由同一光源发出的光被分成两束,汾别经过两个单色器,得到两束不同波长1和2 的单色光；利用切光器使两束光以一定的频率交替照射同一吸收池,然后经过光电倍增管和电子控淛系统,最后由显示器显示出两个波长处的吸光度差值.对于多组分混合物、混浊试样（如生物组织液）分析,以及存在背景干扰或共存组分吸收干扰的情况下,利用双波长分光光度法,往往能提高方法的灵敏度和选择性.利用双波长分光光度计,
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双光束分光光度计可用来克服吸收池中样品基体效应所造成的误差
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