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高手请指点为何开路电位忽高忽低？谢谢！
我做的铝合金接头三电极腐蚀，Pt是辅助电极，饱和甘汞为参比，3.5%NaCl溶液中测试，开路电位测试时刚开始11v左右，关了重新开始测就降到9左右，再重新开关8点多，重复好多次，就慢慢的降；正常时大概是-0.8v，请高手指点？谢谢！
参比电极在试样上面
那为什么我做极化曲线和阻抗都没有问题呢？你说的电极没有接好具体是哪里的问题，多谢:hand:
以前我测定的时候开始开路电位也是那么高的，后来工作站技术回访时说可能某个部位链接不好，后来就把参比电极，对电极和工作电极与鳄鱼夹链接的部位用细砂纸打磨了。您觉得您做的曲线没问题么？如果做出来的极化曲线的腐蚀电位很高，您怎么解释呢？
你可以换台工作站试试，不一定是电极的问题
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向各位高手求助western blot法测p38蛋白激酶的过程。目前正在做一种物质作用于细胞后，细胞内p38蛋白激酶含量变化的实验。但是，我对这种激酶一点都不了解，所以，从操作过程，到选用试剂之类的东西都很迷惑，大家如果有这方面的经验，能不能传授一下，在下感激不尽！谢谢！
提问者： [] [] []
回答者： [] [] []
一级 一星助者
蛋白的提取：
①取出准备好的叶片（液态氮中），利用研钵将叶片研成微细粉末。
②将粉末转移到1.5ml的离心管中，并加入等量的裂解液（Lysis buffer）。
③ 在振动器上将固-液混合均匀，最后放入在4℃的振动筛中振荡1小时。
④ 在的冷冻离心机中，高速离心（14000r/min，4℃）15min 。
⑤ 取上清液置于一个新的1.5ml离心管中，在-80℃条件下保存。
⑥ 电泳时，将样品从冰霜中取出，加入等量的样品缓冲液（4X Sample Buffer），混均和样品在沸水浴中煮沸8min。
PowerPac(HC) Basic Power Supply (BIO-RAD， Catalog Number 165-3302)
② 电泳仪及附件&Mini-PROTEAN 3 Electrophoresis Cell (BIO-RAD， Catalog&& Number165-3301)
③ 电转仪及附件 Trans-Blot SD Semi-DRY Transfer cell (BIO-RAD， Catalog Number70- 3930)
④ ECL（）膜&&&
⑤ 滤纸&& Whatman，3MM CHR
Tris-Base& & & & &&AMRESCO
SDS& & & & &&&&&&&AMRESCO
10%过硫酸铵& & & &AMRESCO
TEMED& & & & &&&&AMRESCO
② 常用溶液及缓冲液 (见表1)
A．5%浓缩胶所用溶液
B．10%分离胶溶液
C．电泳缓冲液(Running Buffer) &1L&&
D．电泳转移缓冲液(Transferring Buffer) 1L
E．丽春红溶液
A：一抗GmCRY1或GmCRY2&(1:1000)
Goats-Anti Rabbit Ig G(Whole molecule)
Goats-Anti Rabbit IgGAM
本次采取1:10000的稀释度，
④ECL底物A液和ECL底物B液
&灭菌水& & & &&&& &&&&&&&&&&&&&&&&1.44ml&&&&& &2.874ml
30%丙烯酰胺& & & &&&&&&&&&&&&& &&1.2ml&&&&&&&& 2.4ml
1.5mol/L Tris-HCl (pH8.8)& & &&&&&0.875ml&&&&&& 1.75ml
10%SDS& & & & &&&&&&&&&&&&&&&&&&35ul&&&&&&&&& 70ul
10%APS& & & &&&&&&&&&&&&& &&&&&&17.5ul&&&&&&& 35ul
TEMED& & & &&&&&&&&&&&&&&&&&& &&1.75ul&&&&&&& 3.5ul
