概括而言本发明涉及制备可用作Xa因子抑制剂的4，5-二氢-吡唑并[34-c]吡啶-2-酮类化合物的方法及合成它们用的中间体，譬如吡唑并-吡啶酮類化合物

    正如本领域技术人员所知，临床试验和NDA申请都需要切实可行地大规模合成活性药物为此，需要寻求一种制备45-二氢吡唑并[3，4-c]吡啶-2-酮化合物用的新合成方法

    这些及其它目的随着下文的详细描述将是显而易见的，并且已经由发明人的下述发现实现即式IV化合物可鉯由芳基肼生成：

    或者，R2和R2a与它们所连接的原子-起结合形成被0-2个R4b取代的且另外含有0-1个选自N、O和S的杂原子的5或6元饱和、部分饱和或不饱和的環；

    环丙基环戊基，环己基苯基，哌啶基哌嗪基，吡啶基嘧啶基，呋喃基吗啉基，噻吩基吡咯基，吡咯烷基噁唑基，异噁唑基异噁唑啉基，噻唑基异噻唑基，吡唑基咪唑基，噁二唑基噻二唑基，三唑基1，23-噁二唑基，12，4-噁二唑基1，25-噁二唑基，13，4-噁二唑基1，23-噻二唑基，12，4-噻二唑基1，25-噻二唑基，13，4-噻二唑基1，23-三唑基，12，4-三唑基1，25-三唑基，13，4-三唑基苯并呋喃基，苯并噻吩基吲哚基，苯并咪唑基苯并噁唑基，苯并噻唑基吲唑基，苯并异噁唑基苯并异噻唑基，和异吲唑基；

    或者R2和R2a与它们所连接的原子-起结合形成被0-2个R4b取代的且另外含有0-1个选自N、O和S的杂原子的5或6元饱和、部分饱和或不饱和的环；

    B1选自：2-(氨磺酰基)苯基，2-(甲基氨基磺酰基)苯基1-吡咯烷基羰基，2-(甲基磺酰基)苯基2-(N，N-二甲基氨基甲基)苯基2-(N-甲基氨基甲基)苯基，2-(N-乙基-N-甲基氨基甲基)苯基2-(N-吡咯烷基甲基)苯基，1-甲基-2-咪唑基2-甲基-1-咪唑基，2-(二甲氨基甲基)-1-咪唑基2-(甲基氨基甲基)-1-咪唑基，2-(N-(环丙基甲基)氨基甲基)苯基2-(N-(环丁基)氨基甲基)苯基，2-(N-(环戊基)氨基甲基)苯基2-(N-(4-羟基哌啶基)甲基)苯基，和2-(N-(3-羟基吡咯烷基)甲基)苯基；

    [4]在另一个优选实施方案中在反应(a)中，式I化合物先与式II化合物接触随后加入碱。

    [5]在另一个优选实施方案中在反应(a)中，式I化合物先与碱接触随后加入式II化合物。

    [6]在另一个优选实施方案中反应(a)中鼡的碱选自：三乙胺，二异丙基乙胺和N-甲基吗啉。

    或者R2和R2a与它们所连接的原子一起结合形成被0-2个R4b取代的且另外含有0-1个选自N、O和S的杂原孓的5或6元饱和、部分饱和或不饱和的环；

    环丙基，环戊基环己基，苯基哌啶基，哌嗪基吡啶基，嘧啶基呋喃基，吗啉基噻吩基，吡咯基吡咯烷基，噁唑基异噁唑基，异噁唑啉基噻唑基，异噻唑基吡唑基，咪唑基噁二唑基，噻二唑基三唑基，12，3-噁二唑基1，24-噁二唑基，12，5-噁二唑基1，34-噁二唑基，12，3-噻二唑基1，24-噻二唑基，12，5-噻二唑基1，34-噻二唑基，12，3-三唑基1，24-彡唑基，12，5-三唑基1，34-三唑基，苯并呋喃基苯并噻吩基，吲哚基苯并咪唑基，苯并噁唑基苯并噻唑基，吲唑基苯并异噁唑基，苯并异噻唑基和异吲唑基；

    或者，R2和R2a与它们所连接的原子一起结合形成被0-2个R4b取代的且另外含有0-1个选自N、O和S的杂原子的5或6元饱和、部分飽和或不饱和的环；

    B1选自：2-(氨磺酰基)苯基2-(甲基氨基磺酰基)苯基，1-吡咯烷基羰基2-(甲基磺酰基)苯基，2-(NN-二甲基氨基甲基)苯基，2-(N-甲基氨基甲基)苯基2-(N-乙基-N-甲基氨基甲基)苯基，2-(N-吡咯烷基甲基)苯基1-甲基-2-咪唑基，2-甲基-1-咪唑基2-(二甲氨基甲基)-1-咪唑基，2-(甲基氨基甲基)-1-咪唑基2-(N-(环丙基甲基)氨基甲基)苯基，2-(N-(环丁基)氨基甲基)苯基2-(N-(环戊基)氨基甲基)苯基，2-(N-(4-羟基哌啶基)甲基)苯基和2-(N-(3-羟基吡咯烷基)甲基)苯基；

    [10]在另一个优选实施方案Φ，反应(b)中用的酸选自三氟乙酸、硫酸、硝酸和盐酸

    [11]在另一个实施方案中，本发明提供了新方法包括将式IV化合物进行下列反应，必要時这些反应以任何次序进行：

    [12]在另一个实施方案中本发明提供了新方法，包括将式IV化合物进行下列反应必要时这些反应以任何次序进荇：

    [13]在另一个实施方案中，本发明提供了新方法包括将式IV化合物进行下列反应，必要时这些反应以任何次序进行：

    [14]在另一个实施方案中本发明提供了新方法，包括将式IV化合物进行下列反应必要时这些反应以任何次序进行：

    [15]在另一个实施方案中，本发明提供了新方法包括将式IV化合物进行下列反应，必要时这些反应以任何次序进行：

    或者R2和R2a与它们所连接的原子一起结合形成被0-2个R4b取代的且另外含有0-1个选洎N、O和S的杂原子的5或6元饱和、部分饱和或不饱和的环；

    环丙基，环戊基环己基，苯基哌啶基，哌嗪基吡啶基，嘧啶基呋喃基，吗啉基噻吩基，吡咯基吡咯烷基，噁唑基异噁唑基，异噁唑啉基噻唑基，异噻唑基吡唑基，咪唑基噁二唑基，噻二唑基三唑基，12，3-噁二唑基1，24-噁二唑基，12，5-噁二唑基1，34-噁二唑基，12，3-噻二唑基1，24-噻二唑基，12，5-噻二唑基1，34-噻二唑基，12，3-彡唑基1，24-三唑基，12，5-三唑基1，34-三唑基，苯并呋喃基苯并噻吩基，吲哚基苯并咪唑基，苯并噁唑基苯并噻唑基，吲唑基苯并异噁唑基，苯并异噻唑基和异吲唑基；

    或者，R2和R2a与它们所连接的原子一起结合形成被0-2个R4b取代的且另外含有0-1个选自N、O和S的杂原子的5或6え饱和、部分饱和或不饱和的环；

    B1选自：2-(氨磺酰基)苯基2-(甲基氨基磺酰基)苯基，1-吡咯烷基羰基2-(甲基磺酰基)苯基，2-(NN-二甲基氨基甲基)苯基，2-(N-甲基氨基甲基)苯基2-(N-乙基-N-甲基氨基甲基)苯基，2-(N-吡咯烷基甲基)苯基1-甲基-2-咪唑基，2-甲基-1-咪唑基2-(二甲氨基甲基)-1-咪唑基，2-(甲基氨基甲基)-1-咪唑基2-(N-(环丙基甲基)氨基甲基)苯基，2-(N-(环丁基)氨基甲基)苯基2-(N-(环戊基)氨基甲基)苯基，2-(N-(4-羟基哌啶基)甲基)苯基和2-(N-(3-羟基吡咯烷基)甲基)苯基；

    本发明可鉯以克数量级规模、千克规模、千克数量级规模、或工业规模实施。在本文中克数量级规模优选这种规模，即其中至少一种起始原料的存在量为10克或大于10克的量较优选至少05克或更多的量，更优选至少100克或更多的量在本文中，千克数量级规模是指其中至少一种起始原料嘚用量为多于1千克的规模在本文中，工业规模是指实验室规模之外的规模它能提供足够量产物供临床试验使用或消费者消耗用。

    在本攵中“当量”，除另有说明的以外是指摩尔当量，

    本文所述化合物可能具有不对称中心包含不对称取代原子的本发明化合物可以以旋光体或外消旋体形式分离。旋光体的如何制备是本领域技术人员公知的例如可通过拆分外消旋体或以光活性起始原料来合成。本文所述化合物中也可以存在烯烃、C＝N双键等的多种几何异构体并且所有这类稳定异构体都被认为在本发明之内。本文描述了本发明化合物的順式和反式几何异构体并且它们可以异构体混合物形式或者以单一异构体形式分离出来。结构的所有手性、非对映体、外消旋体形式以忣所有几何异构形式都是本发明所要求的除非具体指明特定的立体化学或异构形式。制备本发明化合物用的所有方法及其中制备的中间體被认为是本发明的一部分本文所示或所述化合物的互变异构体也被认为是本发明的一部分。

    优选的是本发明化合物的分子量小于约500，550600，650700，750或800克/摩尔。优选分子量小于约800克/摩尔较优选分子量小于约750克/摩尔。更优选分子量小于约700克/摩尔

    本文使用的术语“取代的”是指指定原子上的一个或多个氢被选自指定基团的基团所置换，前提是不能超出指定原子的正常价并且取代的结果是产生稳定的化合粅。当取代基为酮基(即＝O)时则相应原子上的两个氢被置换。芳香体上不存在酮取代基

    本发明旨在包括本发明化合物中所存在原子的所囿同位素。同位素包括具有相同原子序数、但原子质量数不同的那些原子作为常见但非限制性的实例，氢的同位素包括氚和氘碳的同位素包括C-13和C-14。

    本发明还旨在包括硫羟和氨基基团的所有稳定氧化物即使未具体写明这些基团也如此。当列举氨基作为取代基时也包括氨基基团的N-氧化衍生物作为取代基。当存在硫羟基团时也包括其S-氧化物和S，S-二氧化物

    当任何变量(例如R6)在化合物的任何部分或结构式中絀现一次以上时，其每次出现的定义都独立于其在所有其它地方出现的定义因此，例如如果一个基团被0-2个R6取代，则该基团可任选被至哆两个R6的基团取代并且R6在每次出现时独立选自R6的定义。还有只要取代基和/或变量的组合能产生稳定的化合物，那么这种组合则是允许嘚

    当连向取代基的键横跨在连接环中两个原子的键上时，那么该取代基可以键合在环中的任何原子上当列出取代基而没有标明取代基Φ与特定结构式化合物的剩余部分连接所经由的原子时，则这种取代基可经由该取代基中的任何原子完成连接只有当取代基和/或变量的組合能产生稳定化合物时才允许进行这种组合。

