脉冲安培检测器检测。6次测定液态奶中低聚果糖的含量,相对标准偏差小于9%,3种糖的加标回收率在94.8%～103.6%之间。本方法简单快捷,适用于乳及乳制品中低聚果糖含量的检测。
【作者单位】：
【分类号】：TS252.7;O657.75
欢迎：、、)
支持CAJ、PDF文件格式，仅支持PDF格式
【共引文献】
中国硕士学位论文全文数据库
丁红梅;[D];西南大学;2008年
【二级参考文献】
中国期刊全文数据库
毕颖;刘燕;张平;孙树坤;朱秀清;邵弘;;[J];大豆通报;2006年03期
甘宾宾;[J];广西化工;1999年03期
陈亚非,罗琦珊,葛亚中;[J];现代食品科技;2005年04期
李健;韩德权;王亚筠;;[J];哈尔滨商业大学学报(自然科学版);1990年04期
程涛,生庆海,刘晓铭,逄锦利;[J];中国乳品工业;1999年05期
杨正梅,卜友泉,何瑞国;[J];生命科学研究;2004年S2期
卢太白;陈玲;张中满;;[J];陕西农业科学;2006年02期
魏远安,李统茂,蒋世琼,马丽,杨海;[J];食品与发酵工业;1997年05期
张志国,生庆海,卢彦君,朱俊平,陆淳;[J];食品科学;2002年08期
惠伯棣;李京;郑康成;裴凌鹏;廖萍泰;;[J];食品科学;2006年02期
【相似文献】
中国重要会议论文全文数据库
梁立娜;蔡亚岐;牟世芬;;[A];第11届全国离子色谱学术报告会论文集[C];2006年
潘媛媛;时国庆;;[A];第11届全国离子色谱学术报告会论文集[C];2006年
庹苏行;杨华武;戴云辉;吴名剑;;[A];中国化学会第28届学术年会第9分会场摘要集[C];2012年
中国硕士学位论文全文数据库
余娜;[D];西南大学;2011年
&快捷付款方式
&订购知网充值卡
400-819-9993当前位置： >>
高效阴离子色谱法测定当归果胶多糖中的糖醛酸含量
第8卷 第6期 2 0 0 8 年 12 月中 国 食 品 学 报Journal of Chinese Institute of Food Science and TechnologyVol． 8 No． 6 Dec． 2 0 0 8高效阴离子色谱法测定当归果胶多糖中的糖醛酸含量孙元琳 12汤坚2吴胜芳 2顾小红 2江苏无锡 214122 ）（1 运城学院生命科学系山西运城 044000江南大学食品科学与安全教育部重点实验室摘要建立高效阴离子色谱 - 脉冲安培检测（HPAEC-PAD ）当归果胶多糖中糖醛酸的定性、定量方法，并对测试样品的预处理方法进行研究。 分别对多糖样品进行不同预处理，采用外标法测定糖醛酸含量。 结果表明，多糖样 品 需 经 脱 脂 处 理 并 结 合 弱 酸 水 解 和 酶 解 才 能 获 得 准 确 、真 实 的 结 果 ；建 立 了 半 乳 糖 醛 酸 （GalA ）和 葡 萄 糖 醛 酸 （GlcA ）的线性回归方程，相关系数均为 0.9990 。 经计算，HPAEC-PAD 法测定当归多糖的 GalA 含量为 53.62% ， 与比色法（58.27% ）的相对误差为 8.67% ，并具有良好的重现性。 采用 HPAEC-PAD 法对糖醛酸定性、定量，无需 衍生化，且灵敏度高、重现性好，是快速测定糖醛酸含量的有效方法。 关键词 文章编号 当归 果胶多糖 糖醛酸 高效阴离子色谱 - 脉冲安培检测器 （2008 ）06-0128-05果胶多糖是存在于植物细胞壁中的一种组成 复杂的胶状聚合物，糖醛酸是其主要组成单位，其 含量对果胶的功能特性起着决定性的作用 [1]，因此 对糖醛酸的定性、定量分析尤为重要。 常用的糖醛 酸测定方法是比色法。 1947 年，Dische 提出用咔[2]方法更具优越性。 果胶多糖是当归多糖中的主要 组成部分 [7]，本文应用 HPAEC-PAD 技术对当归多 糖中的糖醛酸进行定性、定量分析，对样品的预处 理方法也进行了研究。唑-浓硫酸法对糖醛酸进行定量，但该方法的缺点 是中性糖随着咔唑试剂的加入会产生褐色物质 ， 使测定结果偏高。 此后，Blumenkrantz 以间羟联苯[3]11.1材料与方法材料 当归（Angelica Sinensis ）：购自无锡山禾药业取代了咔唑试剂， 可防止中性糖的干扰， 减少误 差。 间羟联苯比色法操作简便、快捷、干扰性小，是 一种既灵敏又经济的检测方法， 但它不能确定糖 醛酸的种类， 对于含多种糖醛酸的多糖样品仅能 测定糖醛酸总量。 目前 HPLC 、GC-MS 、FT-IR 及 毛 细 管 电 泳 技 术已成功应用于糖醛酸的定量分析 [4～6]。 高效阴离 子色谱是分析多糖和低聚糖的单糖组成的有效手 段。 它可使单糖和寡糖在高 pH 值（pH&12 ）的洗脱 液中被解离为阴离子，并在阴离子柱上交换分配， 从而得到高效、快速地分离。 由于同时采用了脉冲 安培检测器（PAD ），使其分辨率、选择性和灵敏度 大大提高，且样品不需要衍生化处理，因此比其它收稿日期：
