多肽类药物“截短型GLP-1”检测方法相关关键性问题探索--《中国人民解放军军事医学科学院》2008年硕士论文
多肽类药物“截短型GLP-1”检测方法相关关键性问题探索
【摘要】：
目的:建立可行的sGLP-1的溶解方法和标准化操作;考察标准溶液在室温20℃、4℃冷藏保存、-20℃冰冻保存三个储存条件下的稳定性;建立sGLP-1的HPLC-UV检测方法及可行的高浓度sGLP-1生物基质样本SPE前处理方法;初步探索sGLP-1的HPLC-MS/MS检测方法及HPLC-MS/MS检测时低浓度sGLP-1生物基质样本前处理方法;对生物基质中sGLP-1定量检测方法进行探索性研究。
研究方法:根据sGLP-1的一级结构,分别用纯水、纯乙腈、乙腈-水(50:50,v/v)、1 M醋酸钠、0.01 M NaOH溶液、0.1 M NaOH溶液、高温蒸汽灭菌的PBS缓冲溶液溶解药物。考察不同溶解方法的色谱峰,并最终确定药物溶解方法及标准化操作流程。
sGLP-1标准溶液3份分别放置于室温20℃、4℃、-20℃保存,分别在新配制(0 h)、24 h、48 h、72 h、一周、两周、一个月取样,每个条件下做3个平行样本, HPLC-UV检测方法测定。每项下的样本的峰面积均与每次实验前(0 h)对照品溶液峰面积作比较,进行稳定性研究。
通过优化HPLC-UV检测的初始条件中的流动相梯度,确定HPLC-UV检测最终条件并考察线性。考察超滤和固相萃取两种生物基质样本前处理方法,并对固相萃取的各种淋洗液和洗脱液进行评价,选择最优萃取效果的淋洗液和洗脱液。初步探索HPLC-MS/MS检测方法。依次优化一级质谱参数fragment、离子源参数(即氮气干燥气温度、氮气干燥气流速、雾化气压力、毛细管电压),二级质谱参数collision energy、电子倍增器(EMV)、灵敏度参数MS1 Res及MS2 Res质谱参数。优化色谱条件,包括色谱柱的选择、流速、柱温、甲酸浓度、流动相梯度。采用HPLC-MS/MS检测方法优化结果,连续三天测定浓度分别为1 ng/mL、5 ng/mL、10 ng/mL、50 ng/mL、100 ng/mL、300 ng/mL、500 ng/mL的标准系列溶液,对测试峰面积与浓度进行1/x加权线性回归计算标准曲线及r值。分别采用蛋白沉淀法和固相萃取法对生物基质中sGLP-1定量检测方法进行探索性研究。
结果:使用0.1 M NaOH溶液溶解sGLP-1后,再用0.1 M HCl调pH至5.71,此标准储备液溶解方法的色谱峰最好,将其方法进行标准化验证,制定为sGLP-1标准品溶解的标准化方案。经实验考察此法配置的标准储备液在室温20℃时至少稳定放置72 h、4℃冷藏保存时至少稳定2周、-20℃冰冻保存时至少稳定1个月。
实验建立了sGLP-1的HPLC-UV检测方法,最低检测限2μg/mL。同时建立了可行的高浓度时生物基质样本中sGLP-1的固相萃取前处理方案。
优化sGLP-1的HPLC-MS/MS检测方法的质谱参数和色谱条件,对HPLC-MS/MS检测方法进行初步探索。采用HPLC-MS/MS检测方法优化结果,连续测定三天浓度分别为1 ng/mL、5 ng/mL、10 ng/mL、50 ng/mL、100 ng/mL、300 ng/mL、500 ng/mL的标准系列溶液,结果显示在1~500 ng/mL的浓度范围内线性较好。但试验中期更换同一型号色谱柱后再进行相同试验,结果相差较大,经多次重现后均没有得到相同结果,表明HPLC-MS/MS检测sGLP-1的重现性较差,虽然研究中HPLC-MS/MS检测sGLP-1标准溶液方法重现性不佳,检测sGLP-1生物样本存在明显的内源性干扰,但本研究的探索对后续别人研究提供了参考。
结论:本研究建立了可行的sGLP-1的溶解方法和标准化操作;实验证明sGLP-1标准溶液在室温20℃时至少稳定放置72 h、4℃冷藏保存时至少稳定2周、-20℃冰冻保存时至少稳定1个月,因此在标准溶液样本配置和测定过程中没有稳定性问题的干扰;建立了sGLP-1的HPLC-UV检测方法及可行的高浓度sGLP-1生物基质样本SPE前处理方法;初步探索了sGLP-1的HPLC-MS/MS检测方法及HPLC-MS/MS检测时低浓度sGLP-1生物基质样本前处理方法。
