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交通部要求做好“五一”黄金周道路水路旅客运输
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48小时点击排行【求助/交流】SOD,CAT测定问题,有谁能帮帮我?急!!! - 分子生物 - 小木虫 - 学术 科研 第一站
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【求助/交流】SOD,CAT测定问题,有谁能帮帮我?急!!!
我用NBT光还原法测SOD时,对照管(就是照光不加酶液的那一管,不是空白调零管)的吸光度总是比样品测定管的低,这是怎么回事啊?按理论上来说应该是样品管的加了酶液,抑制了光还原,吸光度应该比对照管小,可是我一直比对照管大,有谁能帮帮我吗?分光光度计刚买的应该没问题的,因为测POD时挺正常的。
测CAT时,每隔一分钟读一次数,但是读数时吸光度总是不稳定,跳来跳去的,读数那一秒从2.8跳到2.2,一会儿又跳到2.8,想等稳定了读数都不行,这是怎么回事啊?这样的话我测下来的值会很不准确的,我该怎么办?有谁能帮帮我?此外,CAT活性我共测了4分钟,计算活性时我应该用第几分钟计算呢?
【我用NBT光还原法测SOD时,对照管(就是照光不加酶液的那一管,不是空白调零管)的吸光度总是比样品测定管的低,这是怎么回事啊?按理论上来说应该是样品管的加了酶液,抑制了光还原,吸光度应该比对照管小,可是我一直比对照管大,有谁能帮帮我吗?分光光度计刚买的应该没问题的,因为测POD时挺正常的。】
NBT法原理是这样,但实际操作时重复性很不好。
照光时,位置和放置角度不同很影响吸光值大小。例如你的某个对照是放在试管架1号位置,由于紧邻试管架的一壁,光吸收较中间位置5号就低很多。
另外不同玻璃管的质量(例如透光率不同,粗细有别)都影响最终的吸光值。
强烈建议你购买SOD试剂盒,也就是300-400块,比较准,推荐南京建成,自己联系当地的经销商吧。
【测CAT时,每隔一分钟读一次数,但是读数时吸光度总是不稳定,跳来跳去的,读数那一秒从2.8跳到2.2,一会儿又跳到2.8,想等稳定了读数都不行,这是怎么回事啊?这样的话我测下来的值会很不准确的,我该怎么办?有谁能帮帮我?此外,CAT活性我共测了4分钟,计算活性时我应该用第几分钟计算呢?】
1。首先,每隔一分钟读一次数,这是极端错误的。
因为,H2O2底物在很高浓度时(例如500mM)都不能饱和CAT,CAT测定的酶活(0-90sec内)随着时间的延长,其H2O2的吸光值变化速率是越来越低的!也就是说,照你的测定方法,CAT酶活会越来越低,没有稳定值的。
2。在10-50mM H2O2时,在反应最初的30sec内,遵循一级反应动力学,其酶活可用反应的速率常数k来表示,而不能用吸光值的变化速率!
k=ln(/) / (t2-t1)& && &= ln(/) / (δt)& &
(设 δt=t2-t1)
&&为t1 t2时刻底物H2O2的浓度 (mM)
我建议,可采用-- 0--15--30--45 sec时刻的 三次 k值计算,然后取平均。
3。你的吸光值 2.2 2.8 是个极端错误的实验设计。
原因可能是
(1)你的酶液加的太多,在过氧化氢的吸光值 上,反应体系的背景值太高,最好降到1.5 左右或以下,才能准确。
由于CAT是可溶性的酶,事先你的酶液要离心去除干扰吸光值的东西!
(2)没有一个分光光度计能在2.2-2.8还能准确检测。你本科都干嘛去了?这都不懂?!!
如果关于测酶活有什么疑问,请查找相关的外文参考资料-活测定方法或补充本科相关知识。
:mad::mad::mad: CAT测定,2.2怎么可能是吸光度~~?还有刚开始的酶促反应本身很快,所以一直变化也挺快的,不能等稳定了再读哈,加油~ Originally posted by HarveyWang at
【我用NBT光还原法测SOD时,对照管(就是照光不加酶液的那一管,不是空白调零管)的吸光度总是比样品测定管的低,这是怎么回事啊?按理论上来说应该是样品管的加了酶液,抑制了光还原,吸光度应该比对照管小,可是 ... 请问S1和S2是多少是怎么知道的呢?需要用什么仪器测量 检测SOD活性,已购买碧云天试剂盒,请问具体的操作注意事项有哪些,是要用酶标仪还是可以直接用分光光度计 : Originally posted by HarveyWang at
【我用NBT光还原法测SOD时,对照管(就是照光不加酶液的那一管,不是空白调零管)的吸光度总是比样品测定管的低,这是怎么回事啊?按理论上来说应该是样品管的加了酶液,抑制了光还原,吸光度应该比对照管小,可是我 ... 你好,我目前正在做有关酶活的一些实验。。。能加你QQ号咨询一下吗?
