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男性不育患者精液分析和精子形态学分析
作者：蔡柳洪 张滨 陶欣 王晓文 黄世宗&&&&作者单位：中山大学附属第三医院 不育与性医学科，广东 广州 510630
目的：回顾性分析助孕门诊男性不育患者精液分析与精子形态学检测，为防止临床对女方过度治疗提供依据。方法：选择日～日在本院助孕门诊就诊的不孕夫妇，男方至少行精液分析2次，在第一次精液分析即进行精子形态学分析。精液分析采用清华同方精液分析系统，精子形态学分析采用改良巴氏法染色，应用Microsoft Excel进行分析。结果：进行精液分析共1206人次，进行精子形态学分析共517人次。精子密度0-180*109/L，平均55.3±32.2*109/L，75.1%的病例精液密度为20—100*109/L，仅13.3 %为少精症，无精症占1.5%；a级精子为14.0%±9.9%，b级精子为10.6%±7.8%， a级+b级>50%者仅占0.6%，超过半数的为30%-50%（51.1%），精子形态学分析，仅有20.5%病例是正常的（>14%）。结论：除无精症显然与不育相关外，精液密度可能不是评估男性不育的一个很好的指标，精子活动力低下或精子畸形率过高更能预示不孕因素，精液分析和精子形态学分析可以作为助孕门诊男性不育的首要筛查手段，防止对女方的过度治疗。
【关键词】& 精液分析；精子形态学分析；不孕
&&& Semen Analysis and Sperm Morphology Analysis of Infertile Males
&&& CAI Liuhong, ZHANG Bin, TAO Xin et al
&&& (Department of Infertility and Sexual Medicine, Third Affiliated Hospital of Sun Yat-sen University, Guangzhou 510630, China)
&&& Abstract: Objective& Retrospective analysis of semen and sperm morphology analysis, to prevent excessive clinical treatment for infertile couples.& Methods& Chose the infertile couples of out-patient department from Oct 1st 2007 to February 29th 2008. All males underwent semen analysis for at least 2 times and sperm morphology analysis for 1 time. Microsoft Excel was used for statistic analysis.& Results Totally 1206 cases of semen analysis and 483 cases of sperm morphology were analyzed. Sperm concentration was 0-180 *109/L, with an average of 55.3&32.2*109/L, 75.1% were within 20-100*109/L, only 13.3% were oligozoospermia, and azoospermia accounted for 1.5%; 51.1% of the cases had 30% -50% rapid progressive sperms (a grade+b grade), and only 0.6% were normal according to the WHO standard (a grade+b grade> 50%). Only 20.5% of the cases had > 14% normal sperm morphology.& Conclusion& Except azoospermia which were obviously related to infertility, sperm concentration may not be a good indicator for assessment of infertility, but sperm activity and morphology may predict the infertility factors. Analysis of semen and sperm morphology should be used as the first screening method for out-patient infertile couples to prevent excessive treatment for the women.
&&& Key words:& sperm infertility
&&& 由于理论上只需要有一条精子就足够使卵子受精，因此对男性的生育能力评估一直颇多争议，精液分析和精子形态学分析是目前评价男性生育力的最主要检查手段。
&&& 对象和方法
&&& 1、病例选择：选择日～日在本院助孕门诊就诊的不孕症夫妇中的男方。不孕症诊断标准：同居一年或以上，性生活正常，没有采取避孕措施而妻子没有受孕。
&&& 2、排除标准：除外女方因素：
&&& 1）女方进行以下检查：白带常规、宫颈支原体和衣原体；性激素六项；输卵管通液或造影；性交后试验；血清抗体（抗心磷脂抗体、抗卵巢抗体、抗子宫内膜抗体、抗精子抗体）；B超监测排卵至少两个周期。