【关键词】：
【学位授予单位】：中国人民解放军军事医学科学院【学位级别】：硕士【学位授予年份】：2008【分类号】：R927【目录】：
ABSTRACT7-9
第一章 前言9-15
1.1 sGLP-1 的研究概况9-11
1.2 生物技术药物药代动力学研究概况11
1.3 生物技术药物分析方法学研究概况11-13
1.4 研究目的、研究内容及研究目标13-15
第二章 试验部分15-31
2.1 仪器与试剂15-16
2.1.1 仪器15-16
2.1.2 试剂16
2.2 试验药物16-17
2.3 溶解性试验17-18
2.4 标准溶液稳定性试验18
2.5 HPLC-UV 检测方法18-21
2.5.1 sGLP-1 标准溶液的HPLC-UV 检测方法18-19
2.5.2 HPLC-UV 检测时生物基质中sGLP-1 的提取分离方法19-21
2.5.2.1 YM-30 与YM-10 超滤器19
2.5.2.2 固相萃取19-21
2.6 HPLC-荧光检测方法21
2.7 HPLC-MS/MS 检测方法21-31
2.7.1 HPLC-MS/MS 检测方法质谱参数的优化21-24
2.7.2 HPLC-MS/MS 检测方法色谱条件的优化24-27
2.7.2.1 色谱柱的选择24-26
2.7.2.2 梯度条件的优化26-27
2.7.3 HPLC-MS/MS 检测生物基质中sGLP-1 的提取分离方法探索27-31
第三章 结果分析31-53
3.1 溶解性试验结果31-32
3.2 标准溶液稳定性试验结果32
3.3 HPLC-UV 检测方法结果32-35
3.3.1 sGLP-1 标准溶液的HPLC-UV 检测方法结果32-33
3.3.2 生物基质中sGLP-1 的提取分离方法结果33-35
3.3.2.1 超滤前处理实验结果33-34
3.3.2.2 固相萃取前处理实验结果34-35
3.4 HPLC-荧光检测方法结果35
3.5 HPLC-MS/MS 检测方法结果35-53
3.5.1 HPLC-MS/MS 检测方法质谱参数的优化结果35-38
3.5.2 HPLC-MS/MS 检测方法色谱条件的优化结果38-47
3.5.3 HPLC-MS/MS 检测sGLP-1 方法线性考察47-50
3.5.4 HPLC-MS/MS 检测方法样本前处理方案探索50-53
3.5.4.1 蛋白沉淀法50-51
3.5.4.2 固相萃取法51-53
第四章 讨论53-58
4.1 标准溶液溶解性试验53
4.2 标准溶液稳定性试验53-54
4.3 HPLC-UV 检测方法54-55
4.3.1 sGLP-1 标准溶液的HPLC-UV 检测方法54
4.3.2 HPLC-UV 检测时生物基质中sGLP-1 的提取分离方法54-55
4.4 HPLC-MS/MS 检测方法学摸索55-58
4.4.1 HPLC-MS/MS 检测方法色谱条件的优化55-56
4.4.2 HPLC-MS/MS 检测生物基质中sGLP-1 的提取分离方法探索56-57
4.4.3 HPLC-MS/MS 检测过程中其他问题的讨论57-58
第五章 结论58-59
参考文献59-61
个人简介61-62
欢迎：、、)
支持CAJ、PDF文件格式
【参考文献】
中国期刊全文数据库
戴舒佳,廖智,刘秀文,梁宋平,汤仲明;[J];中国药理学与毒理学杂志;2004年05期
【共引文献】
中国期刊全文数据库
朱晓霞;孙文种;吴卓娜;甘慧;王延琳;孟志云;;[J];解放军药学学报;2008年03期
向慎思;王清清;贾彦波;王明媚;杨志晖;宋海峰;;[J];军事医学;2011年10期
廖建民;张奉国;常高翔;沈子龙;;[J];同位素;2006年04期
刘德胜;宋敏;窦桂芳;栾海云;王垣芳;张树平;李庆忠;;[J];同位素;2006年04期
韩霭辰;王劲峰;;[J];现代生物医学进展;2013年03期
琚志昌;[J];卫生研究;2002年02期
曾洁萍;余勤;梁茂植;段俊国;郑永利;;[J];现代预防医学;2008年05期
张继恩;史为民;吴聪明;沈建忠;黄青山;;[J];畜牧与兽医;2009年04期
王静;关勇彪;;[J];中国临床药理学与治疗学;2008年11期