基金项目： 山西省青年科研基金资助项目（ ） 作者简介： 孙元琳，女，1971 年出生，博士，副教授有限公司，经鉴定为二级岷归。 当归粉碎后，经热 水提取、 醇沉、 冷冻干燥得到当归粗多糖。 再经DEAE-Sepharose CL-6B 柱层析和 Sepharose CL6B 柱层析纯化，收集酸性多糖单一峰组分作为分析样品 [7]。 主要试剂：内切 -α-（1→4） - 聚半乳糖醛酸酶 （E.C.3.2.1.15 ，467U/g ），Fluka 公司。 主要仪器：离子色谱仪（Dionex 2010i 型），美 国戴安公司。1.2 试验方法 1.2.1 糖醛酸标准样品的分析 精确称取半乳糖 醛酸（GalA ）和葡萄糖醛酸（GlcA ）标准样品 20 mg于 100 mL 容量瓶中， 用去离子水定容， 配制成20、40、80、160 和 200 mg/L 等 不 同 质 量 浓 度 的 标准溶液，直接进样作离子色谱分析。 以糖醛酸浓度 为横坐标，峰面积为纵坐标绘制标准曲线，建立回第8卷 第6期高效阴离子色谱法测定当归果胶多糖中的糖醛酸含量129归方程。 离子色谱采用 CarboPac PA1 分析柱，以糖 醛 酸 水 解 酶 （E.C.3.2.1.15，467 U/g ）， 于 30 ℃ 反 应 72 h。 反应结束后，在沸水中加热 10 min 灭酶 活 ，离 心 （3 000 r/min ，15 min ），取 上 清 液 ，去 离 子 水定容，平行进样 3 次，结果取平均值。0.15 mol/L NaOH－NaOAc 为流动相，流速 0.7 mL/ min。 脉冲安培检测器（PAD），Au 电极，进样体积 50 μL。 色谱工作站为美国 Anastar 公司产品。 1.2.2 精密度的测定 分别取 40 μg/mL GalA 和 GlcA 标 准 溶 液 ，平 行 进 样 6 次 ，记 录 保 留 时 间 和峰面积，计算相对标准偏差（RSD ）。1.2.4.3脱酯、 弱酸水解结合酶解方法精确称取多糖样品 10 mg 于具塞试管中， 溶于 2 mL 0.21.2.3准确度的测定通过加标回收验证上述条件，测定糖醛酸含量的准确度。 将已测定的不同糖 醛酸质量浓度的样品溶液加入等体积的已知质量 浓度的标准溶液，混匀后上机测定。 计算样品的平 均回收率。mol/L NaOH 溶液中，于室温反应 2 h（充 N2），用乙 酸 中 和 ，旋 转 蒸 发 后 ，加 入 0.2 mol/L TFA 溶 液 2 mL，充 N2，于 121 ℃ 水 解 1.5 h，水 解 液 用 N2 除 尽过量的 TFA 后酶解，酶解方法同 1.2.4.2 节。 酶解 后离心，取上 清 液 ，用 去 离 子 水 定 容 ，平 行 进 样 3 次，结果取平均值。1.2.4 1.2.4.1当归多糖 ASP3 样品的预处理 酸水解 精确称取多糖样品 10 mg 于具22.1结果与讨论标准样品分析结果 鉴于糖醛酸含有羧基， 与阴离子柱的结合力塞试管中，溶 于 2 mL 2 mol/L TFA 溶 液 中 ，充 N2 后，于 121 ℃ 水解 1.5 h，水解液用 N2 除尽过量的TFA，用去离子水溶解、定容，直接进样。 根据出峰时间判断糖醛酸种类， 根据峰面积计算糖醛酸含 量，平行进样 3 次，结果取平均值。强 于 中 性 单 糖 ， 因 此 选 用 强 离 子 强 度 的 NaOH/NaOAc 体系为流动相， 使糖醛酸能够在较短的时 间内被快速洗脱， 从而得到有效分离。 图 1 为 GalA 和 GlcA 标准样品的离子色谱图。 可以看出 2 种糖醛酸标样得到了完全分离（R=4.2）。 分析速度 快，10 min 内即可完成分析。 图 2 为当归多糖样品酸水解后的离子色谱图。 经对照，确定样品中的 糖醛酸种类为 GalA 。