&&& 2）排除女方因素导致的不孕：排卵障碍、输卵管或盆腔因素、免疫性不孕、子宫内膜异位症等。
&&& 3、男方检查方法：行精液分析2次（间隔7天以上），在第一次精液分析即进行精子形态学分析。对怀疑无精子者进行离心沉淀找精子，不计入精子形态学分析统计。
&&& 1）精液分析：采用清华同方精液分析系统。患者禁欲3～4天，检查当日在取精室手淫取精，全部精液收集于一敞口干净取痰杯内马上送检。精液放置于37℃恒温热台，每5分钟检查一次液化程度，一旦液化马上检查，在5分钟内完成检测。>60分钟不液化者则等待至120分钟即使仍然不液化也进行检查。精子活动参数按WHO对人类精子的分级标准分为a级（快速前向运动）、b级（慢速或呆滞前向运动）、c级（非前向运动）、d级（极慢或不动）四级。
&&& 2）精子形态学分析：进行精液分析的同时取精液5～20ul在载玻片上采取&拉薄&技术直接涂片，烘干后染色。采用改良巴氏法，染液包括苏木素(Harris)、橘黄G和EA50（珠海贝索生物技术有限公司），染色方法按照试剂说明进行，在目镜100&、物镜10&条件下观察。只有带有尾部的可辨认精子，才考虑进行不同形态精子计数；未成熟精子细胞包括圆形精子细胞阶段，不能作为精子进行计数。精子形态类型标准依据为《世界卫生组织人类精液及精子一宫颈粘液相互作用实验室检验手册》（第四版），按照Tygerberg标准进行精子形态学分析。
&&& （3）质控方法：室内质控采用质控珠（QC-BeadsTM，Bioscreen Inc）进行每天密度质控，所有检测人员每周进行随机标本的质控（密度和活动力质控）。
&&& （4）统计分析：应用Microsoft Excel进行分析。
&&& （1）进行精液分析共1206人次，进行精子形态学分析共517人次。
&&& （2）一般资料：精液分析病人年龄21岁～45岁，平均31.2&4.5 岁；精液量0.8～9.1ml，平均2.85&1.4 ml；液化时间平均25&7.6分钟，299例液化时间>60分钟（占24.8%）；无精症18例（占1.5%）。
&&& (3）精液密度和精子活动力检查：精子密度0-180*109/L，平均55.3&32.2*109/L，a级为14.0%&9.9%，b级为10.6%&7.8%。见表1、表2。
&&& （4）精子形态学分析结果。见表3。
&&& 2001年，陆仁康等在对我国1万对不孕夫妇进行调查研究发现，男性因素不孕已达55%[1]。如何评价男性生育力是临床面临的重要问题之一。对精子穿透能力、精子顶体反应或精子DNA完整性的检测也许更有价值[2-4]，但是，迄今为止，大多数的研究都无法确切证实精子的某个特性决定男性的生育力，甚至很多结果是对立的[5]。传统上，对男性不育的诊断依赖于精液分析和精浆生化的检查，而精子密度、活力和形态学分析则提供了最重要的诊断信息。
&&& 已有的文献对男性精液分析的研究往往或局限于正常生育男性 [6-8]。由于现有的生殖中心一般由妇产科组建，因此在助孕门诊，往往针对女性进行大量的检查与治疗，这些检查一般是有侵入性（如输卵管通畅度检查和子宫内膜检查等）而且耗时而昂贵（如监测排卵每个月经周期至少要进行3～4次）。本文回顾性分析了本院助孕门诊男性因素不孕夫妇的精液分析和精子形态学分析，希望对防止临床对女性过度检查与治疗均有帮助。
&&& 目前常用的对精液分析结果的判断依据1999年第四版WHO《人类精液及精液－宫颈粘液相互作用检验手册》[9] ，WHO的正常标准是一次射精量>2 ml，pH>7.2，密度>20*106/ml，活率>75%，前向运动精子（a级+b级）>50%，其中快速运动（a级）>25%。Tygerberg标准将轻微畸形的精子都判为异常，并认为正常形态精子>14%即为正常[10]。在我们助孕门诊，精液分析按照WHO的标准进行，精子形态学分析则执行比较严格的Tygerberg标准。
&&& 本文中的精液分析，精液量2.85&1.4 ml，液化时间25&7.6分钟，精子密度55.3&32.2*109/L，均接近WHO标准。密度检测显示，75.1%的病例精液密度为20-100*109/L，仅13.3%为少精症，无精症占1.5%。这说明除了无精症显然与不孕相关外，精液密度可能不是评估不孕原因的一个很好的指标。但前向运动精子a级为14.0%&9.9%，b级为10.6%&7.8%则远低于正常标准，a级+b级>50%者仅占0.6%，将近半数为30%~50%（51.1%），其余的<30%。这说明精子活动力低下更能预示不孕的发生。按照Tygerberg标准进行精子形态学分析，仅有20.5%是正常的，也证明精子形态学异常可能与不孕相关。
&&& 有研究表明，精子的活动力与年龄成负相关。Sloter[11]针对90例不吸烟、无生育问题、年龄介乎22-80岁的男性进行精液分析发现，精子活动力下降0.8%/年，快速前进精子下降0.4%/年。在一次射精后，绝大多数的精子都将死亡，只有极少数强壮的精子能够到达输卵管壶腹部与卵子结合，所以甚至有男性射出精液中活动精子数仅有0.05&106的年轻夫妇也自然受孕的病例报道[12-13]。而且事实证明，畸形精子很难结合到卵透明带上，当精液中正常形态精子百分率<14%时，精子体外受精率显著减少[14]。
&&& 相对于女性的输卵管通畅度检查、监测排卵等，男性精液分析和精子形态学分析更为简便易行且病人依从性也高，其精子活力分析和精子形态学分析将对不孕因素的初步评估有很大帮助，因此应该作为助孕门诊不孕夫妇的首要筛查手段。
【参考文献】
& [1]陆仁康,谢雁鸿.应重视和加强男性生殖健康的研究[J].中国男科学杂志,):3-6.
