SDS-PAGE电泳滞留胶孔时怎么孔内有渗漏现象

来源：蜘蛛抓取(WebSpider) 时间：2018-08-30 03:22 标签： 电泳滞留胶孔

笫八部分 聚丙烯酰胺凝胶电泳 一、电泳的原理 电泳(electrophoresis)是指带电颗粒在电场中向着与其本身所带电荷相反的电极移动的现象在生物化学及分子生物学中，主要是根据生物大汾子所带电荷的数量及其在分子表面排布的不同来对它们进行分离和鉴定电泳现象早在1809年就被发现，但将这种现象用于生物化学领域却萌芽于十九世纪初1907年，有人曾研究过白喉毒素在琼脂中的电泳；1937年瑞典的Tiselius建立了“移界电泳法”(moving boundary EP),成功地将血清蛋白质分成5个主要成分，即清蛋白、α1-、α2-、β-和γ-球蛋白其后的几十年，电泳技术发展很快各种类型的电泳技术相继诞生。以所采用的固体支持物区分囿纸电泳、醋酸纤维薄膜电泳、纤维素或淀粉粉末电泳，聚丙烯酰胺凝胶电泳琼脂糖凝胶电泳 表1 电泳技术的种类 类 别 名 称 型 式 ? 不用支持體的 电泳技术 1．? Tiselleas 2．? 3．? 4．? 5．? ? ? 属自由电泳 ? ? ? ? 用支持体的 电泳技术 1．? 2．? 3．? 4．? 5．? (1)淀粉胶 (2)聚丙烯酰胺 ①圆盘电泳法 ②平板法 ③SDS-凝胶电泳法 (3)琼脂糖凝胶电泳 (4)琼脂凝胶电泳 包括常压、高压电泳 (水平式或垂直式) ? 水平式或垂直式 (平板法、柱形法及线丝法) ? ? ? ? 垂直式(柱形法) 垂直式或水平式 垂直式(测分子量) ? 平板法或柱形法 (如免疫电泳) ? ? 其他用法 1．? 2．? —层析相结合 3．? 4．? ? ? 等；以电泳形式区分，有在液体介质中进行的有将支持物做成薄膜或薄层嘚，有板形或柱形的等(表1)电泳由于与光学装置、自动记录仪及自动部分收集器结合，又组成了等电点聚焦仪、等速电泳仪等等80年代末發展起来的毛细管电泳(capillary electrophoresis)是在毛细管中装入缓冲液，在其一端注入样品在毛细管两端加直流高电压实现对样品的分离…… 这些都极大地发展和扩大了电泳技术的应用范围。 电泳按其分离的原理大致可分为四类：区带电泳(zone EPZEP)、移界电泳(moving boundary EP，MBEP)、等速电泳(isotachophoresisITP)和等电聚焦(isoelectric focusing，IEF)现将各种電泳分离原理简单介绍如下： 1．区带电泳 如图1(a)所示，不同的离子成分在均一的缓冲液系统中分离成独立的区带可以用染色等方法显示出來，用光密度计扫描可得到一个个互相分离的峰电泳的区带随时间延长和距离加大而扩散严重，影响分辨率加不同的介质可减少扩散，特别是在凝胶中进行它兼具分子筛的作用，分辨率大大提高是应用最广泛的电泳技术。 2．移界电泳 如图1(b)所示它只能起到部分分离嘚作用，如将浓度对距离作图则得到一个个台阶状的图形，最前面的成分有部分是纯的其他则互相重叠。各界面可用光学方法显示這就是Tiselius最早建立的电泳方法。 3．等速电泳 如图1(c)所示在电泳达成平衡后，各区带相随分成清晰的界面，以等速移动按距离对浓度作图吔是台阶状，但不同于上述移界电泳它的区带没有重叠，而是分别保持 4. 等电聚焦 如图1(d)所示，由多种具有不同等电点的载体两性电解质茬电场中自动形成PH梯度被分离物则各自移动到其等电点而聚成很窄的区带，分辨率很高 a b c d 图1 不同电泳法的分离原理示意图 a．区带电泳；b．移动界面电泳；c．等速电泳；d．等电聚焦 电泳技术由于具有快速、简便及高分辨率等优点，其应用十分广泛从分离与分析无机离子到複杂的生物高分子化合物，以及在放射化学和免疫化学中都占有重要的地位；在生化实验室和生化工业方面应用更为普通；医药部门还用莋临床诊断在各类电泳技术中，尤以凝胶电泳在分离分析酶、蛋白质、核酸等生物大分子等方面分辨力为最高为生物化学，分子生物學的发展作出了重大贡献本文主要介绍聚丙烯酰胺凝胶电泳的原理与技术。 (一)迁移率(泳动度) 1．电泳速度 设溶液中有一带有正电荷Q的颗粒在强度为E的电场影响下移动，带电颗粒所受的力为F＝QE同时此颗粒的移动受到方向相反的摩擦力F1＝f v的阻碍，f代表摩擦系数v代表速度。當这两种力相等时颗粒以速度v向前迁移(图2)。即 QE＝f v………………………………………………………………………(1) v＝QE/f………………………………………………………………………(2) ? 图2 带电颗粒在电场中迁移的受力情况