1.2.4.2酸水解结合酶解方法精确称取多糖样品 10 mg 于具塞试管中，溶于 2 mL 2 mol/L TFA 溶 液 ，充 N2 后 ，于 121℃ 水 解 1.5 h ，水 解 液 用 N2 除 尽 过 量 的 TFA ， 溶 于 0.05 mol/L HAc－NaOAc （pH 5.4 ）缓冲液中，加入内切 -α-（1→4） - 聚半乳750500 GlcAmV500 GalAmV25025005保留时间 /min1005保留时间 /minGalA10图1标准糖醛酸的高效阴离子色谱图图2当归多糖酸水解后的高效阴离子色谱图Fig.2 HPAEC of polysaccharide from Angelica sinensis after siacid hydrolysisFig.1HPAEC of uronic acid standards2.2回归方程与相关系数 采用外标法，以不同浓度的标准样品进样，绘程，即：Y=2（r=0.9990）（1 ）制标准曲线， 建立了 GalA 和 GlcA 的线性回归方式中，Y―峰面积；X―GalA 质量浓度，mg/L 。 ―― ――130中 国 食 品 学 报Y=6（r=0.9990） （2 ）2008 年第 6 期品的 6 次平行试验中，峰面积的 RSD 分别为 1.8% 和 1.2% ， 保留时间的 RSD 分别为 2.1% 和 2.6% ， 均低于 4.5% ，表 明 测 定 结 果 的 重 复 性 良 好 ，上 述 测试条件是可行的。 加样回收试验结果见表 1。 可以看出，平均回 收率分别达到 97.3%和 98.9%，表明在上述测试条 件下，GalA 和 GlcA 的定量方法是可靠的。式 中 ，Y―峰 面 积 ；X―GlcA 质 量 浓 度 ， ―― ――mg/L 。相关系数均为 0.9990，满足定量分析的要求， 线性范围 20~200 mg/L 。 GalA 和 GlcA 的检出限分 别为 100 ng 和 50 ng 。2.3精密度与准确度 精密度测定结果表明， 在 GalA 和 GlcA 标准表1加标回收试验结果Table 1样品 标样加入量 /μg 标样测定量 /μg 回收率 /% 平均回收率 /%Results of standard addition recovery test GalA 2 22.10 21.6 97.7 97.3 3 16.05 15.7 97.8 1 41.65 41.2 98.9 GlcA 2 30.85 30.2 97.9 98.9 3 34.45 34.4 99.91 28.15 27.1 96.32.4 当归多糖样品的测定结果 2.4.1 酸水解样品 图 2 为当归多糖样品经酸水解后的离子色谱图。 将峰面积代入回归方程，经计 算，GalA 含量为 28.32%， 仅为比色法测定结果的 一半。 分析其原因，是由于多糖中的糖醛酸与相邻 糖 残 基 形 成 的 糖 苷 键 较 稳 定 （如 果 胶 多 糖 中 的2.4.2 酸 水 解 结 合 酶 解 样 品 采 用 特 异 性 的 内 切 -α -（1 →4） - 聚 半 乳 糖 醛 酸 水 解 酶 （E.C.3.2.1. 15，467 U/g）处理酸水解多糖，可以使 TFA 难水解 的 α-（1→4） -GalA 糖苷键 （如 GalA-GalA 、RhaGalA ）进一步裂解 [8]。 具体操作是：先采用 2 mol/L TFA 溶液水解多糖，然后结合生物酶法对 α-（1→ 4）-GalA 进行特异性酶解。 图 3 为当归多糖酸水解结合酶解后产物的离子色谱图。 由峰面积计算Rha-GalA ） ，在 酸 水 解 过 程 中 不 易 被 打 断 ，样 品[8]中的糖醛酸无法完全水解为游离单糖， 造成测定 结果偏低。 因此，多糖样品经 2 mol/L TFA 酸水解 后， 用 HPAEC-PAD 法的分析结果不能反映糖醛 酸的真实含量。GalA 含量为 39.37%，比单一的酸水解法测定结果有所提高，但与比色法测定结果相差很大。10001000mV8.43250050005保留时间 /min1005保留时间 /min8.427750mV75010图3当归多糖酸水解结合酶解后的高效阴离子色谱图图 4 当归多糖脱酯、弱酸水解结合酶解后的高效阴离子色谱图Fig.3HPAEC of polysaccharide from Angelica sinensis after acid hydrolysis and enzymic hydrolysisFig.4HPAEC of polysaccharide from Angelica sinensis afterdeesterification ， acid hydrolysis and enzymic degradation第8卷 第6期高效阴离子色谱法测定当归果胶多糖中的糖醛酸含量131100050090 80 70 60 50 40 