常高翔;张奉国;廖建民;沈子龙;;[J];药物生物技术;2006年05期
中国重要会议论文全文数据库
张继恩;吴聪明;孙永学;王赞江;刘明春;孙春娣;张洪雷;郭刚;曾东平;刘宇;向蓉;沈建忠;黄青山;;[A];首届中国兽药大会动物药品学暨中国畜牧兽医学会动物药品学分会2008学术年会论文集[C];2008年
中国博士学位论文全文数据库
刘晓云;[D];华南理工大学;2010年
车津晶;[D];中国人民解放军军事医学科学院;2011年
张友九;[D];苏州大学;2006年
王秀琴;[D];第三军医大学;2008年
邹建伟;[D];苏州大学;2009年
中国硕士学位论文全文数据库
宋佃卫;[D];泰山医学院;2011年
向慎思;[D];中国人民解放军军事医学科学院;2011年
李涛;[D];黑龙江中医药大学;2006年
岑彦艳;[D];第三军医大学;2006年
黄宝斌;[D];中国药品生物制品检定所;2007年
王金霞;[D];重庆大学;2007年
王霜;[D];四川农业大学;2007年
彭薇;[D];重庆医科大学;2007年
董增祥;[D];中国人民解放军军事医学科学院;2008年
李先平;[D];第二军医大学;2008年
【相似文献】
中国期刊全文数据库
谭艳杰;张红;李莹莹;;[J];医学信息(上旬刊);2011年06期
刘放南,盛学勤,陈永明;[J];医学研究生学报;1995年03期
郑宗坤,许贤华,陈志行,谢欣,李芳;[J];中国生化药物杂志;2000年02期
张彩莹,张良;[J];中国生物制品学杂志;2005年04期
霍乃蕊;张浩;韩克光;;[J];中国农学通报;2005年11期
刘涛;金岩;王新文;黄沙;姜玲;温宁;;[J];牙体牙髓牙周病学杂志;2006年03期
郑会丰;曾斌;陈伟珍;林奕丽;廖丽娟;谢明明;;[J];广东医学;2006年08期
叶力;;[J];长春中医药大学学报;2006年04期
吴红荣;魏邦孝;李佳林;齐娟;王正宇;;[J];微生物学免疫学进展;2007年04期
段超;刘娟;;[J];黑龙江医药科学;2008年03期
中国重要会议论文全文数据库
朱昆;李晓光;杨品;金勇;;[A];“中华医学会肾脏病学分会2004年年会”暨“第二届全国中青年肾脏病学术会议”论文汇编[C];2004年
蔡皓;张科卫;刘晓;刘静静;李松林;;[A];2010中药炮制技术、学术交流暨产业发展高峰论坛论文集[C];2010年
陈彤;那广水;张月梅;姚子伟;;[A];第五届全国环境化学大会摘要集[C];2009年
曾碧榕;杨黄浩;何国梅;孙洪贵;陈毓敏;李丽洋;周花;丁马太;林昌健;何旭敏;夏海平;蓝伟光;;[A];第四届中国功能材料及其应用学术会议论文集[C];2001年
马跃平;李国玉;王金辉;;[A];中华中医药学会中药炮制分会2011年学术年会论文集[C];2011年
张兴艳;余鹏;郭歆;冉黎灵;程航;谷振坤;吴蔚;程泽能;;[A];第九届全国药物和化学异物代谢学术会议论文集[C];2009年
钱振宇;毋丹;郑恒;向一;;[A];2009年中国药学大会暨第九届中国药师周论文集[C];2009年
阳晓;杨琼琼;叶任高;彭文兴;郭群英;汪涛;;[A];第六届全国中西医结合肾脏病学术会议论文汇编[C];2000年
倪晓佳;;[A];中华医学会精神病学分会第九次全国学术会议论文集[C];2011年
余鹏;郭歆;冉黎灵;程航;谷振坤;吴蔚;张兴艳;程泽能;;[A];第九届全国药物和化学异物代谢学术会议论文集[C];2009年
中国重要报纸全文数据库
金文;[N];中国质量报;2010年
蒋菡;[N];工人日报;2010年
记者粘新;[N];中国食品报;2009年
王东明;[N];中国税务报;2001年
张炳华;[N];健康报;2000年
山西杏花村汾酒集团有限责任公司王凤仙 刘小宇 韩红 武艳荣 雷艳兰 武爱萍 于小莲;[N];华夏酒报;2009年
谢华林;[N];广东建设报;2004年
龙文;[N];中国现代企业报;2006年
蒋以元;[N];中国水利报;2009年
山西千汇药业有限公司
孙秀爱;[N];山西科技报;2005年
中国博士学位论文全文数据库
吴华;[D];第一军医大学;2004年
杨富国;[D];中南大学;2002年
刘勤生;[D];中国农业大学;2005年
王江;[D];新疆医科大学;2009年