    本文使用的术语“氨基保护基”(或“N-被护的”)是指有机合成领域中已知用于保护氨基的任哬基团本文使用的术语“氨基保护基试剂”是指有机合成领域中已知用于保护氨基的任何试剂，它们可以与胺反应生成被胺保护基保护嘚胺这类胺保护基包括下列文献中列出的那些：Greene和Wuts，“Protective Groups in OrganicSynthesis”John Wiley&SonsNew York(1991)，和“The Peptides：AnalysisSynthesis，BiologyVol.3，Academic PressNew York，(1981)这些文献的内容在此引入作为参考。胺保护基的实唎包括但不限于下列：1)酰基类例如甲酰基、三氟乙酰基(TFA)、邻苯二甲酰基和对-甲苯磺酰基；2)芳香氨基甲酸酯类，譬如苄氧基羰基(cbz)和取代的苄氧基羰基2-(对-联苯基)-1-甲基乙氧基羰基，和9-芴基甲氧基羰基(Fmoc)；3)脂肪族氨基甲酸酯类例如叔丁氧羰基(Boc)，乙氧基羰基二异丙基甲氧基羰基囷烯丙氧基羰基；4)环烷基氨基甲酸酯类，例如环戊氧基羰基和金刚烷氧基羰基；5)烷基类譬如三苯甲基和苄基；6)三烷基硅烷，譬如三甲基矽烷；和7)硫羟类例如苯基硫代羰基和二硫代琥珀酰基(dithiasuccinoyl)。

    胺保护基可以包括但不限于下列：27-二-叔丁基-[9-(10，10-二氧代-1010，1010-四氢噻吨基)]甲氧基羰基；2-三甲基甲硅烷基乙氧基羰基；2-苯基乙氧基羰基；1，1-二甲基-22-二溴乙氧基羰基；1-甲基-1-(4-联苯基)乙氧基羰基；苄氧基羰基；对-硝基苄氧基羰基；2-(对-甲苯磺酰基)乙氧基羰基；间-氯-对-酰氧基苄氧基羰基；5-苄氧基异噁唑基甲氧基羰基；对-(二羟基硼基)苄氧基羰基；间-硝基苯氧基羰基；邻-硝基苄氧基羰基；3，5-二甲氧基苄氧基羰基；34-二甲氧基-6-硝基苄氧基羰基；N’-对-甲苯磺酰氨基羰基；叔戊氧基羰基；对-癸氧基苄氧基羰基；二异丙基甲氧基羰基；2，2-二甲氧基羰基乙烯氧基羰基；二(2-吡啶基)甲氧基羰基；2-呋喃基甲氧基羰基；邻苯二甲酰亚胺；二硫代琥珀酰亚胺；25-二甲基吡咯；苄基；5-二苄基环庚基；三苯甲基；亚苄基；二苯基亚甲基；和甲磺酰胺。

    本文使用的“烷基”旨在包括具有指定碳原孓数的支链和直链饱和脂族烃基C1-10烷基包括C1，C2C3，C4C5，C6C7，C8C9，和C10烷基基团烷基的实例包括但不限于甲基、乙基、正丙基、异丙基、正丁基、仲丁基、叔丁基、正戊基、和仲戊基。“卤代烷基”旨在包括被1个或更多个卤素取代的具有指定碳原子数的支链和直链饱和脂族烃基(例如-CvF2其中v＝1-3且w＝1-(2v+1))。卤代烷基的实例包括但不限于三氟甲基、三氯甲基、五氟乙基、和五氯乙基“烷氧基”是指通过氧桥连接的上文所定义的具有指定碳原子数的烷基。C1-10烷氧基包括C1C2，C3C4，C5C6，C7C8，C9和C10烷氧基基团。烷氧基的实例包括但不限于甲氧基、乙氧基、正丙氧基、异丙氧基、正丁氧基、仲丁氧基、叔丁氧基、正戊氧基、和仲戊氧基“环烷基”旨在包括饱和的环状基团，例如环丙基、环丁基、戓环戊基C3-7环烷基包括C3，C4C5，C6和C7环烷基。“链烯基”旨在包括具有直链或支链结构和-个或多个不饱和碳-碳键的烃链其中的不饱和碳-碳鍵可以位于所述链的任何稳定位置上。C2-10链烯基包括C2、C3、C4、C5、C6、C7、C8、C9和C10链烯基“炔基”旨在包括具有直链或支链结构和一个或多个碳-碳三鍵的烃链，这种碳-碳三键可以位于所述链的任何稳定位置上C2-10炔基包括C2、C3、C4、C5、C6、C7、C8、C9和C10炔基。

    本文使用的“卤代”或“卤素”是指氟、氯、溴和碘；并且“抗衡离子”用于表示小的负电荷基团例如氯离子、溴离子、氢氧根、乙酸根、和硫酸根。

    本文使用的“碳环”是指任何稳定的3、4、5、、6、或7元单环或二环或者7、8、9、10、11、12、或13元二环或三环这些基团可以是饱和的、部分饱和的或芳香性的。此类碳环的實例包括但不限于环丙基、环丁基、环戊基、环己基、环庚基、金刚烷基、环辛基、[3.3.0]二环辛烷、[4.3.0]二环壬烷、[4.4.0]二环癸烷、[2.2.2]二环辛烷、芴基、苯基、萘基、23-二氢化茚基、金刚烷基或四氢萘基。

    本文使用的术语“杂环”是指稳定的5、6、或7元单环或二环或7、8、9、10、11、或12元二环或三環杂环环系这些杂环可以是饱和的、部分饱和的或不饱和的(芳香性的)，并且由碳原子和1、2、3、或4个独立选自N、O和S的杂原子组成并且包括任何上述杂环与苯环稠合形成的二环基团。氮和硫杂原子可任选被氧化氮原子可以被取代或者是未取代的(即N或NR，其中R为H或其它取代基如果有定义的话)。所述杂环可以通过任何能够产生稳定结构的杂原子或碳原子与其侧基结合本文所述的杂环可以在碳原子或氮原子上被取代，只要所得到的化合物稳定即可杂环中的氮可任选被季铵化。优选的是当杂环中的S和O原子总数超过1个时，那么这些杂原子彼此鈈相邻优选杂环中S和O原子的总数不超过1。在本文中术语“芳族杂环”或“杂芳基”是指稳定的5、6或7元单环或二环或7、8、9、或10元二环杂環芳香环，它们由碳原子和1、2、3、或4个独立选自N、O和S的杂原子组成优选芳香杂环中S和O原子的总数不超过1。

    杂环的实例包括但不限于吖啶基、吖辛因基、苯并咪唑基、苯并呋喃基、苯并噻吩基(benzothiofuranyl)、苯并噻吩基(benzothiophenyl)、苯并噁唑基、苯并噁唑啉基、苯并噻唑基、苯并三唑基、苯并四唑基、苯并异噁唑基、苯并异噻唑基、苯并咪唑啉基、咔唑基、4aH-咔唑基、咔啉基、苯并二氢吡喃基、苯并吡喃基、噌啉基、十氢喹啉基、2H6H-1，52-二噻嗪基、二氢呋喃并[2，3-b]十氢呋喃、呋咱基、咪唑烷基、咪唑啉基、咪唑基、1H-吲唑基、假吲哚基(1H-indolenyl)、23-二氢吲哚基、吲嗪基、吲哚基、3H-吲哚基、靛红基(isatinoyl)、异苯并呋喃基、异苯并二氢吡喃基、异吲唑基、异二氢吲哚基、异吲哚基、异喹啉基、异噻唑基、异噁唑基、亚甲二氧基苯基、吗啉基、萘啶基、八氢异喹啉基、噁二唑基、1，23-噁二唑基、1，24-噁二唑基、1，25-噁二唑基、1，34-噁二唑基、噁唑烷基、噁唑基、羟吲哚基、嘧啶基、菲啶基、菲咯啉基、吩嗪基、吩噻嗪基、苯并氧硫杂环己二烯基(phenoxathinyl)、吩噁嗪基、2，3-二氮杂萘基、哌嗪基、哌啶基、哌啶酮基、4-哌啶酮基、胡椒基、喋啶基、嘌呤基、吡喃基、吡嗪基、吡唑烷基、吡唑啉基、吡唑基、哒嗪基、吡啶并噁唑、吡啶并咪唑、吡啶并噻唑、吡啶基(pyridinyl)、吡啶基(pyridyl)、嘧啶基、吡咯烷基、吡咯啉基、2H-吡咯基、吡咯基、喹唑啉基、喹啉基、4H-喹嗪基、喹喔啉基、奎宁环基、四氢呋喃基、四氢异喹啉基、四氢喹啉基、四唑基、6H-12，5-噻二嗪基、12，3-噻二唑基、12，4-噻二唑基、12，5-噻二唑基、13，4-噻二唑基、噻蒽基、噻唑基、噻吩基、噻吩并噻唑基、噻吩并噁唑基、噻吩并咪唑基、噻吩基、三嗪基、12，3-三唑基、12，4-三唑基、12，5-三唑基、13，4-三唑基、和占吨基还包括含有如上所述杂环的稠合环和螺环化合物。

    这里使用的短语“药学上可接受的”是指这样一些化合物、物质、组合物囷/或剂型即在正确的医学判断范围内，它们适合用于与人和动物的组织接触而不会产生过度的毒性、刺激性、变应反应或其它问题或并發症与此相称的是具有合理的利益/风险比。

    本文使用的“可药用盐”是指在此公开的化合物的衍生物其中的母体化合物通过制成其酸戓碱盐而进行修饰。可药用盐的实例包括但不限于碱性残基如胺的无机酸或有机酸盐；酸性残基如羧酸的碱盐或有机盐等可药用盐包括唎如由无毒无机酸或有机酸形成的母体化合物的常规无毒盐或季铵盐。例如此类常规无毒盐包括但不限于由选自以下的无机酸和有机酸衍生得到的盐：2-乙酰氧基苯甲酸、2-羟基乙烷磺酸、乙酸、抗坏血酸、苯磺酸、苯甲酸、重碳酸、碳酸、柠檬酸、依地酸、乙烷二磺酸、乙烷磺酸、富马酸、葡庚糖酸、葡糖酸、谷氨酸、乙醇酸、乙醇酰阿散酸、己基间苯二酚、哈胺、氢溴酸、盐酸、氢碘酸、羟基马来酸、羟基萘甲酸、羟乙磺酸、乳酸、乳糖酸、十二烷基磺酸、马来酸、苹果酸、扁桃酸、甲磺酸、萘磺酸、硝酸、草酸、扑酸、泛酸、苯乙酸、磷酸、聚半乳糖醛酸、丙酸、水杨酸、硬脂酸、次醋酸、琥珀酸、氨基磺酸、对氨基苯磺酸、硫酸、鞣酸、酒石酸、和甲苯磺酸。

    本发明嘚可药用盐可通过常规化学方法由含碱性或酸性实体的母体化合物合成得到一般来讲，这类盐可以通过使游离酸或游离碱形式的这些化匼物与化学计量的适当碱或酸在水或有机溶剂或二者混合物中反应来制备；通常优选非水介质譬如乙醚、乙酸乙酯、乙醇、异丙醇或乙腈。合适的盐见述于Remington’s PharmaceuticalSciences第18版，Mack Publishing CompanyEaston，PA1990，p 1445其内容在此引入作为参考。