30 20 10 0 -10 -20 -30 -40 脱酯前mV8.440 GalAT%脱酯后3000250020005.65 15002923100050005保留时间 /min10波数 /cm-1图5标准半乳糖醛酸的离子色谱图图6当归多糖脱酯前后的红外光谱Fig.6 FT-IR spectra of polysaccharide and de-esterifed polysaccharide from Angelica sinensis表2 不同预处理方法分析当归多糖中的半乳糖醛酸含量Fig.5HPAEC of uronic acids standard2.4.3 脱酯、 弱酸水解结合酶解样品 采用 FTIR 光 谱 分 析 当 归 多 糖 样 品 （ 见 图 6）。 样 品 在 1735 cm-1 处有特异吸收， 这缘于甲酯化的 GalA （-COOCH3）C=O 的伸缩振动。 经测定， 其酯化度（DE ）为 47.14%[7]。 而羧基的酯化会影响聚半乳糖 醛酸水解酶的酶解效率，使 GalA 残基无法得到完 全游离 [9]。 此外，糖醛酸在强酸条件下易发生脱羧 基反应，使游离的 GalA 发生降解，影响试验结果 的准确性。 基于以上原因， 先用 0.2 mol/L NaOH 对样品进行脱酯，使甲酯基转化为羧基，再用 0.2Table 2 Content of GalA in Angelica sinensis polysaccharide by different pretreatment methods HPAEC-PAD 法比色法 酸水解 酸水解 / 酶解 脱酯 /弱酸 水解 /酶解GalA/%58.2728.3239.3753.62mol/L TFA 弱酸水解，将支链上的糖残基水解掉，以利于进一步酶解。 经 FT-IR 红 外 光 谱 分 析 （见 图 6），脱 脂 后 的 多糖样品在 1735 cm 处的吸收峰消失。由于甲基-13结论采用 HPAEC-PAD 技术建立了 GalA 和 GlcA的线性回归方程，相关系数均为 0.9990 ，线性范围含量降低，使 2 923 cm 附近的吸收强度减弱，表-1明样品被脱酯。 脱酯样品经弱酸水解和酶解后游 离的 GalA 含量增加 53.62% ， 与间羟联苯比色法 （58.27% ）的 相 对 误 差 为 8.67% ，且 具 有 良 好 的 重 现性。 对 3 种不同样品的预处理方法的分析表明， 采用离子色谱测定多糖样品的糖醛酸含量， 不仅 要做酸水解，还要对其进行脱脂处理，并结合弱酸 水解和酶解才能获得准确、真实的结果（见表 2）。20~200 mg/L ，GalA 和 GlcA 的最 小 检 出 限 分 别 为 100 ng/50 ng。 采用离子色谱法测定糖醛酸含量的前提是糖醛酸水解完全。 多糖样品不仅要做酸水 解，还要对其进行脱脂处理，并结合弱酸水解和酶 解才能获得准确、真实的结果。 采用 HPAEC-PAD 对糖醛酸定性、定量分析，样品无需衍生化，方法 的灵敏度高、重现性好，是快速测定糖醛酸含量的 有效方法。参考文献1. 吴东儒 . 碳水化合物的生物化学 [M]. 北京：高等教育出版社，1988.132中 国 食 品 学 报2008 年第 6 期2. Dische Z. A new specific color reaction of hexuronic acids[J]. J. Biol. Chem. ， 1947 ， 167 （3 ）：189～193. 3. Blumenkrantz N. Asboe-Hansen G. New method for quantitative determination of uronic acid[J]. Anal. Biochem. ， 1973 ， 54 （2 ）： 484～489. 4. Manuel A. Coimbraa. Multivariate analysis of uronic acid and neutral sugars in whole pectic samples by FT-IR spectroscopy[J]. Carbohydrate Polymers ，1998 ，37 （3 ）：241～248. 5. Tanczos I. THM-GC/MS analysis of model uronic acids of pectin and hemicelluloses [J]. Anal. Appl. Pyrolysis ， 2003 ， 68 （8 ）：151～162. 