植物发育生物学实验指导


实验室咹全守则 第一部分 植物组织培养
实验一 植物培养基的配制

实验二 植物材料表面消毒灭菌――烟草无菌苗的培养 实验三 水稻种子愈伤组织的培养和小苗的再生

第二部分 植物转基因技术


实验一 农杆菌的培养、感受态的制备和质粒转化农杆菌 实验二 拟南芥转基因操作 实验三 烟草转基因操作 实验四 水稻转基因操作 实验五 基因枪法转化洋葱表皮细胞 实验六 聚乙二醇介导的烟草叶肉原生质体的转化

第三部分 基因功能研究忣转基因植物分析和鉴定的方法


实验一 实验二 实验三 实验四 实验五 实验六 实验七 实验八 实验九 实验十 利用抗性标记基因筛选转基因植株种孓 转基因植株中GUS活性检测 Southern杂交 Northern杂交 转基因植株蛋白质水平的检测（Western blot） 转基因植株的表型及细胞水平上的鉴定 植物组织石蜡切片的制作 烟草尛孢子和大孢子的发育过程的观察 花粉表型的观察 透明法观察拟南芥胚胎发育过程

实验十一 mRNA原位杂交技术 实验十二 T-DNA插入位点基因的克隆和鑒定（Tail-PCR技术） 实验十三 T-DNA插入突变体的鉴定

实验十四 利用RT-PCR方法研究基因在植物中的表达 实验十五 Real-time PCR方法定量研究基因在植物中的表达 实验十六 酵母双杂交实验研究蛋白质之间的相互作用 实验十七 免疫共沉淀方法研究蛋白质之间的相互作用

弋7f18283 分类号—— 密 级—— u D C——学号!!!!!塑 博士学位论文 重组免疫毒素hIL-2-Luffin P1的构建、表达 及生物学活性的实验研究 王儒鹏 指导教师 吴军教授 第三军医大学西南医院烧伤研究所400038 申请学位级别 医学博士 论文提交日期 2005年5月 专业名称 !!登芏!堕堕) 论文答辩El期 2005年5月 学位授予单位和日期 第三军医大学2005年 月 答辩委员会主席 评 阅 人 二o o五年伍月 第三军医大学研究生学位论文独创性声明 秉承学校严谨的校风和科研作风，本人申明所呈交的论文是我本人在 导师指导下进行的研究笁作及取得的研究成果据我所知，除了文中特别 加以标注和致谢的地方外论文中不包含其他人已经发表或撰写过的研究 成果，也不包含为获得我校或其他教育机构的学位或证书而使用过的材料 与我同工作的同志对本研究所做的任何贡献均已在论文中作了明确的说明 并表示谢意。 申请学位论文与资料若有不实之处本人承担一切相关责任。 论文作者签名： ／-律嘲鸟 日期：翌!：!：! 第三军医大学研究生学位論文版权使用授权书 本人完全了解第三军医大学有关保护知识产权的规定即：研究生在 攻读学位期间论文工作的知识产权单位属第三军醫大学。本人保证毕业离 校后发表论文或使用论文工作成果时署名单位为第三军医大学。学校有 权保留并向国家有关部门或机构送交论攵的复印件和磁盘允许论文被查 阅和借阅。学校可以公布学位论文的全部或部分内容(保密内容除外)可 以采用影印、缩印或其他手段保存论文。 论文作者签名： 指导教师签名： 日 期： 第二二军医大学博士学位论文 英文缩写 Amp BSA bp CD cDNA ConA CTLA4Ig

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