[2]Spano M, Bonde JP, Hjollund HI, et al. Sperm chromatin damage impairs human fertility. Fertil Steril.):43-50.
[3]Weber RF, Dohle GR, Romijn JC. Clinical laboratory evaluation of male subfertility. Adv Clin Chem.-64.
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[5]Gomendio M, Malo AF, Garde J, et al. Male Fertility Sperm traits and male fertility in natural populations. Reproduction, -29.
[6]李光庭,袁汉尧,黄汉周.200例男性不育症患者精子质量及形态学分析[J]. 中国热带医学,):.
[7]蒋敏,陈新敏,岳焕勋,等. 精子形态学分析在男性不育症诊断中的应用[J]. 中国优生与遗传杂志,):106-107.
[8]Crazzolara S, Wunder D, Nageli E, et al. Semen parameters in a fertile Swiss population. Swiss Med Wkly, 6-172.
[9]世界卫生组织编. 谷翊群,陈振文,于和鸣,等译. 人类精液及精子—宫颈粘液相互作用实验室检验手册[M]. 第4版. 北京:人民卫生出版社, 2001.
[10]Menkveld R, Stander FSH, Kotze T, et al. The evaluation of morphological characteristics of human spermatozoa according to stricter criteria. Hum Reprod.):586-592.
[11]Sloter E, Schmid TE,
Marchetti F, et al. Quantitative effects of male age on sperm motion. Hum Reprod.):.
[12]赵志明，黄宇烽，商学军，等．A级精子大于25％的严重少精子症患者妻子受孕2例报道[J]．中华男科学杂志，2007，l3（3）：271-272
[13]Almagor M，Dan-Goor M，HovavY，et a1．Spontaneous pregnancies in severe oligoasthenozoospermia．Hum Reprod，）：.
[14]Mortimer D, Menkveld R. Sperm morphology assessment--historical perspectives and current opinions. J Androl, ):192-205.
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7% a+b大于54.1 d级34外观-灰白
液化状态-完全液化
液化时间-30分钟
精液量-2.4
禁欲5天 a级20？是弱精么.2
精子形态染色报告（巴氏染色）显示正常形态精子比例4%
头部畸形94
j颈部和中段畸形1%尾部畸形1%精子膜表面抗体为弱阳性.4%
b级33。请问这些都能看出来什么呢.8%
c级11.5毫升
稀释比例-1比0
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精浆，对女性来说皆属特异性抗原，男女都有可能产生，生成相应的抗体抗精子抗体弱阳性时我们要注意了，阻碍精子与卵子结合，由于抗精子的抗体是一个比较复杂的病理产生的产物。建议你到医院检查治疗，当精子接触到血液后，而致不孕。祝你早日康复，男女就有可能产生免疫反应。这属于精子免疫性不育，男性的精子
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量会浓一些。还有就是不要秒射，一样搞大别人肚子，平躺半小时作于在起来（最好就是睡觉前，憋久一点再射，你工作勤奋些就是了，OOXX，这样由于你比较兴奋。其次就是女性内射之后不要马上站起来没事的，见过比你低的
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