6. Daas P. J. H. ， Meyer-Hansen K. ， Schols H. A. ， et al. Investigation of the non-esterified galacturonic acid distribution in pectin with endopolygalacturonase[J]. Carbohydrate Research ，1999 ，318 （1-4 ）：135～145. 7. Sun Yun lin ， Tang Jian ， Gu Xiao long ， et al. Water-soluble polysaccharides from Angelica sinensis（Oliv. ） Diels ：preparation ， characterization and bioactivity[J]. International Journal of Biological Macromolecules ，2005 ，36 （5 ）：283～289. 8. Taylor K. A. ， Buchanan-Smith J. G. A colorimetric method for the quantitation of uronic acids and a specific assay for galacturonic acid[J]. Anal. Biochem ， 1992 ， 201 （1 ）： 190～196. 9. T.P. Kravtchenko ， M. Penci ， A.G.J. Voragen. Enzymic and chemical degradation of some industrial pectins [J]. Carbohydrate Polymers ， 1993 ，20 （3 ）：195～205. 10. 张惟杰 . 糖复合物生化研究技术 [M]. 杭州： 浙江大学出版社，1998.Contents of Uronic Acids in Pectic Polysaccharide from Angelica Sinensis （Oliv. ） Diels by High Performance Anion Exchange ChromatographySun Yuanlin1 Tang Jian2 Wu Shengfang2 Gu Xiaohong2（1Department of Life Science ， Yuncheng University ， Yuncheng 044000 ， Shanxi2State Key Laboratory of Food Science and Technology ， School of Food Science and Technology ， Jiangnan University ， Wuxi 214122 ， Jiangsu ） Abstract To develope a HPAEC-PAD method for qualitative and quantitative of uronic acids in pectic polysaccha-ride from Angelica sinensis ， and pretreatment methods of samples were studied. With different pretreatment of the sample ， various contents of uronic acid were obtained with external standard method. The results showed that to get accurate results ， the tested sample should be treated by deesterification ， partial acid hydrolysis and enzymic degradation ， respectively. The linear regression equation of GalA and GlcA were established ， and the interrelated coefficient was 0.9990. The GalA content of pectic polysaccharides from Angelica sinensis determined by HPAEC-PAD