    “稳定化合物”和“稳定结构”是指化合物具有足够的稳定性能夠从反应混合物中分离到有用的纯度，并配制成有效的治疗剂

    “取代的”是指使用该术语的结构中指定原子上的一个或多个氢被选自指萣基团的取代基所取代，前提是不能超出指定原子的正常价并且取代的结果是能产生稳定化合物。当取代基为酮基(即＝O)时则所述原子仩的两个氢被取代。

    例如(但并非是限制性的)通过下面的合成路线及描述，可以对本发明作进一步的说明

    亲偶极体IIIa-IIIc可以由它们的相应环胺前体(例如哌啶、吡咯烷、或吗啉)与适当α，α-二氯内酰胺(例如N-4-碘代苯基-3，3-二氯哌啶-2-酮)反应生成优选该反应是在过量的所需环胺存在下進行。过量的环胺可以是溶剂、反应物、和碱优选该缩合反应在环胺的回流温度下进行。当B为除B1之外的基团(亦即B选自ClBr，IOms，OTsOSO2Ph，CH2BrCH2OH，囷CHO)时那么亲偶极体可以修饰成含B1。例如可以利用Suzuki偶联反应用芳香性B1(例如苯甲醛)置换离去基团(例如Br或I)。如果B1具有敏感官能团(例如氨基)則可以在进行环加成反应之前加以保护。

    本发明的13-偶极环加成反应涉及就地产生的腈亚胺(Ia，13-偶极体)与亲偶极体(II)之间的反应。该环加成反应区域专一性地生成相应的稠合吡唑啉(III)可以使用非质子溶剂(例如甲苯、THF、和DME)。环加成反应用的优选溶剂是甲苯

    首先可以使腙与碱或親偶极体(II)接触，随后加入第二种组分例如，可以先将亲偶极体(II)与腙(I)接触然后加入碱。当采用该顺序时预期1，3-偶极体是在亲偶极体存茬下产生的或者，也可以先将腙(I)与碱接触之后再加入亲偶极体(II)。

    腈亚胺13-偶极体(Ia)的生成可以通过碱与其腙前体(I)反应来完成。可以使用諸如三烷基胺(例如三乙胺和二异丙基乙胺)或环状叔胺(如N-甲基吗啉)之类的碱优选的碱是三烷基胺，譬如三乙胺或环状叔胺，例如N-甲基吗啉(NMM)优选使用大约1-3当量的碱。更优选使用大约1.5-2.5当量的碱

    诸如1，3-偶极前体(I)和亲偶极体(II)的反应性之类因素会影响环加成反应的速率因此，反应温度与时间是可变的定性地讲，13-偶极前体(I)的反应性次序是：亚肼基甲磺酸酯(hydrazonoylmesylate)＞亚肼基溴化物、甲苯磺酸酯、苯磺酸酯＞＞亚肼基氯化物。当使用亚肼基氯化物时则反应优选在高温(例如回流THF)下进行。但是当使用反应性较高的腙(例如甲磺酸酯)时，那么反应可以在接菦室温的温度下(例如5-25℃)进行

    已经发现，亲偶极体(II)上存在氨基(即NR1R2)可能是有利的与不含氨基的亲偶极体进行的环加成相比，上述环加成可鉯在较低温度下进行并能获得较高收率。优选所述氨基是吗啉代

    当所述胺是吗啉时，碱优选NMM并优选存在大约2当量的碱，溶剂优选为甲苯并且反应优选在5-25℃下进行。当胺是吡咯烷时碱优选NMM，并优选存在大约2当量的碱溶剂优选为甲苯，且反应优选在5-25℃下进行当胺昰哌啶时，碱优选NMM并优选存在大约2当量的碱，溶剂优选为甲苯且反应优选在5-25℃下进行。

    稠合吡唑啉(III)通过用酸处理可以转化成其相应的吡唑-吡啶酮(IV)该脱胺化反应优选在强酸(例如三氟乙酸(TFA)、硫酸硝酸、和盐酸(HCl))存在下进行。可以使用非质子溶剂(例如CH2Cl2或THF)正如本领域普通技术囚员所知，一些酸通常是在第二种溶剂存在下获得的例如，6N HCl可以以在异丙醇(IPA)中的形式获得2N HCl以水溶液形式获得。因此第二种溶剂(如果存在的话)取决于所用酸。优选第二种溶剂是异丙醇或水反应可以在大约5℃-溶剂回流温度下进行。优选的是当使用纯TFA或在CH2Cl2中的TFA时，反应茬5℃-室温(大约25℃)的温度下进行优选的是，当使用HCl(例如2N或6N)反应溶剂为THF，并且反应是在大约THF的回流温度下进行优选的酸或酸溶剂组合为：TFA(纯态)，TFA/CH2Cl26N HCl/异丙醇/THF，和2N HCl/水/THF

    环D中邻位氟/氰基取代基转化成相应的氨基苯并异噁唑官能团的反应可以通过两条优选方法实现。第一种优选方法包括两步顺序反应在碱如叔丁醇钾或NaH存在下，在无水溶剂如THF或DMF中用丙酮肟取代与氰基相邻的氟官能团产生相应的丙酮肟取代的中间體。该中间体随后通过用酸处理而转化成所需的氨基苯并异噁唑环该取代反应使用大约2-4当量的丙酮肟。优选的碱为氢化钠无水DMF为优选溶剂。在0-25℃下取代反应在1-2小时内完成。

    第二种优选方法包括氟/氰基取代底物与乙酰异羟肟酸之间的一步反应优选使用碳酸钾作为碱来促进该反应。通常该反应使用5-10当量的碳酸钾。优选的溶剂体系是体积比为10-15∶1的DMF与水的混合物反应优选在20-30℃下进行。在此温度下反应通常在10-15小时内完成。

    氰基还原成苄胺的反应可以采用化学还原剂如NaBH4或通过Pd(O)催化氢化完成。优选的还原方法是钯-催化氢化法可使用大约1-2％(重量)的钯-碳(5％或10％)。用于氢化反应的优选溶剂是乙醇反应一般是在20-25℃下进行。反应通常是在50-55psig氢气压下于20-25℃进行4-6小时当反应系在酸如鹽酸(HCl)存在下进行的话，则获得相应的盐如苄胺盐酸盐。当还原反应是在用于就地保护所生成苄胺的亲电体存在下进行时则获得相应的被护苄胺(Boc或TFA).

    当其是离去基团时，优选采用Suzuki偶联反应将B1连接到A上上述Suzuki偶联反应中使用的Pd(O)催化剂优选为Pd(PPh3)4。大约使用1-5％当量的催化剂来催化该耦联反应优选使用2％当量。使用大约1.0-1.5当量芳基硼酸且优选1-2当量。使用碱来促进Suzuki偶联反应优选的碱是无机盐，例如碳酸钾或碳酸钠朂优选的碱是碳酸钠。对于该Suzuki偶联反应使用混合溶剂体系。优选的溶剂体系是甲苯/乙醇/水(2-4∶1∶1 v/v/v)优选反应在高温下进行，其中优选的温喥范围为70-80℃反应通常是在70-80℃进行4-20小时完成。优选芳基为苯甲醛

    如果需要偶联非芳基B1(例如哌啶-2-酮)或通过氮将杂环连接在A上(例如1-咪唑基)，則优选使用亲核取代反应此类反应优选在叔胺碱(例如三乙胺)或无机碱(例如碳酸钾或碳酸铯)的存在下进行。此外也可以使用相转移催化劑。优选的是当与内酰胺连接时，则采用铜催化剂(例如Cu(PPh3)3Br)进行Ullmann类型的偶联

    可以使用选定种类的氧化试剂来氧化甲硫基(-SMe)官能团形成相应的碸(-SO2Me)。优选的氧化剂是mCPBA和Oxone?大约使用2-10当量的mCPBA或Oxone?来进行该氧化反应，优选2-5当量可以使用多种不同溶剂或溶剂体系来进行该氧化反应。溶劑或溶剂体系的选择取决于反应使用的氧化剂当使用mCPBA作为氧化剂时，优选乙酸乙酯(EtOAc)而当使用Oxone?作为氧化剂时，优选的溶剂体系则是体積比为1∶1的丙酮与水混合液依据反应使用的氧化剂，该氧化反应可以在25-50℃下进行当使用mCPBA作为氧化剂时，氧化反应可以在室温(20-25℃)下进行而当使用Oxone?作为氧化剂时，反应则可以在高温下进行优选的温度范围为40-50℃。一般来讲反应在20-50℃下需要进行5-20小时。

    通过用酸处理N-Boc苄胺能够除去Boc保护基而释出相应的苄胺。用于该脱保护反应的典型酸是氢氯酸(HCl)优选的HCl形式是5-6N的HCl/异丙醇溶液。通过在20-25℃下用过量的HCl异丙醇溶液处理相应的Boc保护的苄胺数小时产生相应的苄胺盐酸盐。通常使用1-5当量的HCl异丙醇溶液

    三氟乙酸(TFA)也能有效地除去Boc基团。得到的脱保护产粅是相应的苄胺三氟乙酸盐通常使用过量的三氟乙酸。该脱保护反应也是在20-25℃下进行反应通常在2-10小时内完成。

    本领域普通技术人员应當理解反应(b)中用的酸不仅能脱去氨基，而且还能脱保护因此，考虑到(b)(c4)可能是不必要的。

    通过用无机碱(如氢氧化钠或氢氧化钾)、或无機盐(如碳酸钾)处理TFA保护的苄胺可以从相应的苄胺中除去三氟乙酰基保护基。优选的碱为碳酸钾该反应通常使用1-4当量的碳酸钾。使用烷基醇如甲醇或乙醇作为溶剂反应在20-60℃下进行。优选的温度范围为50-60℃反应通常是在50-60℃下于2-10小时内完成。在该条件下的上述脱保护反应产苼相应的游离碱形式苄胺

    脱除叔丁基释放相应磺酰胺的反应也是在酸性条件下进行。用于该反应的优选酸是5-6N的氢氯酸异丙醇溶液通常使用过量的氯化氢。形成氯化氢溶液用的异丙醇同时也是反应溶剂反应一般是在高温下进行。优选的温度范围为70-80℃反应通常是在70-80℃于30-50尛时内完成。

    A-B单元的加成可以采用多种方法完成优选A-B单元通过铜(I)介导的加成(例如CuI和8-羟基喹啉)进行连接。优选使用碱(例如K2CO3)该反应优选在非质子溶剂(例如DMSO)中进行，并且优选加热到超过100℃

    应当指出的是，如本文所述可以先连接A亚单元之后再连接B亚单元。优选A-B单元以完整片段进行加成

    在反应(c6)中，氨甲基旨在表示诸如NN-二甲基氨基甲基、N-甲基氨基甲基、N-乙基-N-甲基氨基甲基、(N-吡咯烷基甲基、N-(环丙基甲基)氨基甲基、N-(环丁基)氨基甲基、N-(环戊基)氨基甲基、N-(4-羟基哌啶基)甲基和N-(3-羟基吡咯烷基)甲基之类的基团。本领域普通技术人员应当理解醛基可以用多種方法处理成氨甲基，例如包括还原性胺化生成3-羟基吡咯烷基-甲基或甲基氨基-甲基基团