鄢琳;[D];四川大学;2004年
杨国龙;[D];华南理工大学;2005年
黄慧学;[D];广西医科大学;2008年
张吟;[D];福建医科大学;2009年
潘牧;[D];合肥工业大学;2009年
邱运仁;[D];中南大学;2003年
中国硕士学位论文全文数据库
王静;[D];中国人民解放军军事医学科学院;2008年
刘晓燕;[D];山东大学;2009年
何自琦;[D];西安建筑科技大学;2001年
赵钱柱;[D];西安建筑科技大学;2006年
张宇飞;[D];西南大学;2008年
郭颀然;[D];河北工业大学;2003年
纪海霞;[D];西安建筑科技大学;2003年
贾秋英;[D];河北工业大学;2005年
李朝慧;[D];中国农业大学;2005年
蒋美红;[D];华中科技大学;2005年
&快捷付款方式
&订购知网充值卡
400-819-9993
《中国学术期刊（光盘版）》电子杂志社有限公司
地址：北京清华大学 84-48信箱 知识超市公司
出版物经营许可证 新出发京批字第直0595号
同方知网数字出版技术股份有限公司
订购热线：400-819-82499
在线咨询：
传真：010-
京公网安备74号503 Service Temporarily Unavailable
503 Service Temporarily Unavailable
nginx/1.4.1您所在位置： &
&nbsp&&nbsp&nbsp&&nbsp
分析分析检测中心-笔试题库.doc50页
本文档一共被下载：
次 ,您可免费全文在线阅读后下载本文档
文档加载中...广告还剩秒
需要金币：100 &&
你可能关注的文档：
··········
··········
分析检测中心笔试题库
一、填空题1.用火作业检测分析使用的便携式监测报警设备必须是 泵吸式监测报警仪，使用前必须 定期校验
，使用中发生操作错误进水、汽或液体等介质时，必须重新进行校验后方可再使用。
2.化学需氧量COD指水体中 被氧化
物质在规定条件下进行化学氧化过程中所消耗的氧化物质量。
3. 测定游离酸时用NaOH标准滴定溶液滴定至溶液呈浅蓝色，加入50ml试样，再用NaOH标准滴定溶液滴定至溶液由
色变为浅蓝色，保持30秒不褪色即为终点。
4. 测定甲醇中的水分采用的是
在标定和使用标准溶液时，滴定速度一般应保持在
. 气相色谱仪常用的定量分析方法有面积归一法、内标法
和 外标法 。其中最常用的面积归一法应用条件是样品中的每种 组分都要从色谱柱中分离出来，并且形成可计算面积的色谱峰。
. 指示剂的封闭现象可以通过 加入掩蔽剂 、返滴定法
等方法决。
. 以铬黑T作指示剂，用EDTA测Ca、Mg时，若存在Fe3+、Al3+干扰离子，在加入缓冲溶液之前可加入
酒石酸钾钠、三乙醇胺
. 水煤浆粒度分布的测定需称取已知固含量的均匀煤浆 30～50克，置于标准分析套筛的顶层。
1. 用干燥法测定水煤浆固含量时，应在
105～110 的条件下进行鼓风干1h。
1. 动火分析取样点要具有代表性；在较大设备内动火作业，应采取 上、中、下 处每间隔1.2米多点采样；在较长物料管线上动火，应在彻底隔绝区域 分段取样 ；在设备外部动火，动火环境分析范围不小于动火点 15m
1. 当受限空间、容器内有夹套、填料、衬里、密封圈等，有可能释放有毒、有害和可燃气体的，采样分析合格后
未用火的，须重新检测分析合格后方可用火
正在加载中，请稍后...503 Service Temporarily Unavailable
503 Service Temporarily Unavailable
nginx/1.4.1硕士论文--大鼠原位肠-肝血管灌流模型在药物吸收方面的优化与验证_百度文库
两大类热门资源免费畅读
续费一年阅读会员，立省24元！
评价文档：
5页¥3.004页¥3.003页¥2.002页¥1.004页¥2.002页¥1.003页¥1.006页免费3页1下载券2页1下载券
喜欢此文档的还喜欢7页免费26页1下载券20页2下载券15页免费
硕士论文--大鼠原位肠-肝血管灌流模型在药物吸收方面的优化与验证|硕​士​论​文
把文档贴到Blog、BBS或个人站等：
普通尺寸(450*500pix)
较大尺寸(630*500pix)
你可能喜欢