我的QQ号: 我来小木虫的频率比上QQ还多。:D : Originally posted by summun_123 at
你好,我目前正在做有关酶活的一些实验。。。能加你QQ号咨询一下吗?
我的QQ号:... 我来小木虫的频率比上QQ还多。:D:D : Originally posted by HarveyWang at
我来小木虫的频率比上QQ还多。:D:D... 好的。小木虫交流也比较方便
我是准备用酶标仪测POD/cat/sod(其中pod是采用愈创木酚法,cat是紫外过氧化氢,sod打算买试剂盒)
1.我没有用过酶标仪,听说分光光度计的OD值要相应缩小(因为酶标仪精度大?),但是我觉得是不是只要稀释的就可以不用改变OD值?
2.其中pod、cat书上是计算每分钟OD值,但是看小木虫,很多人都是说按30s、40s计算。这个时间如何定?
3.如果用试剂盒的话,稀释之后会不会有影响?因为试剂盒上面的标曲和公式都是给好的?
4.因为样品量有近200个(不同实验),所以不想用分光光度计,但是pod,cat都是要水浴一下在测量,那么在水浴之后加96空板之间的这个过程会不会影响酶活的?
因为我本科专业是地理。。。。:sweat::sweat::sweat:这个。。。因为一些原因现在做植物生理生态。。。。所以实验经验非常少,希望你不吝赐教,不胜感激 : Originally posted by summun_123 at
好的。小木虫交流也比较方便
我是准备用酶标仪测POD/cat/sod(其中pod是采用愈创木酚法,cat是紫外过氧化氢,sod打算买试剂盒)
1.我没有用过酶标仪,听说分光光度计的OD值要相应缩小(因为酶标仪精度大?), ... 你所缺的专业知识太多。
1. 连分光光度计的原理都不清楚。
2. 连测酶活和计算酶活的专业知识都不具备。
3. 标准曲线和公式都是 别人针对自己试验,你需要自己做。
所以,建议你好好补充一下相关的本科课本内容,再开始你的课题吧。 你好 我也测过SOD,出现了很奇怪的情况:有一样试剂:130mmol/L的甲硫氨酸,又一次忘记加它了对照管吸光度最高;但如果按正常的加,对照管反而比样品测定管低!我觉得这个甲硫氨酸在这个反应中是可有可无的,请问是这样的吗?
:cat39: : Originally posted by HarveyWang at
【我用NBT光还原法测SOD时,对照管(就是照光不加酶液的那一管,不是空白调零管)的吸光度总是比样品测定管的低,这是怎么回事啊?按理论上来说应该是样品管的加了酶液,抑制了光还原,吸光度应该比对照管小,可是我 ... :cat39:受教了 你好 我也测过SOD,出现了很奇怪的情况:有一样试剂:130mmol/L的甲硫氨酸,又一次忘记加它了对照管吸光度最高;但如果按正常的加,对照管反而比样品测定管低!我觉得这个甲硫氨酸在这个反应中是可有可无的,请问是这样的吗?
:cat39: : Originally posted by 亚先 at
:cat39:受教了 你好 我也测过SOD,出现了很奇怪的情况:有一样试剂:130mmol/L的甲硫氨酸,又一次忘记加它了对照管吸光度最高;但如果按正常的加,对照管反而比样品测定管低!我觉得这个甲硫氨酸在这个反应中是可有 ... 甲硫氨酸,因为有还原巯基的存在,会严重抑制超氧自由基的产生。
假设对照管也加入,这是实验设计上的错误。
另外,建议你采用SOD试剂盒做。 : Originally posted by HarveyWang at
甲硫氨酸,因为有还原巯基的存在,会严重抑制超氧自由基的产生。
假设对照管也加入,这是实验设计上的错误。
另外,建议你采用SOD试剂盒做。... 谢谢 请问您的意思是对照管不加甲硫氨酸而待测样品管加吗? : Originally posted by 亚先 at
谢谢 请问您的意思是对照管不加甲硫氨酸而待测样品管加吗?... 哎呀,是劝你用SOD试剂盒。
:D : Originally posted by HarveyWang at
哎呀,是劝你用SOD试剂盒。
:D... 哦哦 您能推荐一下么:D : Originally posted by HarveyWang at
甲硫氨酸,因为有还原巯基的存在,会严重抑制超氧自由基的产生。
假设对照管也加入,这是实验设计上的错误。
另外,建议你采用SOD试剂盒做。... 甲硫氨酸,因为有还原巯基的存在,会严重抑制超氧自由基的产生。
假设对照管也加入,这是实验设计上的错误。
我第一次听到这种说法呢,我查NBT法,所有的方法都会在对照管加甲硫氨酸的,对照管只是不加酶液而已。
var cpro_id = 'u1216994';
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