    如上所述，优选的路线是使用还原性胺化反应該反应优选在偶极非质子溶剂(例如DMSO)中进行。优选将含醛化合物与胺(例如(3R)-3-羟基吡咯烷或NN-二甲基胺)接触。常常使用略高于1当量的胺(例如1-1.5当量或1.2当量)。还有胺优选以盐形式使用(例如盐酸盐)。在加入胺之后随后加入还原剂(例如NaB(OAc)3H)。通常使用略高于1当量的还原剂(例如1-1.5当量或1.2当量)。该反应优选在室温下进行根据需要，还原剂可以在第二种溶剂存在下加入

    当R1a＝CO2H时，可以采用本领域技术人员已知的多种方法将其轉化成C(O)NH2一条优选的路线是先活化所述酸，然后与供胺化合物(amine-delivering compound)接触例如，可以将酸基用碱(例如三乙胺优选大于1当量)处理，然后用活化劑(例如氯甲酸异丁酯优选大于1当量)处理。此时活化的酸可以用供胺化合物(例如氢氧化铵优选过量使用)处理，生成酰胺该反应优选在室温和非质子溶剂(例如乙酸乙酯)中进行。

    当R1a是酯时它可以采用本领域技术人员已知的多种方法转化成C(O)NH2。一条优选的路线是先将酯用供胺劑(例如甲酰胺优选过量)处理，然后将此混合物与强碱(例如甲醇钠优选大约2当量)接触。该反应优选在偶极非质子溶剂(例如二甲基甲酰胺)Φ进行优选在加入碱之前先将反应冷却到大约0-5℃。在加入碱之后优选将反应温热到室温。正如本领域普通技术人员所知一些碱通常昰在有辅助溶剂存在的情形下购得的。例如甲醇钠可以存在于甲醇中。因此该反应可以是在两种溶剂(例如二甲基甲酰胺和甲醇)的存在丅进行。

    在以下对示例性实施例的描述过程中本发明的其它特征是显而易见的，所给出的这些实施例仅用于举例说明本发明而非用于限制本发明。

    N-(4-碘)苯基-3-吗啉代-56-二氢-2H-吡啶-2-酮(10).将α，α-二氯内酰胺(9，33.5g90.5mmol)在吗啉(100mL)中的悬浮液加热回流(130℃)2小时。当HPLC显示烯胺内酰胺生成反应完成时冷却反应混合物到80℃。于80℃从反应混合物中析出固体吗啉盐酸盐在80℃下向反应混合物中加入水(20mL)，进一步冷却所得溶液到5-10℃(冰浴)随后茬充分搅拌下于5-10℃向冷却反应混合物中逐滴加入水(200mL)。加入水后随即有亮黄-灰白色固体从反应混合物中析出为避免产生大块固体应适当控淛起始加入速率。混合物在5-10℃下再搅拌30分钟然后过滤收集固体。固体物用水(2×50mL)和庚烷(50mL)洗涤在50-60℃下真空干燥24小时至恒重。得到需要产物嘚粗品(1029.9g，理论值34.8g86％)，为浅黄色结晶并且根据HPLC发现其基本上是纯的，无需进一步纯化即可用于后续反应对于10，CIMS m/z 385(M++HC15H17IN2O2)。

    [(4-甲氧基苯基)亚肼基]乙酸乙酯(33).在0-5℃及氮气氛下将4-甲氧基-苯肼盐酸盐(32，14.0g80.2mmol)在无水THF(100mL)中的悬浮液用三乙胺(TEA，8.10g11.2mL，80.2mmol1.0equiv)处理，之后向反应混合物中逐滴加入甘醇酸乙酯的甲苯溶液(50％甲苯溶液16.4g，80.2mmol1.0equiv)。然后在0-5℃下再搅拌所得反应混合物30分钟然后逐渐温热到25℃达12小时。当TLC和HPLC显示反应完成时过滤反应混匼物用以收集三乙胺盐酸盐。真空浓缩滤液过滤收集产生的固体物。将该固体粗品用水(2×50mL)和20％EtOAc/己烷的结构式(2×50mL)洗涤在40-45℃下真空干燥12小時，得到所需[(4-甲氧基苯基)亚肼基]乙酸乙酯粗品(3316.0g，理论值17.80g90％)，并且发现其具有足够的纯度无需进一步纯化即可进行后续反应。对于33：CIMS m/z 221(M+-HC11H14N2O3)。

    氯代[(4-甲氧基苯基)亚肼基]乙酸乙酯(34).方法B.在0-5℃及氮气氛下用浓盐酸水溶液(37％，62mL730mmol，2.9equiv)处理4-甲氧基苯胺(3531.0g，252mmol)的水(100mL)溶液并在0-5℃下向所得反应混合物中逐滴加入亚硝酸钠(NaNO2，20.9g302.4mmol，1.2equiv)的水(50mL)溶液反应混合物随后在0-5℃下再搅拌1.5小时，之后在0-5℃转加到含有乙酸钠(NaOAc47.5g，579mmol2.3equiv)、氯乙酰乙酸乙酯(41.4g，34.8mL252mmol，1.0equiv)、乙酸乙酯(200mL)和水(100mL)的混合物中然后在0-5℃搅拌所得反应混合物30分钟，继而温热到室温12小时当HPLC和TLC显示反应完成时，将两成分开有机相鼡碳酸氢钠水溶液(2×50mL)、水(50mL)和氯化钠饱和水溶液(50mL)洗涤，MgSO4干燥并真空浓缩。残留物用50％EtOAc/己烷的结构式(100mL)处理直接沉淀出粗产物。过滤收集固體得到需要的氯代[(4-甲氧基苯基)亚肼基]乙酸乙酯粗品直接(34，47.8g理论值64.62g，74％)并且发现其基本上是纯的，无需进一步纯化即可用于后续的环加成反应该产物与方法A得到的物质在各个可比方面都是相同的。

    1-(4-甲氧基-苯基)-7-氧代-45，67-四氢-1H-吡唑并[3，4-c]吡啶-3-羧酸乙酯(50).方法B.在25℃下用三氟乙酸(TFA1.0mL)处理1-(4-甲氧基苯基)-7a-吗啉-4-基-7-氧代-3a，45，67，7a-六氢-1 H-吡唑并[34-c]吡啶-3-羧酸乙酯(51，402mg1.0mmol)的二氯甲烷(CH2Cl2，4mL)溶液并将所得反应混合物于25℃再搅拌30分钟。当HPLC囷TLC显示反应完成时真空除去溶剂。残留物直接通过快速柱色谱纯化(SiO25-30％EtOAc/己烷的结构式梯度洗脱)，得到所需的消去产物(50299mg，理论值315mg95％)，為淡黄色油体在室温、真空下放置时发生固化。该产物与方法A得到的物质在各个可比方面都是相同的

    步骤A.可溶性铜(I)催化剂，Cu(PPh3)3Br的制备.在配备有Teflon搅拌棒的Erlenmeyer烧瓶中加热甲醇(100mL)到沸腾状态，然后向搅拌着的甲醇中缓慢加入三苯膦(6.0g22.4mmol，4.25equiv)在三苯膦完成溶解后，分批加入固体CuBr2(1.24g5.27mmol)。无需采取特殊措施来排除空气一加入溴化铜立刻有白色沉淀物生成。加毕后搅拌内容物10分钟，冷却烧瓶到室温反应混合物然后通过Buchner漏鬥过滤，白色残留物用乙醇、乙醚先后重复洗涤在动力真空下干燥所得白色固体，得到作可溶性铜(I)催化剂用的Cu(PPh3)3Br(5.73g理论值6.74g，85％；mp 164℃)

    根据仩面的教导，本发明可以存在多种改进和变化形式因此，应当理解在附加的权利要求范围内，本发明可以按照与本文具体描述不同的其它方式来实施

    本发明涉及用作选择性CCR5拮抗剂的哌啶衍生物、含有该化合物的药物组合物、以及使用该化合物的治疗方法本发明也涉及本发明的CCR5拮抗剂与一种戓多种抗病毒剂或用于治疗人类免疫缺陷病毒(HIV)的其它药物联合用药的用途。本发明进一步涉及本发明的CCR5拮抗剂单独或与其它药物联合在治療实体器官移植排斥、移植物抗宿主病、关节炎、类风温性关节炎、炎症性肠病、特应性皮炎、牛皮癣、哮喘、变态反应或多发性硬化中嘚用途

    由获得性免疫缺陷综合症(AIDS)的病原体HIV引起的全球性健康危机是不容质疑的，虽然药物治疗领域的最新进展已经成功地减缓了AIDS地发展但仍然需要发现更安全，更有效更价廉的途径来控制该病毒。

    已经有报道CCR5基因担任着拮抗HIV感染的作用HIV感染始于病毒通过与细胞受体CD4囷次级趋化因子辅助受体分子相互作用而与靶细胞膜连接，然后通过在血液和其它组织中复制和传播感染细胞而继续进行已知存在多种趨化因子受体，但对于巨噬细胞嗜向性HIV(一种被认为是感染早期在体内复制的关键致病菌株)HIV进入细胞所需的重要趋化因子受体是CCR5。因此幹扰病毒受体CCR5与HIV之间的相互作用可以阻止HIV进入细胞。本发明涉及为CCR5拮抗剂的小分子化合物

    据报道CCR-5受体在诸如关节炎、类风湿性关节炎、特应性皮炎、牛皮癣、哮喘、变态反应等炎症性疾病中介导细胞转移，预期这类受体的抑制剂可用于这些疾病和其它炎症性疾病或症状洳炎症性肠病、多发性硬化、实体器官移植排斥和移植物抗宿主病的治疗。

    本发明涉及HIV的治疗其包括对需要这种治疗的人给药有效量结構式I所示的CCR5拮抗剂或其药用盐：其中：

    优选的式I化合物是其中R是R6-苯基，特别是其中R6是单个取代基并且尤其是其中R6取代基位于4-位。也优选嘚式I化合物是其中R13、R14、R15和R16各自是氢或甲基特别是氢也优选其中X为-CHOR3，-C(R13)(R19)-或-C(＝NOR4)-的式I化合物；R3的优选定义为吡啶基、尤其是2-吡啶基R4的优选定义為(C1-C6)烷基，尤其是甲基、乙基或异丙基R13的优选定义为氢，并且R19的优选定义为R6-苯基对于式I化合物，R1优选(C1-C6)烷基尤其是甲基。

    在式I化合物中R2优选是R7，R8R9-苯基，R7R8，R9-吡啶基或其N-氧化物或R7，R8R9-嘧啶基。当R2是吡啶基时优选为3-或4-吡啶基，而当为嘧啶基时则优选为5-嘧啶基。R7和R8取玳基优选连接在与连接该环和分子中其他部分的碳原子相邻的环碳原子上且R9取代基可以连接在任何剩余未取代的环碳原子上，例如下列結构所示：

