(1/3)【紧急求助】 救命啊，各位为好心人点赞，谁能帮帮我？？为什么要扣8000元啊？ 小弟做快递的，车子被江...

来源：蜘蛛抓取(WebSpider) 时间：2012-04-26 04:31 标签： 好心人
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【求助/交流】SOD，CAT测定问题，有谁能帮帮我？急！！！
我用NBT光还原法测SOD时，对照管（就是照光不加酶液的那一管，不是空白调零管）的吸光度总是比样品测定管的低，这是怎么回事啊？按理论上来说应该是样品管的加了酶液，抑制了光还原，吸光度应该比对照管小，可是我一直比对照管大，有谁能帮帮我吗？分光光度计刚买的应该没问题的，因为测POD时挺正常的。
测CAT时，每隔一分钟读一次数，但是读数时吸光度总是不稳定，跳来跳去的，读数那一秒从2.8跳到2.2，一会儿又跳到2.8，想等稳定了读数都不行，这是怎么回事啊？这样的话我测下来的值会很不准确的，我该怎么办？有谁能帮帮我？此外，CAT活性我共测了4分钟，计算活性时我应该用第几分钟计算呢？
【我用NBT光还原法测SOD时，对照管（就是照光不加酶液的那一管，不是空白调零管）的吸光度总是比样品测定管的低，这是怎么回事啊？按理论上来说应该是样品管的加了酶液，抑制了光还原，吸光度应该比对照管小，可是我一直比对照管大，有谁能帮帮我吗？分光光度计刚买的应该没问题的，因为测POD时挺正常的。】
NBT法原理是这样，但实际操作时重复性很不好。
照光时，位置和放置角度不同很影响吸光值大小。例如你的某个对照是放在试管架1号位置，由于紧邻试管架的一壁，光吸收较中间位置5号就低很多。
另外不同玻璃管的质量（例如透光率不同，粗细有别）都影响最终的吸光值。
强烈建议你购买SOD试剂盒，也就是300-400块，比较准，推荐南京建成，自己联系当地的经销商吧。
【测CAT时，每隔一分钟读一次数，但是读数时吸光度总是不稳定，跳来跳去的，读数那一秒从2.8跳到2.2，一会儿又跳到2.8，想等稳定了读数都不行，这是怎么回事啊？这样的话我测下来的值会很不准确的，我该怎么办？有谁能帮帮我？此外，CAT活性我共测了4分钟，计算活性时我应该用第几分钟计算呢？】
1。首先，每隔一分钟读一次数，这是极端错误的。
因为，H2O2底物在很高浓度时（例如500mM）都不能饱和CAT，CAT测定的酶活（0-90sec内）随着时间的延长，其H2O2的吸光值变化速率是越来越低的！也就是说，照你的测定方法，CAT酶活会越来越低，没有稳定值的。
2。在10-50mM H2O2时，在反应最初的30sec内，遵循一级反应动力学，其酶活可用反应的速率常数k来表示，而不能用吸光值的变化速率！
k=ln（/) / (t2-t1)& && &= ln（/) / (δt)& &
（设 δt=t2-t1）
&&为t1 t2时刻底物H2O2的浓度 （mM）
我建议，可采用-- 0--15--30--45 sec时刻的 三次 k值计算，然后取平均。
3。你的吸光值 2.2 2.8 是个极端错误的实验设计。
原因可能是
（1）你的酶液加的太多，在过氧化氢的吸光值 上，反应体系的背景值太高，最好降到1.5 左右或以下，才能准确。
由于CAT是可溶性的酶，事先你的酶液要离心去除干扰吸光值的东西！
（2）没有一个分光光度计能在2.2-2.8还能准确检测。你本科都干嘛去了？这都不懂？！！
如果关于测酶活有什么疑问，请查找相关的外文参考资料-活测定方法或补充本科相关知识。
:mad::mad::mad: CAT测定，2.2怎么可能是吸光度~~？还有刚开始的酶促反应本身很快，所以一直变化也挺快的，不能等稳定了再读哈，加油~ Originally posted by HarveyWang at
【我用NBT光还原法测SOD时，对照管（就是照光不加酶液的那一管，不是空白调零管）的吸光度总是比样品测定管的低，这是怎么回事啊？按理论上来说应该是样品管的加了酶液，抑制了光还原，吸光度应该比对照管小，可是 ... 请问S1和S2是多少是怎么知道的呢？需要用什么仪器测量 检测SOD活性，已购买碧云天试剂盒，请问具体的操作注意事项有哪些，是要用酶标仪还是可以直接用分光光度计 : Originally posted by HarveyWang at
【我用NBT光还原法测SOD时，对照管（就是照光不加酶液的那一管，不是空白调零管）的吸光度总是比样品测定管的低，这是怎么回事啊？按理论上来说应该是样品管的加了酶液，抑制了光还原，吸光度应该比对照管小，可是我 ... 你好，我目前正在做有关酶活的一些实验。。。能加你QQ号咨询一下吗？
我的QQ号： 我来小木虫的频率比上QQ还多。:D : Originally posted by summun_123 at
你好，我目前正在做有关酶活的一些实验。。。能加你QQ号咨询一下吗？
我的QQ号：... 我来小木虫的频率比上QQ还多。:D:D : Originally posted by HarveyWang at
我来小木虫的频率比上QQ还多。:D:D... 好的。小木虫交流也比较方便
我是准备用酶标仪测POD/cat/sod(其中pod是采用愈创木酚法，cat是紫外过氧化氢，sod打算买试剂盒)