一旦加入TEMED，马上开始聚合，故应立即快速旋动混合物并进入下步操作。
② 迅速在两玻璃板的间隙中灌注丙烯酰胺溶液，不能有气泡，留出灌注积层胶所需空间（梳子的齿长再加1cm）。然后小心的在分离胶溶液上覆盖一层1-5mm的水层，压平凝胶表面。
③ 等待30-60min，使凝胶聚合。当凝胶聚合后，在分离胶和水层之间会出现一个清晰的界面，可以微微倾斜模具，检测凝胶是否聚合。用去离子水洗涤凝胶顶部数次以除去未聚合的凝胶，尽可能排去凝胶上的液体，再用滤纸吸净残留液体，注意不要接触胶面。
④ 按下法制备积层胶：按下表给出数据在一个干净的试管或小烧杯中制备一定体积浓度为5%的丙烯酰胺溶液，依次混合各成分。（两块5%积层胶Bio-Rad Mini-Protean &83mm&75mm&0.75mm， 两块胶需4ml）
浓缩胶的制备&&& &&&&&&&&&&&&2ml&&&&&&&& 4ml&& &
灭菌水& & & &&&&&&&&& &&&&&&&&1.14ml&&&&&& 2.8ml&&&&&&&
30%丙烯酰胺& & &&&&&&&&&&& &0.34ml&&&&&& 0.68ml
0 .5mol/L Tris-HCl (pH6.8)& &&&0.5ml&&&&&&& 1ml&
10%SDS& & & &&&&&&&&&&&&&&&&20ul&&&&&&&& 40ul
10%APS&&&&& && & &&&&&&&&&&10ul&&&&&&&&& 20ul
TEMED& &&&&&&&&&&&&&&&&& &&&2ul&&&&&&&&&& 4ul
一旦加入TEMED，马上开始聚合，故应立即快速旋动混合物并进入下一步操作。
⑤ 在已聚合的分离胶上直接灌注积层液。立即在积层胶溶液中插入干净的实验预设计的梳子，小心避免混入气泡，将凝胶垂直放置于室温下。
⑥ 积层胶聚合完全后（30min），小心移出梳子，使用洗瓶立即用去离子水洗涤加样塑料盒以除去未聚合的丙烯酰胺。把凝胶固定于电泳装置上，上下塑料盒各加入Tris甘氨酸电泳缓冲液。
&SDS-PAGE电泳
① 将将变性好的样品加于胶孔中。
② 设计加样顺序，作好实验记录，按预定顺序加样。一般每个电泳道加样体积为15ul。
③ 把电泳装置与电源连接好，将电压调至80V，30min后将电压调至120V，90min 后关闭电源。
④ 从电泳装置上卸下凝胶玻璃板，用去离子水冲洗干净。准备进行免疫印迹操作。
1.2.5免疫印迹操作-转膜
① 将凝胶玻璃板置于盛有电泳转移缓冲液(Transform buffer )的容器中，浸泡15-20min。
② 带上手套，裁剪好滤纸（Whatman，3MM CHR）和ECL膜，滤纸和膜大小为50mm&80mm，尽量避免污染滤纸和膜，将裁减好的滤纸和膜浸泡与电泳转移缓冲液中，驱除留于膜上的气泡。
③ 打开转移盒并放置浅盘中，用转移缓冲液将5层滤纸完全浸透后将其放在转移盒壁上，滤纸上再放置一张浸湿的ECL膜（用玻璃棒赶动，除去气泡）。
④ 小心将凝胶放置于ECL膜，除去气泡（用玻璃棒向同一个方向滚动，挤去夹在ECL膜与滤纸之间的气泡），再在凝胶的上面一层放上完全浸透的5层滤纸，用同样的方法除去气泡。
⑦将整个装置接通电源（一张膜用10V，二张膜用20V，四张膜用24V），转移1小时。
⑧将ECL膜放入塑料盒中，用丽春红溶液浸泡2-3min，看正面膜上的蛋白带是否完全从胶上转移到ECL膜上。
⑨电转完毕后，将ECL膜置于5%的脱脂奶粉（TBS配制）中封闭，37℃ 1小时或4℃过夜。
一抗与靶蛋白的结合
① 封闭的膜完毕后，用TBST漂洗3次&5min。
② 再次加入5%的脱脂奶粉20ml，同时加入相应的一抗GmCREY1或GmCRY2，注意保证膜的所有部分同溶液接触。
③ 室温下，在摇床上振晃1小时。
④ 弃去一抗(回收下次利用)，膜仍置于加样塑料盒，每个塑料盒加15ml TBST，上摇床洗涤5min，换液，反复3次。
&&酶标记二抗与一抗的结合
①每个塑料盒加入20ml的5%的脱脂奶粉，再加入二抗(Goats anti-Rabbit 2)2ul左右，室温下于摇床摇晃1h或4℃过夜，注意保证膜的所有部分同溶液接触。