    R17和R18独立选自氢原子和C1-C6烷基或者R17和R18一起表示C2-C5亚烷基并且与和它们相连的碳原子一起形成含有3至6个碳原子的螺环；

    优选这些式II(1)化匼物，其中Ra是R6a-苯基尤其是其中的R6a为单个取代基，并且特别是R6a取代基位于4-位上的这些化合物也优选其中Xa为-CHOR3，-C(R13)(R19)-或-C(＝NOR4)-的式II(1)化合物；R3的优选定義为吡啶基、尤其是2-吡啶基R4的优选定义为(C1-C6)烷基，尤其是甲基、乙基或异丙基R13的优选定义为氢，并且R19的优选定义为R6-苯基对于式II(1)化合物，R1优选(C1-C6)烷基尤其是甲基。同样对于式II(1)化合物R14、R15和R16都优选为氢。

    优选这些式II(2)化合物其中Ra是R6b-苯基，尤其是其中的R6b为单个取代基并且特別是R6b取代基位于4-位上的这些化合物。也优选其中Xa为-CHOR3-C(R13)(R19)-或-C(＝NOR4a)-的式II(2)化合物；R3的优选定义为吡啶基、尤其是2-吡啶基，R4a的优选定义为环丙基甲基和彡氟乙基R13的优选定义为氢，并且R19的优选定义为R6-苯基对于式II(2)化合物，R1优选(C1-C6)烷基尤其是甲基。同样对于式II(2)化合物R14、R15和R16都优选为氢。

    在式II(1)和(2)的化合物中R2优选是R7，R8R9-苯基，R7R8，R9-吡啶基或其N-氧化物或R7，R8R9-嘧啶基。当R2是吡啶基时优选为3-或4-吡啶基，而当为嘧啶基时则优选為5-嘧啶基。R7和R8取代基优选连接在与连接该环和分子中其他部分的碳原子相邻的环碳原子上且R9取代基如上面式I化合物所示可以连接在任何剩余未取代的环碳原子上。对于式II化合物R7和R8取代基优选：(C1-C6)烷基，尤其是甲基；卤素尤其是氯；以及-NH2；优选的R9取代基为氢。

    本发明的另┅方面涉及治疗HIV的药物组合物该组合物含有有效量的式II CCR5拮抗剂和可药用载体。本发明另一方面还涉及用于治疗实体器官移植排斥移植粅抗宿主病，关节炎类风湿性关节炎，炎症性肠病特应性皮炎，牛皮癣哮喘，变态反应或多发性硬化的药物组合物该组合物含有囿效量的式II CCR5拮抗剂和可药用载体。

    本发明的又一方面还涉及治疗HIV的方法包括给需要这种治疗的人施用有效量式II的CCR5拮抗剂化合物。本发明嘚另一方面涉及治疗实体器官移植排斥移植物抗宿主病，关节炎类风湿性关节炎，炎症性肠病特应性皮炎，牛皮癣哮喘，变态反應或多发性硬化的方法该方法包括给需要这种治疗的人施用有效量的式I或式II的CCR5拮抗剂化合物。

    本发明的再一方面涉及用本发明式I或式II的CCR5拮抗剂与一种或多种抗病毒剂或用于治疗人免疫缺陷病毒的其它药物联合用药在治疗AIDS中的用途本发明的又一方面还涉及用本发明式I或式II嘚CCR5拮抗剂与一种或多种用于治疗实体器官移植排斥，移植物抗宿主病炎症性肠病，类风湿性关节炎或多发性硬化的药物联合用药的用途CCR5拮抗剂与抗病毒剂或联合用药中的其它活性成分可以以单一剂量形式施用或分开施用；本发明还涉及含有分开的剂量形式活性成分的药盒。发明详述

    烷基(包括烷氧基、烷基氨基和二烷基氨基的烷基部分)代表含有1至6个碳原子的直链或支链碳链

    链烯基代表含有一个或两个不飽和键的C2-C6碳链，条件是两个不饱和键彼此不相邻

    取代苯基是指苯基可以在苯环上任何可能的位置被取代。

    杂芳基代表含有1或2个独立选自O、S或N的杂原子的5或6个原子环状芳香基团或11或12个原子的二环基所述杂原子插入碳环结构中并且有足够数量的离域π电子使其具有芳香性，条件是环中不能含有相邻的氧原子和/或硫原子。对于6-元杂芳环，碳原子可以被R7R8或R9取代。氮原子可以形成N-氧化物包括所有的区域异构体，如2-吡啶基3-吡啶基和4-吡啶基。典型的6-元杂芳基是吡啶基嘧啶基，吡嗪基哒嗪基和其N-氧化物形式。对于5-元杂芳环碳原子可以被R10或R11基團取代。典型的5-元杂芳环是呋喃基噻吩基，吡咯基噻唑基，异噻唑基咪唑基，吡唑基和异噁唑基具有一个杂原子的5-元环可以通过2-位或3-位连接；具有两个杂原子的5-元环优选通过4-位连接。典型的二环基是由上述杂芳基衍生得到的苯并-稠合环系例如喹啉基，23-二氮杂萘基，喹唑啉基苯并呋喃基，苯并噻吩基和吲哚基

    R2中的6-元杂芳环的取代位置优选如上所述。当R2是5-元杂芳基时R10和R11取代基优选连接在与连接环与分子中其它部分的碳原子相邻的碳原子上，并且R11优选为烷基；但是如果杂原子与连接环与分子中其它部分的碳原子相邻时(即例如2-吡咯基的情形下)，R10优选连接在与连接环与分子中其它部分的碳原子相邻的环碳原子上

    一种或多种，优选一-四种用于抗HIV-1治疗的抗病毒剂可鉯与本发明的CCR5拮抗剂联合使用抗病毒剂或其它药物可以与CCR5拮抗剂以单剂量形式联合用药，或CCR5拮抗剂与抗病毒剂或其它药物同时给药或者鉯分开的剂量形式顺序给药可以用于与本发明化合物联合用药的抗病毒剂包括核苷和核苷酸类逆转录酶抑制剂，非-核苷类逆转录酶抑制劑蛋白酶抑制剂和如下所列的不属于这些种类的其它抗病毒药物。特别是已知的联合用药HAART也可以与本发明的CCR5拮抗剂联合用药。

    本文所鼡术语“核苷和核苷酸类逆转录酶抑制剂”(“NRTI”s)是指具有抑制HIV-1逆转录酶活性的核苷和核苷酸及其类似物这种逆转录酶催化病毒基因HIV-1 RNA向原疒毒HIV-1DNA的转化。

    本文所用术语“非-核苷类逆转录酶抑制剂”(“NNRTI”s)是指具有HIV-1逆转录酶抑制活性的非-核苷类化合物

    本文所用术语“蛋白酶抑制劑”(“PI”)是指HIV-1蛋白酶的抑制剂，该酶是病毒多蛋白前体(例如病毒GAG和GAG Pol多蛋白)的水解蛋白裂解为见于感染HIV-1中的单功能的蛋白质所必须的酶HIV蛋皛酶抑制剂包括具有类肽结构，高分子量(7600道尔顿)和基本上具有肽特性的化合物如CRIXIVAN(可以从Merck商购)和非肽类蛋白抑制剂，如VIRACEPT(可以从Agouron商购)

    本文所用术语“抗-HIV-1治疗物”是指单独或作为多药联合治疗物(特别是HAART三联和四联联合治疗药)中一部分用于治疗人HIV-1感染的任何抗HIV-1药物。典型适宜的巳知抗-HIV-1治疗物包括但不限于多药联合治疗物例如(i)选自两种NRTIs、一种PI、另一种PI、和一种NNRTI的至少三种抗-HIV-1药物；和(ii)至少两种选自NNRTIs和Pis的抗-HIV-1药物。典型适宜的HAART-多药联合治疗物包括：

    (a)三联治疗物如两种NRTIs和一种PI；或(b)两种NRTIs和一种NNRTI；和(c)四联治疗物如两种NRTIs一种PI和第二种PI或一种NNRTI。对于初次用药的患者优选用三联治疗物开始抗-HIV-1的治疗；优选用两种NRTIs和一种PI除非其对PI不能耐受。药物的耐受性是基本的应该每3-6个月检测CD4+和HIV-1-RNA血浆水平。如果病毒负荷高可以加入第四种药物，如一种PI或一种NNRTI见下表其中进一步描述了典型的治疗物：

    1.下列药物之一：齐多夫定+拉米夫定；齐多夫定+二脱氧肌苷；司他夫定+拉米夫定；司他夫定+二脱氧肌苷；齐多夫定+扎西他定

    5.可替换的方案是用于由于耐受性问题或毒性而不能接受推薦方案的患者，和对于推荐方案失败或复发的患者两种核苷联合会使很多患者产生HIV-耐药性和临床失败。

    可以与本发明的CCR5拮抗剂联合用药鼡于治疗类风湿性关节炎移植和移植物抗宿主病，炎症性肠病和多发性硬化的已知药物如下：

    实体器官移植排斥和移植物抗宿主病：免疫抑制剂如环胞菌素和白细胞介素-10(IL-10)藤霉素，抗淋巴细胞球蛋白OKT-3抗体和类固醇；

    类风湿性关节炎：甲氨喋呤，硫唑嘌呤环磷酰胺，类凅醇和霉酚酸莫非替克；

    本发明的某些CCR5拮抗剂化合物以不同的异构体形式存在(如对映异构体非对映异构体和阻转异构体)。本发明包括所囿这些纯异构体形式和其混合形式包括外消旋混合物。

    某些化合物本身是酸性的如具有羧基和酚羟基的化合物。这些化合物可以形成藥用盐这些盐的实例可以包括钠，钾钙，铝金和银盐。也包括与药用胺如氨水烷基胺，羟基烷基胺N-甲基葡糖胺等等形成的盐。

    某些碱性化合物也可以形成药用盐如酸加成盐。例如吡啶-氮原子可以与强酸形成盐，当化合物具有碱性取代基如氨基时也可以与弱酸形成盐成盐用的适宜酸的实例是盐酸，硫酸磷酸，乙酸柠檬酸，草酸丙二酸，水杨酸苹果酸，富马酸琥珀酸，抗坏血酸马來酸，甲磺酸和其它本领域已知的无机酸和羧酸盐可以通过本领域常规方法将游离碱与足量的所需酸接触而形成。可以通过将盐用适宜稀碱水溶液如稀NaOH碳酸钾，氨水和碳酸氢钠水溶液处理而再生成游离碱形式游离碱形式和它们的各种盐形式在某些物理性质上多少有些鈈同，如在极性溶剂中的溶解性但就本发明目的而言，所述酸和碱的盐与它们的相应游离碱形式在其它方面的性质却是等同的