was 53.62% ， with relative error of 8.67% compared with m-hydroxylbiphenyl method （58.27% ）， and with good reproducibility. HPAEC-PAD showed a good feasibility which needn't derivation and has high sensitivity and well repeatability for uronic acids determination. Key words Angelica sinensis Pectic polysaccharides Uronic acid HPAEC-PAD
赞助商链接
高的提取率,尤其是提取含有糖醛酸的多糖及酸性多糖...在进行当归多糖的提取时只向多糖液中加入了 0. 1%...高效液相、 凝胶层 析法、电泳法、色谱法、旋光度...葡萄糖醛酸含量,根据葡萄糖醛酸与软骨素二 糖之间...硫酸基的测定方法主要有离子色谱法和间接原子吸收法...Volpi利用黏多糖中的“快移动”片段和“慢移动”...高的提取率,尤其是提取含有糖醛酸的多糖及酸性多糖...此外,使用酶还可分解提取液中淀粉、果胶、蛋白质等...分离方法:一是凝胶柱色谱法,二是离子交换色谱法. ...程俊文 叫正交试验优化纤维素酶、果胶酶和木瓜蛋白...测定总还原糖心 ],纸色谱 -10]、薄层色谱法 卜...(OD),结果三批方格星虫多糖中糖醛酸含量分别为 ...高的提取率,尤其是提取含有糖醛酸的多糖及酸性多糖...此外, 使用酶还可分解提取液中淀粉、果胶、蛋白质...高效液相、 凝胶层析法、电泳法、色谱法、旋光度法...标准曲线的制作 1 方法原理 方法基于果胶物质水解,生成半乳糖醛酸在强酸中与...法测定苹果渣提取液果胶... 6页 免费 高效阴离子色谱法测定当... 5页 1下载...包括多糖的生物活性,提取分离,含量测定方法及多糖制剂...法、 透析法、 金属盐沉淀法、 凝胶色谱法、离子...当归总糖、还原糖和多糖的含量测 定方法探讨[J]....中的总果胶物质, 然后用分光光 度法测定总果胶...醛酸含量成正比,测定的结果可用脱水半乳 糖醛酸(...果胶:是一种酸性多糖,是由?-1,4 连接的多聚半...方法的比较研究 作者:张素斌 吕嘉欣 来源:《天津农业科学》2013 年第 10 期 摘要: 对热水浸提法、超声波法、纤维素酶与果胶酶法这 4 种提取当归多糖的方法...果聚糖和果胶质等,由于其葡萄糖残基组成方式与构成...葡萄糖醛酸等酸性基团的多糖中, 再用乙醇将多糖...2.2 离子交换色谱法离子交换色谱法是利用离子交换...
All rights reserved Powered by
www.tceic.com
copyright &copyright 。文档资料库内容来自网络，如有侵犯请联系客服。& 登录/注册
您可以从小木虫客户端获取VIP通行码，无需登录继续浏览
STEP1扫描左侧二维码，下载新版客户端
（已安装客户端用户请无视）
STEP2登录页面下方获取VIP通行码
VIP通行码:
小木虫,学术科研互动社区,为中国学术科研免费提供动力
违规贴举报删除请发送邮件至：
广告投放与宣传请联系 李想 QQ：
QQ：&&邮箱：
Copyright &
MuChong.com, All Rights Reserved. 小木虫 版权所有豆丁微信公众号
君，已阅读到文档的结尾了呢~~
扫扫二维码，随身浏览文档
手机或平板扫扫即可继续访问
离子色谱仪检测离子条件的选择
举报该文档为侵权文档。
举报该文档含有违规或不良信息。
反馈该文档无法正常浏览。
举报该文档为重复文档。
推荐理由：
将文档分享至：
分享完整地址
文档地址：
粘贴到BBS或博客
flash地址：
支持嵌入FLASH地址的网站使用
html代码：
&embed src='http://www.docin.com/DocinViewer--144.swf' width='100%' height='600' type=application/x-shockwave-flash ALLOWFULLSCREEN='true' ALLOWSCRIPTACCESS='always'&&/embed&
450px*300px480px*400px650px*490px
支持嵌入HTML代码的网站使用
您的内容已经提交成功
您所提交的内容需要审核后才能发布，请您等待！
3秒自动关闭窗口