②弃去二抗，膜置于塑料盒中，每个塑料盒加15mlTBST，上摇床洗涤5min ，换液，反复3次。
①．按每平方厘米膜面积用0.1-0.2ml配置发光液：根据发光液的需要量，取等体积ECL底物A液和ECL底物B液，混匀后避光保存备用。该底物必须在1小时内使用。
②．取出膜，用吸水纸平将膜上的TBST吸干，放在干净的保鲜膜上，膜的正面（蛋白质面）朝上，在膜的中央加适量的发光液（5&8cm的膜加600ul发光液），溶液向四周迅速扩散，覆盖所有膜面。如果溶液不能完全覆盖膜面，添加。室温保温5分钟左右。
③．利用ChemiDoc-It imaging system 及Vision worksls软件进行照相，其曝光时间为15min，
④．利用Photoshop软件进行处理，同时利用ImageJ软件进行数据分析，得出结论。
关于你这种酶，我也不太了解，我就先将我以前做过的Western blot的操作给你写出来！希望对你有所帮助： 我做的这个是大豆中的一种光受体蛋白CRY：
具体过程如下：
欢迎对最佳答案进行评论或补充，发表您的不同见解！
太感谢了！虽然检测的蛋白不一样，但原理应该是一样的，帮了我大忙了，谢谢！
作者：jinmancs 时间： &共0人支持此评论
其他回答 (2)
很仔细，比较好！
回答者： 一级 一星助者
回答字数在10000字以内
找到"急求：western blot法测p38激酶含量的具体过程！"相关问题约409篇，用时0.187509秒
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【求助】western blot请教！急~
我是WB新手，做了三次，结果都不理想。把图发上来，请各位高手给点建议和意见，帮忙分析下我失败的原因，非常感谢！
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扫描下载送金币大侠求助，western结果分析时，是否-中国学网-中国IT综合门户网站
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大侠求助，western结果分析时，是否
来源：互联网 发表时间： 1:48:28 责任编辑：鲁晓倩字体：
为了帮助网友解决“大侠求助，western结果分析时，是否”相关的问题，中国学网通过互联网对“大侠求助，western结果分析时，是否”相关的解决方案进行了整理,用户详细问题包括:RT,我想知道:大侠求助，western结果分析时，是否需要根据蛋白值做t检验，还是贴上跑出来的图就行啊！，具体解决方案如下：解决方案1：有的论文中根据蛋白值如112±6.9.。。。等计数资料做t检验来分析两种组织中目标蛋白表的的差异，还有的只是把跑出来的条带贴上去了，或者加一个柱状图！请问哪一种最规范？急求教啊！请大侠详细告知！跪谢！解决方案2：一般只用贴图就可以了 可以在NC的条带下标个1 别的标个相对于NC的数值
如果你做过三组 也可以给个柱状图 带标准差的
t检验不是说有没有什么意义的问题 只要你有足够的数据量都应该做个t检验 别人肯定是检测了很多对正常组织和癌组织的样本得到的数据 所以要做检验 如果你只是检测一组那想做也做不了啊
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这个问题太奇怪，请高手求助！！！！！？？？
投了一篇论文，主编回复“。。。that publication is recommended for acceptance IF some minor revisions are made, and the paper will not be sent out again to the reviewers 。。。。”
今天修改稿投出去，状态又变成under review了，难道又发回到评审专家那里去了？？？
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