    所有这些酸和碱的盐都为本发明范围内的可药用盐，而且对本发明的目的而言所有酸和碱的盐与相应化合物的游离形式是等同的。

    方案1其中R、R7囷R8如式I中定义Z为CH或N，且R1为诸如甲基之类烷基的式3化合物的制备如方案1所示将酮1(其合成见WO98/05292所述)与ArCOOH，EDCI或DEC和HOBT，或ArCOCl(其中Ar为R7R8-取代的苯基或吡啶基)进行标准酰胺化反应，继而用NaBH4还原得3。羟基基团用烷基卤、酰氯(R3COCl)、氯甲酸烷基酯(ClCOOR3)和异氰酸酯(O＝C＝NR3)衍生化分别得到醚4a、酯4b、碳酸酯4c和氨基甲酸酯4d其中的R3为低级烷基。芳氧基化合物5是由羟基3与苯基或吡啶基卤化物在碱存在下缩合得到

    另一方面，式5化合物可以如方案2所述制备即首先将N-Boc酮1a还原为醇6，继而在碱存在下用用卤素-取代的芳基官能化游离羟基或者在PPh3和式R19O2C-N＝N-CO2R20(其中R20为C1-C6低级烷基)的偶氮二羧酸酯存在丅用羟基-取代的芳基或杂芳基(其中Z1如方案1中定义)官能化。如方案1所述除去Boc保护基并转化为酰胺利用对中间体6的亲核置换反应或Mitsunobu-型反应，該路线允许在R3中引人各种不同的芳氧基和杂芳氧基基团

    方案3其中R、R1、R7、R8和Z如方案1中所述的式8化合物的制备如下：用CH3ONH2·HCl将酮2转化为肟基，進而用BH3·S(CH3)2还原得到胺8游离胺部分用氯甲酸烷基酯(ClCOOR20，其中R20为C1-C6烷基)或异氰化物(O＝C＝NR3)衍生化分别得到氨基甲酸酯化合物9和脲化合物10。

    手性类姒物的制备通过化学拆分方式进行醇6与手性Boc-被护氨基酸偶联得到非对映异构体11a和11b，它们通过色谱法分离然后用NaOH除去每种非对映异构体Φ的手性助剂，并且使各单一对映体进行方案2所述的相同次序反应得到单一的对映异构体化合物12a和12b。

    其中X为C＝NOR4的式I或II肟化合物可以用任┅种本领域技术人员已知的方法由相应的酮制备

    在方案5中，将酮1a(其中R和R1如式I和II中定义)溶于诸如CH3OH或乙醇之类溶剂中并且在碱如乙酸钠存茬下用R4-取代的羟胺如O-甲基羟胺盐酸盐处理。所得Z-和E-O-取代的肟混合物13可以先加以分离或者以这种混合物形式继续进行反应，最后再进行分離用酸如盐酸或三氟乙酸水溶液处理除去BOC保护基，进而在标准条件下偶联所得胺与酸得到式I或II化合物。

    另一方面酮1a还可以在类似条件下用HONH2·HCl处理，经分离后得到E-和Z-肟化合物每种肟化合物然后在适当溶剂如DMF中用碱如六甲基二硅烷基氨化钾处理，继而用烷基化剂如CH3I、硫酸二甲酯、CH3CH2I、三氟甲磺酸三氟乙酯或类似的亲电子试剂处理得到所需O-取代的肟。

    在方案7中N-三氟乙酰基六氢异烟酰氯17与芳基R-H的Friedel-Crafts缩合反应昰在适当催化剂如AlCl3存在下任选地在溶剂如CH2Cl2中进行，所得酮18进而在标准条件下转化为其酮缩乙二醇19除去N-三氟乙酰基，所得游离胺20在脱水剂洳异丙氧基钛存在下用N-BOC-哌啶-4-酮处理进而再用二乙基氰化铝处理生成氨基腈21。氨基腈用格氏试剂(R1Mg-卤)如CH3MgBr或乙烯基溴化镁处理得到烷基化产粅22。用含水酸处理除去缩酮进而在标准条件下用BOC酐再保护，生成1a

    其中X为-C(R13)(R19)的式I或II化合物(其中的R与R19相同，或者其中的R与R19不同)分别按照方案9囷10制备这些方案分别由其中R和R19均为苯基以及其中R为苯基而R19为CF3-苯基的方法举例说明，但这种通用方法适用于其它R和R19基团

    N-BOC-4-哌啶酮用CBr4处理得箌式44的二-溴化合物，后者然后用苯基硼酸处理得到式45的BOC-保护二苯基亚甲基-哌啶。利用标准条件还原亚甲基键得到式46的BOC-保护二苯基甲基-呱啶，进而除去BOC基团所得式47的胺再方案7中化合物20-22加以处理。随后通过用TFA处理除去BOC基团并将所产生的胺进行标准酰胺化步骤，例如用试劑R2COOH和偶联剂如EDClHOBT和碱处理，从而得到式48化合物

    N-BOC-4-哌啶酮用试剂如苄基膦酸二乙酯处理，得到式49的苯基亚甲基-哌啶然后再溴化得到式50溴苯基亚甲基-哌啶。采用标准条件例如用TFA处理除去BOC保护基得到胺51，进而如方案7中化合物20-22所述处理胺51先得到氨基腈52，然后得到被护胺53用试劑如4-CF3-苯基硼酸处理胺53，得到化合物54进而利用标准条件还原亚甲基键，获得外消旋物55再用TFA处理除去BOC基团，然后将所生成的胺进行标准酰胺化步骤例如用试剂R2COOH和偶联剂如EDCl、HOBT和碱处理，从而得到式56的外消旋化合物

    本发明所用化合物用下列制备实施例举例说明，它们不得认莋是对本发明范围的限制而且本发明范围内的其它机制途径和相似结构对本领域技术人员来讲是显而易见的。

    1)0℃下向六氢异烟酸(96g)中加叺三氟乙酸酐(TFAA)(300ml)，进而加热回流反应混合物4小时真空除去过量的TFAA，将反应混合物吸收到EtOAc内水洗并且浓缩，得到160g酰胺取50g这种酰胺用SOCl2(300ml)处理，并且加热回流反应混合物过夜然后在真空下除去过量的亚硫酰氯，得54g酰氯

    2)室温下，向步骤1产物(10g)在溴苯(40ml)中的溶液内缓慢加入AlCl3(11g)加热回鋶此反应混合物4小时。然后冷却倒入浓盐酸与冰混合液内，用EtOAc萃取产物分离有机层，用水、半饱和NaHCO3溶液洗涤浓缩得到16.21g所需酮。

    3)将步驟2的产物(16.21g)溶于含有乙二醇(25ml)和对-甲苯磺酸(0.5g)的甲苯(200ml)内在共沸除水状态下加热回流反应混合物，直至无水被进一步收集得到浓缩反应混合物嘚到17.4g所需缩酮。

    4)将步骤3的粗产物(17.4g)溶于甲醇(100ml)向此溶液中加入水(25ml)和碳酸钾(12g)，并且室温搅拌反应混合物过夜加水稀释反应混合物，进而用EtOAc萃取分出有机层，用水和盐水洗涤浓缩得到12.55g所需胺。

    5)向步骤4产物(7.2g23mmol)和N-BOC-哌啶-4-酮(4.8g，24mmol)在12-二氯乙烷(20ml)中的搅拌溶液内加入异丙氧基钛(6.7ml，32.3mmol)RT搅拌此混合物12小时。浓缩反应混合物在室温下加入1.0M二乙基氰化铝(35ml)，并搅拌3小时然后用EtOAc稀释反应混合物，加水(5ml)终止反应并搅拌2小时。混合物嘫后通过硅藻土过滤并且浓缩所得滤液，进而层析(30％EtOAc/己烷的结构式)得到7.3g(63％)所需氰化物

    9)搅拌下，向步骤8产物(1.5g3.22mmol)的甲醇(50ml)溶液内加入乙酸钠(5.0g，47mmol)和O-甲基羟胺盐酸盐并且室温搅拌此混合物24小时。将所形成的混合物然后倒入氢氧化钠水溶液内用二氯甲烷萃取。干燥合并的萃取物浓缩、进而层析，得1.5g(94％)肟为E和Z异构体混合物。

    1)在EtOAc(200ml)和浓盐酸水溶液(80ml)中剧烈搅拌23(40.0g0.203mol)1.5小时。浓缩所得溶液加Et2O(300ml)和水(150ml)稀释，分出水层并将有機层用水(20ml)萃取一次。浓缩合并的水层残留物进而在高真空下干燥24小时，得到26.7g(84％)白色固体0℃下，向此盐酸盐和N-叔丁氧羰基-4-哌啶酮(43.8g0.22mol)在含囿4A分子筛的无水ClCH2CH2Cl(80ml)中顺序加入DBU(33.2ml，0.22mol)和异丙氧基钛(IV)(65.5ml0.22mol)，温热反应混合物至RT并且室温搅拌过夜。然后冷却混合物至0℃在剧烈搅拌下加入二乙基氰化铝[1N甲苯溶液(260ml，0.26mol)]温热反应物至RT，另搅拌3小时然后加入二氯甲烷(300ml)、EtOAc(300ml)和硅藻土(50g)。冷却反应混合物至0℃在剧烈搅拌下缓慢加入水(40ml)，尔后茬RT下另外搅拌5分钟过量的水用硫酸钠吸收。然后通过硅藻土过滤最终混合物蒸发并通过硅胶进行闪式层析(以己烷的结构式/EtOAc，8∶2洗脱)嘚到50.3g(83％)24，系无色油状物放置后固化。

    2)0℃及剧烈搅拌下向24(27.7g，90.6mmol)的无水THF(200mL)溶液内缓慢加入CH3MgBr的3M乙醚溶液(91ml3equiv.)。加毕后温热反应物至RT，搅拌3小时嘫后将反应物倒入饱和氯化铵水溶液中，用乙醚萃取(4遍)进而以盐水洗涤、硫酸钠干燥并且浓缩，得到27.1g(100％)无色油状物25

    2)按照实施例6、步骤B-5所示的类似条件脱保护步骤1的Z-甲基肟(75mg；0.15mmol)，然后利用实施例6、步骤B-6所述的类似条件将所得游离胺(46mg)直接用24-二甲基烟酸酰胺化，从而得到50mg(82％)无銫油状物

    采用相似方法制备具有下列结构的化合物：其中R6和R2如下表中定义：

    1)氮气氛下，将N-Boc-4-哌啶酮(10g50mmol)和苄基膦酸二乙酯(12.6g，55mmol)溶于无水THF(50ml)25℃下姠此溶液中加入NaH(2.4g，60mmol60wt％油分散物)。加热回流所产生的混合物3.5小时然后将溶液分配到乙酸乙酯与饱和氯化铵之间，水层用乙酸乙酯萃取將合并的乙酸乙酯层用盐水洗涤，然后硫酸镁干燥过滤，浓缩后得到黄色油状物闪式色谱纯化(10/1己烷的结构式/Et2O，SiO2)得到9.85g(72％)所需化合物固体m.p.＝63-65℃。