1.我没有用过酶标仪，听说分光光度计的OD值要相应缩小（因为酶标仪精度大？），但是我觉得是不是只要稀释的就可以不用改变OD值？
2.其中pod、cat书上是计算每分钟OD值，但是看小木虫，很多人都是说按30s、40s计算。这个时间如何定？
3.如果用试剂盒的话，稀释之后会不会有影响？因为试剂盒上面的标曲和公式都是给好的？
4.因为样品量有近200个（不同实验），所以不想用分光光度计，但是pod，cat都是要水浴一下在测量，那么在水浴之后加96空板之间的这个过程会不会影响酶活的？
因为我本科专业是地理。。。。:sweat::sweat::sweat:这个。。。因为一些原因现在做植物生理生态。。。。所以实验经验非常少，希望你不吝赐教，不胜感激 : Originally posted by summun_123 at
好的。小木虫交流也比较方便
我是准备用酶标仪测POD/cat/sod(其中pod是采用愈创木酚法，cat是紫外过氧化氢，sod打算买试剂盒)
1.我没有用过酶标仪，听说分光光度计的OD值要相应缩小（因为酶标仪精度大？）， ... 你所缺的专业知识太多。
1. 连分光光度计的原理都不清楚。
2. 连测酶活和计算酶活的专业知识都不具备。
3. 标准曲线和公式都是 别人针对自己试验，你需要自己做。
所以，建议你好好补充一下相关的本科课本内容，再开始你的课题吧。 你好 我也测过SOD，出现了很奇怪的情况：有一样试剂：130mmol/L的甲硫氨酸，又一次忘记加它了对照管吸光度最高；但如果按正常的加，对照管反而比样品测定管低！我觉得这个甲硫氨酸在这个反应中是可有可无的，请问是这样的吗？
:cat39: : Originally posted by HarveyWang at
【我用NBT光还原法测SOD时，对照管（就是照光不加酶液的那一管，不是空白调零管）的吸光度总是比样品测定管的低，这是怎么回事啊？按理论上来说应该是样品管的加了酶液，抑制了光还原，吸光度应该比对照管小，可是我 ... :cat39:受教了 你好 我也测过SOD，出现了很奇怪的情况：有一样试剂：130mmol/L的甲硫氨酸，又一次忘记加它了对照管吸光度最高；但如果按正常的加，对照管反而比样品测定管低！我觉得这个甲硫氨酸在这个反应中是可有可无的，请问是这样的吗？
:cat39: : Originally posted by 亚先 at
:cat39:受教了 你好 我也测过SOD，出现了很奇怪的情况：有一样试剂：130mmol/L的甲硫氨酸，又一次忘记加它了对照管吸光度最高；但如果按正常的加，对照管反而比样品测定管低！我觉得这个甲硫氨酸在这个反应中是可有 ... 甲硫氨酸，因为有还原巯基的存在，会严重抑制超氧自由基的产生。
假设对照管也加入，这是实验设计上的错误。
另外，建议你采用SOD试剂盒做。 : Originally posted by HarveyWang at
甲硫氨酸，因为有还原巯基的存在，会严重抑制超氧自由基的产生。
假设对照管也加入，这是实验设计上的错误。
另外，建议你采用SOD试剂盒做。... 谢谢 请问您的意思是对照管不加甲硫氨酸而待测样品管加吗？ : Originally posted by 亚先 at
谢谢 请问您的意思是对照管不加甲硫氨酸而待测样品管加吗？... 哎呀，是劝你用SOD试剂盒。
:D : Originally posted by HarveyWang at
哎呀，是劝你用SOD试剂盒。
:D... 哦哦 您能推荐一下么:D : Originally posted by HarveyWang at
甲硫氨酸，因为有还原巯基的存在，会严重抑制超氧自由基的产生。
假设对照管也加入，这是实验设计上的错误。
另外，建议你采用SOD试剂盒做。... 甲硫氨酸，因为有还原巯基的存在，会严重抑制超氧自由基的产生。
假设对照管也加入，这是实验设计上的错误。
我第一次听到这种说法呢，我查NBT法，所有的方法都会在对照管加甲硫氨酸的，对照管只是不加酶液而已。 : Originally posted by HarveyWang at
【我用NBT光还原法测SOD时，对照管（就是照光不加酶液的那一管，不是空白调零管）的吸光度总是比样品测定管的低，这是怎么回事啊？按理论上来说应该是样品管的加了酶液，抑制了光还原，吸光度应该比对照管小，可是我 ... 请问:用NBT法测SOD酶活性时，照光对照管（未加酶液但照光了）的吸光度不同时间测应该一样么？我两天测出的结果不同，怎么会这样？？？？？---10月13日 01:39紧急求助！谁能帮帮我啊，_我是31号剖宫产的 ，今天刚好满月_宝宝树
紧急求助！谁能帮帮我啊，
我是31号的 ，今天刚好满月了，我手术第4天就开始，现在都满月了还没好，好累哦，挂了一个星期的药水都不行，吃了好多药。现在有谁能帮帮我啊，我感激不尽！（不是感冒）
雪梨+冰糖+川贝（煲20分钟，把水和雪梨喝掉）我也是剖腹产，喝了就好了
剖腹产的好像都咳嗽吧，我也是剖腹的，当时住院的时候也咳嗽，因为做手术，怕粘连。。。直不起腰来。。那就更不好了。。。我吃的是甘草片。。。
找医生看看吧，确定了原因才好办啊，不能乱吃药
真得找医生看看才行，宝宝还吃奶呢，不只是大人受罪，宝宝也会吸收到你用的药的&&
我没有咳呢
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