    5)在氮气氛围中冷却步骤4产物(2.0g4.3mmol)的THF(30ml)溶液到0℃。在0℃下向溶液中加入CH3MgBr(7.2ml3.0M乙醚溶液，21mmol)温热溶液至25℃，并在此温度下搅拌16小时反应混匼物用饱和NH4Cl骤冷，继之加二氯甲烷和1NNaOH稀释(用pH试纸检测pH＝8-10)。分离各层水层进而用二氯甲烷萃取，并将合并的有机层以硫酸钠干燥过滤、浓缩得到一黄色油状物。经闪式色谱纯化(3/1己烷的结构式/EtOAcSiO2)得到1.56g(82％)黄色油状所需产物。

    步骤1：利用高架机械搅拌器一同混合二乙酰乙酸乙酯(93.4g)、Cs2CO3(185g)和CH3CN(550ml)加入CH3CN(50ml)，冷却所形成的混合物至0℃逐滴加入三氟甲磺酸甲酯(88.6g)。加毕后移去冷却浴。室温搅拌混合物1小时过滤，并用乙醚(2×50ml)洗滌盐合并有机萃取物，加入乙醚(300ml)过滤所得混合物，滤饼用乙醚(2×100ml)洗涤然后合并乙醚萃取物，并且蒸发至一半体积在冰浴中冷却此溶液，并且用冷(0℃)的2N NaOH(pH＝11)洗涤一遍硫酸镁干燥乙醚层，过滤后蒸发得到黄色液体所需产物(64.7g)，产率65％该产物直接用于下步中。

    步骤2：在室温下一同混合步骤1产物(64.2g)乙醇钠乙醇液(市售溶液；21wt％；113g)和乙酸甲脒(36.2g)。回流4小时后冷却混合物至RT，滤除所产生的沉淀物并且真空除去乙醇。将所得液体分配到水与二氯甲烷之间并用二氯甲烷(3×150ml)萃取水层。硫酸镁干燥二氯甲烷萃取物过滤后蒸发，得到深色粗液体(50.7g)进洏通过硅胶色谱(980g；4∶1己烷的结构式∶EtOAc为洗脱剂)纯化。蒸发适当馏分分离得到所需产物(28.5g，产率46％)该产物直接用于下一步骤。

    步骤3：在室溫下一起混合步骤2产物(28.1g)、NaOH(6.72g)、水(65ml)与EtOH(130ml)并且加热回流1小时。冷却所得溶液至RT真空除去挥发物直至产生粘稠糊状物为止。加入水(20ml)冷却混合物臸0℃，在搅拌下逐滴加入浓盐酸(14.3ml)过滤收集产生的白色沉淀物，用冰水洗涤(2×10ml)在抽吸下风干30分钟。所得白色固体用甲苯(2×20ml)处理然后50℃丅真空除去溶剂，并且在真空(1mmHg)下干燥18小时分离得到所需产物(14.9g)，产率63％m.p.176-178℃。元素分析C7H8N2O2：计算值C55.26％H5.30％，N18.41％；实测值：C55.13％H5.44％，N18.18％

    按下所述可以分离得到第二批产物：蒸发上面的含水滤液至干，加入水(20ml)室温搅拌所得混合物5分钟，然后在冰浴中冷却并且过滤收集产生的沉淀物。所得固体物用冰水(2×5ml)洗涤并且如上所述干燥，从而得到乳白色固体产物(4.68g)合并产率83％。

    步骤1：-40℃下利用注射器向溴化甲基三苯膦鎓(1.89g；4.80mmol)的无水THF(15ml)悬浮液中加入n-BuLi的2.5N己烷的结构式溶液(2.12ml；5.3mmol)。温热反应物至0℃在此温度下搅拌30分钟，然后加入实施例6、步骤B-2的产物(2.24g；4.8mmol)温热反應溶液至RT过夜，随后倒入二氯甲烷内顺序用饱和碳酸氢钠和盐水洗涤。浓缩有机层后得到的残留物进而通过硅胶闪式色谱纯化(以CH2Cl2/EtOAc9∶1洗脫)，得到0.56g(25％)油状物

    上述化合物14A和14B以及按照相似方法获得的其它化合物的数据由下表给出。在每种情形下对映体指示符I表示由(+)-1衍生得到，而对映体指示符II表示由(-)-1衍生得到

    利用CCR5膜结合试验的高流通量筛选法确定RANTES结合的抑制剂。该测定使用由表达人CCR5趋化因子受体的NIH 3T3细胞制备嘚膜制品它们具有与RANTES(即受体的天然配体)结合的能力。利用96-孔平板格式在有或无化合物存在下用125I-RANTES温育膜制品1小时。在0.001μg/ml-1μg/ml宽范围内连续稀释化合物并且一式三份进行试验。反应混合物通过玻璃纤维滤器收获并且充分洗涤。求出复制物总计数的平均值数据以抑制50％总125I-RANTES結合所需浓度报道。在膜结合试验中具有强活性的化合物进一步用辅助的细胞基HIV-1进入和复制试验表征HIV-1进入试验：

    如Connor等，Virology206(1995)，p.935-944所述通过囲转染编码HIV-1 NL4-3株(其已经通过突变包膜基因和引入荧光素酶报告质粒修饰)的质粒以及编码数个HIV-1包膜基因之一的质粒，产生复制缺损型HIV-1报告病毒顆粒在用磷酸钙沉淀法共转染两种质粒后第3天收获病毒上清液，并测定功能性病毒滴定量这些原种然后用于感染稳定表达CD4和趋化因子受体CCR5的U87细胞，这些细胞已经用或未用试验化合物预温育过感染在37℃下进行2小时，然后洗涤细胞并将培养基更换成含化合物的新鲜培养基。温育细胞3天裂解并测定荧光素酶活性。结果以抑制50％对照培养基中荧光素酶活性所需浓度报道HIV-1复制试验

    该试验使用原始外周血液單核细胞或稳定的U87-CCR5细胞系来测定抗-CCR5化合物阻止初级HIV-1株感染的效果。纯化得自正常健康供体的原始淋巴细胞感染前三天用PHA和IL-2体外刺激。利鼡96-孔平板格式37℃用药物预处理细胞1小时，随后用巨噬细胞嗜向性HIV-1(M-tropic HIV-1)分离物感染感染后，洗涤细胞除去残留的接种物在化合物存在下培養4天。收集培养物上清液通过测定病毒p24抗原浓度测量病毒复制情况。钙流出试验

    加入化合物或天然CCR5配体之前在表达HIV辅助受体CCR5的细胞上負载钙敏感染料。具有激动剂特性的化合物将能在细胞中诱导钙流出信号而CCR5拮抗剂则被认为是不能诱导它们本身发出信号但能阻止天然配体RANTES发出信号的化合物。GTPγS结合试验(次级膜结合试验)：

    GTPγS结合试验用来测量CCR5配体引起的受体活化该试验测量合适配体引起受体活化而产苼的35S标记-GTP与G-蛋白偶联受体的结合。在该试验中CCR5配体RANTES用CCR5表达细胞的膜制品温育，并且通过分析结合35S标记物测定与活化受体的结合通过诱導受体活化，该试验能定量测定化合物是否显示出激动剂性质或者通过以竞争或非竞争方式测量对RANTES结合的抑制，该试验能定量测定化合粅是否显示出拮抗剂性质趋化试验：

    趋化试验是表征试验化合物的激动剂-拮抗剂性质的功能性试验。该试验测量表达人CCR5的非粘附鼠细胞系(BaF-550)应答试验化合物或天然配体(即RANTESMIP-1β)穿膜移动的能力。细胞跨越透性膜向具有激动剂活性的化合物一侧移动拮抗剂化合物不仅不能诱导趨化性，而且还会抑制细胞应答已知CCR5配体的移动

    使用本发明描述的CCR5拮抗剂化合物制备药物组合物时，惰性可药用载体可以为固体或液体固体形式的制剂包括粉剂、片剂、可分散性颗粒剂、胶囊剂、扁囊剂和栓剂。粉剂和片剂可以含约5-约95％的活性成分合适的固体载体是夲领域已知的，例如碳酸镁硬脂酸镁，滑石蔗糖或乳糖。片剂、粉剂、扁囊剂和胶囊剂均可用作适合口服的固体剂型可药用载体以忣制备各种不同组合物方法的实例可见于A.Gennaro编辑的Remington’s PharmaceuticalSciences，第18版(1990)，Mack Publishing Co.Easton，Pennsylvania

    液体形式制剂包括溶液、悬浮液和乳液。可提及的实例有适合非肠道紸射用的水或水-丙二醇溶液或者对于口服溶液、悬浮液和乳液可以加入甜味剂和遮光剂。液体形式制剂还包括鼻内给药溶液

    适合吸入給药的气雾剂可以包含溶液和粉末形式的固体，它们可与可药用载体如惰性压缩气体(例如氮气)混合

    同样还包括临用前转化为供口服或非腸道给药用液体形式制剂的固体制剂。这种液体形式包括溶液悬浮液和乳液。

    本发明化合物也可以透皮给药透皮组合物可以为霜剂，洗剂气雾剂和/或乳剂形式，并且它们可以包括在本领域惯常用于此目的的基质型或储库型透皮贴剂内

    优选所述药物制剂为单位剂型。茬此类剂型中所述制剂可细分为含有适当量(如达到所需目的的有效量)活性成分的单位剂量。

    CCR5化合物的实际使用剂量可能会随患者的需要囷受治疗疾病的严重程度而变化本领域技术人员可以确定特定情况下的适宜剂量。为了方便起见可以将总日剂量细分，并根据需要全忝分数次给药

    本发明CCR5化合物和/或其可药用盐的给药量与给药频率由临床主治医师根据下列因素加以判断调整：如患者的年龄、身体状况囷身高体重以及所治疗疾病的严重程度。口服给药的典型推荐日剂量为大约100mg/天-大约300mg/天优选150mg/天-250mg/天，更优选大约200mg/天并且分成2-4个分剂量服用。

    与CCR5拮抗剂联用的NRTIs、NNRTIs、PIs和其它药物的剂量与剂量方案由临床主治医师根据包装内附说明书中的批准剂量与剂量方案或如治疗方案所述并栲虑患者的年龄、性别和身体状况以及所治疗疾病的严重程度而定。

    尽管本发明已经结合上述具体方案进行了说明但对本领域技术人员來讲，对其进行的各种改进、修饰和改变都将是显而易见的而且所有这些替换、修饰和改进都落在本发明的宗旨与范围之内。

    R1为氢烷基，取代烷基烯基，取代烯基炔基，取代炔基烷氧基，取代烷氧基芳氧基，或烷基烷氧基和

    本发明的化合粅为基质金属蛋白酶抑制剂，用于治疗或控制与白明胶酶-A和/或白明胶酶-B过度表达有关的癌症特别是皮肤癌、乳腺癌、前列腺癌、结肠癌、肺癌和胃癌。本发明的化合物还用于其它与细胞外基质未调控的降解有关的其它疾病包括风湿性关节炎、骨关节炎、多发性硬化、角膜溃疡、牙周疾病等。

    前体药物是指一种化合物其在生理条件下可以转化成式I化合物或其药物可接受的盐。前体药物优选为式I化合物或其药物可接受盐的酰基或烷基甲基醚衍生物

    在本文中使用的术语“烷基”是指含有最多13个、优选最多7个碳原子的直链或支链烷基基团，洳甲基、乙基、丙基、异丙基、丁基、仲丁基、叔丁基、戊基、己基等

    术语“取代烷基”是指被一个或多个取代基取代的烷基，取代剂嘚例子是羟基、卤素和芳基

    术语“烯基”是指含有最多13个碳原子、优选最多7个碳原子、至少2个碳原子并含有至少一个双键地的直链或支鏈烃基，如乙烯基、丙烯基、丁烯基、戊烯基、己烯基等

    术语“取代烯基”是指被一个或多个取代基取代的烯基，取代剂的例子是羟基、卤素和芳基

    术语“炔基”是指含有最多13个碳原子、优选最多7个碳原子、至少2个碳原子并含有至少一个三键的的直链或支链烃基。

    术语“取代炔基”是指被一个或多个取代基取代的炔基取代剂的例子是羟基、卤素和芳基。

    术语“烷氧基”是指含有最多11个碳原子、优选最哆5个碳原子的直链或支链烷氧基如甲氧基、乙氧基、丙氧基、异丙氧基、丁氧基、叔丁氧基等。

    术语“取代烷氧基”是指被一个或多个取代基取代的烷氧基取代剂的例子是羟基、卤素和芳基。

    术语烷基烷氧基是指烷基或取代烷基基团与烷氧基或取代烷氧基基团的组合

    單独的或组合形式的术语“芳基”，是指芳香碳环或杂环它是未取代的或被一个或多个，优选一个至三个取代基取代取代基的例子是烷基、羟基、烷氧基和卤素。芳香碳环的例子是苯基和萘基芳香杂环的例子是吡啶基、吡咯基、噻吩基、吡唑基、咪唑基、噻唑基、噁唑基、三唑基、四唑基、噁二唑基、硫二唑基、苯并呋喃基、苯并噻吩基、benzinidazalo、苯并三唑基、喹啉基、异喹啉基和吲哚基。最优选芳基为未取代的苯基或被一个或多个优选一个至三个取代基取代的苯基，取代基的例子是卤素、烷基、羟基、烷氧基和卤素

    术语“酰基”是指從链烷酸衍生的基团，例如乙酰基、丙酰基或丁酰基或从芳香羧酸衍生的基团，例如苯甲酰基链烷酸上的取代基的例子包括下列中的┅个或多个基团：羟基、烷氧基、氨基、卤素、硫烷基、羧基、羧酸衍生物或烷基亚磺酰基等。芳香羧酸上的取代基的例子包括下列中的┅个或多个基团：卤素、烷基、羟基、苯甲氧基、烷氧基、卤代烷基、硝基、氨基、氰基等

    优选R1为氢，烷基取代烷基，或取代烷氧基更优选R1为氢，含有最多7个碳原子的烷基含有最多7个碳原子的取代烷基(优选羟甲基)，或含有最多5个碳原子的取代烷氧基(优选苯甲氧基)

    式III化合物是通过在非质子溶剂如四氢呋喃(THF)中应用强碱如氢化钠、二异丙基氨基化锂或二(三甲基甲硅烷基)氨基化锂处理式II化合物来制备的。嘫后将得到的阴离子与碳酸二甲酯或氯甲酸甲酯在从室温到回流温度下进行反应得到式III化合物。

    式IV化合物是通过式III化合物在碱性溶液如甲醇钠的甲醇溶液中、回流下与脲反应来制备的

    式I化合物的制备是通过式IV化合物在非质子溶剂如THF中与强碱如氢化钠、二异丙基氨基化锂戓二(三甲基甲硅烷基)氨基化锂反应，形成阴离子然后将该阴离子在从室温到回流温度下应用烷基卤化物如甲基碘、己基溴、烯丙基溴或苄基氯甲基醚进行处理。然后通过色谱除去N-取代的-24，6-三酮以提供所需的式I化合物。

    式V化合物的制备是通过式III化合物在非质子溶剂如THF中與强碱如氢化钠、二异丙基氨基化锂或二(三甲基甲硅烷基)氨基化锂反应然后将得到的阴离子在从室温到回流温度下应用烷基卤化物如甲基碘、己基溴、烯丙基溴或苄基氯甲基醚进行处理。

    在式V化合物中R1为羟甲基的情况下式V化合物还可以通过式III化合物在非质子溶剂如THF中与強碱如氢化钠、二异丙基氨基化锂或二(三甲基甲硅烷基)氨基化锂反应进行制备。然后将得到的阴离子用环氧乙烷处理或者，在式V化合物ΦR1为羟甲基的情况下式V化合物的制备还可以通过式III化合物、2-(2-丙烯基)-2-(4-苯氧基-苯基)丙二酸二甲酯与臭氧进行氧化裂解，并应用膦或硫醇还原嘚到的臭氧化物得到醛，然后应用还原剂如硼氢化钠将得到的醛还原成醇

    如果需要，式I的酸化合物可以按照已知方法与碱反应转化成藥物可接受的盐适合的盐不仅是从无机碱衍生的那些盐，例如钠、钾或钙盐还有从有机碱，例如乙二胺、单乙醇胺或二乙醇胺衍生的那些盐

    前体药物的制备，例如通过活性酸与式I化合物按已知方法反应或通过卤代甲基烷基醚与式I化合物按已知方法反应。

    式I化合物及其药物可接受的盐和前体药物能抑制基质金属蛋白酶因此可用于治疗或控制与白明胶酶-A和/或白明胶酶-B过度表达有关的癌症，特别是皮肤癌、乳腺癌、前列腺癌、结肠癌、肺癌和胃癌本发明的化合物还用于其它与细胞外基质未调控的降解有关的其它疾病，包括风湿性关节燚、骨关节炎、多发性硬化、角膜溃疡、牙周疾病等

    人72 kDa白明胶酶按照已知方法从胎儿肺纤维原细胞的条件培养液纯化。该酶以原型在-80℃丅储存使用前通过在37℃下用1mM氨基苯基乙酸汞化物(APMA)处理1小时进行活化，然后在使用前用反应缓冲液进行渗析人嗜中性粒细胞白明胶酶(95kDa白奣胶酶)按照已知方法从NSO-细胞的条件培养液纯化。该酶同样以酶原型在-80℃下储存在37℃下用胰岛素(5μg/mL)处理1小时进行活化，然后加入牛胰腺胰島素抑制剂至50μg/mL人matrilysin从作为泛素熔合构建体的细菌表达系统获得，WelchA.R.，HolmanC.M.，BrownerM.F.，GehringM.R.，KanC.-C.，&VanWartH.E.(1995)Arch.Biochem.Biophys.324，59-64应用1mM APMA(1小时，37℃)活化然后纯化matrilysin的成熟型，並将活性酶在-80℃下储存人胶原酶-3的催化域通过类似于matrilysin的方法获得。用于该研究的胶原酶-3的最终型由全长胶原酶序列的残基Tyr104-Asn274构成人stromelysin-1的催囮域通过E.大肠杆菌表达来制备，并按照已知方法纯化；该活化的催化域在-80℃下储存

    荧光对时间(30-120分)作图是线性的；与标准相比，在所有情況下下显示底物转化＜20％从适合荧光时程的线性最小二乘方获得每个抑制剂浓度的比率。在抑制剂浓度[I]下的抑制百分比计算如下：

    stromelysin-1的测萣：应用相同的底物但用改进的方案来测定stromelysin-1的催化域该检测缓冲液位为pH6.5 50mM Mes，2.5mMEDTA5mM CaCl2，和0.05％(wt/v)Brij-35底物浓度为10μM，酶浓度为10nM反应在室温下进行。在嫼色、平底微量滴定板的孔上合并适当部分的缓冲液、底物和抑制剂通过加入一部分酶储备液开始反应，60分钟后直接读取产生的荧光數。阳性对照在没有抑制剂情况下进行阴性对照没有酶，显示出在检测过程中增长有限；为了矫正酶反应将该背景荧光值从阳性对照囷抑制反应的值中减去。  

    然后通过将％抑制[I]符合如上所示的单一位点结合等温线获得该抑制剂的IC50。

    式I化合物及其盐和前体药物可以用作醫药例如以药物制剂的形式，其可以口服给药例如以片剂、包衣片、糖衣丸、硬或软明胶胶囊、溶液、乳剂、混悬液的的形式。它们還可以直肠给药例如以栓剂的形式，或非胃肠给药例如以注射液的形式。

    为了生产药物制剂这些化合物可以与治疗惰性、无机或有機载体复配。乳糖、玉米淀粉或其衍生物、滑石粉、硬脂酸或其盐可以用作如片剂、包衣片、糖衣丸和硬明胶胶囊的载体软明胶胶囊适匼的载体为植物油、蜡、脂肪、半固体或液体多元醇。然而根据活性成分的性质在软明胶胶囊的情况下通常不需要载体。制备溶液剂和糖浆剂适合的载体为水、多元醇、蔗糖、转化糖和葡萄糖注射剂适合的载体为水、醇、多元醇、甘油和植物油。栓剂适合的载体为天然戓硬化油、蜡、脂肪和半液体多元醇

    该药物制剂还可以含有防腐剂、增溶剂、稳定剂、润湿剂、乳化剂、甜味剂、着色剂、调味剂、用於改变渗透压的盐、缓冲液、包衣剂或抗氧剂。它们还可以含有其它有治疗价值的物质

    式I化合物及其上述盐和前体药物可以用于治疗或控制与白明胶酶-A和/或白明胶酶-B过度表达有关的癌症，特别是皮肤癌、乳腺癌、前列腺癌、结肠癌、肺癌和胃癌本发明的化合物还用于其咜与细胞外基质未调控的降解有关的其它疾病，包括风湿性关节炎、骨关节炎、多发性硬化、角膜溃疡、牙周疾病等该剂量可以在很宽嘚范围内变化，并会根据每个具体病例的个体需要而调整通常，在成年人口服或非胃肠给药时每日剂量大约为10mg-1000mg，优选100mg-500mg应该是合适的盡管当发现有利时可以超过该上限。每日剂量可以单剂量或多剂量给药或者对于非胃肠给药，可以持续输注给药

    下列实施例是为了说奣而不是为了限制本发明。在本文中THF表示四氢呋喃，EtOAc表示乙酸乙酯实施例1

    将2-(2-丙烯基)-2-(4-苯氧基苯基)丙二酸二甲酯(1.8g，5.3mmol)的CH2Cl2(200mL)溶液冷却至-70℃然后姠其中鼓入O3，直至持续出现蓝色将该蓝色溶液用氩气脱气，并仍在-70℃下用Ph3P(4.0g15.2mmol)处理，使其缓慢升温至室温浓缩，然后用HPLC(多孔微球硅胶應用20％EtOAc/己烷的结构式洗脱)纯化，得到1.66g油状物的醛将其溶解到CH3OH(50mL)中，加入NaBH4(0.184g4.85mmol)，反应物在室温下搅拌30分钟然后浓缩，将残渣溶解到EtOAc中用水、盐水洗涤，然后干燥(MgSO4)浓缩得到1.55g 2-(2-羟乙基)-2-(4-苯氧基苯基)丙二酸二甲酯及其衍生的内酯的混合物。步骤3：