免疫组化这样做_百度文库
两大类热门资源免费畅读
续费一年阅读会员，立省24元！
免疫组化这样做
上传于|0|0|文档简介
&&免疫组化,蛋白质,抗原,抗体
阅读已结束，如果下载本文需要使用0下载券
想免费下载更多文档？
定制HR最喜欢的简历
下载文档到电脑，查找使用更方便
还剩11页未读，继续阅读
定制HR最喜欢的简历
你可能喜欢关注今日：19 | 主题：213591
微信扫一扫
【求助】免疫组化一抗稀释液的配制
页码直达：
这个帖子发布于10年零361天前，其中的信息可能已发生改变或有所发展。
免疫组化一抗稀释液是怎么配的,能用PBS或TBS吗.谢谢
不知道邀请谁？试试他们
微信扫一扫
广告宣传推广
政治敏感、违法虚假信息
恶意灌水、重复发帖
违规侵权、站友争执
附件异常、链接失效
收起全部有料回复
Primary antibody dilution buffer:1. 1% BSA(stabilizer and blocking)2. 0.1% cold fish skin gelatin(blocking)3. 0.05% sodium azide( preservative)4. 0.01MPBS, PH=7.2( TBS,PH=7.6 used in the primary antibody dilution buffer produce weaker stainning)note:antibody diluted in this buffer can be stored at 4℃ for 6 months without reducing binding activity.this buffer can not be used in diluting HRP conjugated antibody since sodium azide is an inhibitor of HRPSecondary antibody dilution buffer:1. 0.01M PBS, PH=7.22. 0.05% sodium azide(preservative)note: antibody in this buffer can be stored at 4℃ for 6 months without reducing binding activity.Do not use BSA or serum containing reagent to dilute secondary antibody since they bind to BSA or serum therefor reduing antibody affinity. Using TBS to dilute secondary antibody often produing weaker stainning, so using TBS only for the antibodies with high background stainning or for alkaline phosphatase conjugated antibodies since phosphate is a inhibitor of alkaline phosphatase.
微信扫一扫
广告宣传推广
政治敏感、违法虚假信息
恶意灌水、重复发帖
违规侵权、站友争执
附件异常、链接失效
我用过PBS ，还行。你若是不放心，就买专门的抗体稀释液，一般的公司都有。大概20块钱左右吧，10ml。
微信扫一扫
广告宣传推广
政治敏感、违法虚假信息
恶意灌水、重复发帖
违规侵权、站友争执
附件异常、链接失效
丁香园版主
可以用PBS或TBS均可。
微信扫一扫
广告宣传推广
政治敏感、违法虚假信息
恶意灌水、重复发帖
违规侵权、站友争执
附件异常、链接失效
建议用封闭血清稀释IHC的一抗和二抗。GOOD LUCK！
微信扫一扫
广告宣传推广
政治敏感、违法虚假信息
恶意灌水、重复发帖
违规侵权、站友争执
附件异常、链接失效
我原来用的是PBSPBS缓冲液的配制① 储备液0.2M A液 二水合磷酸二氢钠 6.2404g 蒸馏水 200mL0.2M B液 十二水合磷酸氢二钠 71.628g 蒸馏水 1000mL② 0.1M
PB（pH 7.2～7.4）的配制0.2M
405mL蒸馏水
500mL③ 0.1M
PBS（pH 7.2～7.4）的配制0.1M
1000mLNaCl
8.5g④ 0.01M
PBS（pH 7.2～7.4）的配制0.2M
47.5mL0.2M
202.5mL蒸馏水
4750mLNaCl
45g1N NaOH
10mL测pH值应在7.2～7.4之间，若偏离此范围，用0.1N的HCl或NaOH调整。0.1M的用来稀释一抗，0.01M的用于试验中漂洗。希望对你能有用
微信扫一扫
广告宣传推广
政治敏感、违法虚假信息
恶意灌水、重复发帖
违规侵权、站友争执
附件异常、链接失效
应该用0.01M的PBS来稀释。
微信扫一扫
广告宣传推广
政治敏感、违法虚假信息
恶意灌水、重复发帖
违规侵权、站友争执
附件异常、链接失效
我用的是3%BSA
微信扫一扫
广告宣传推广
政治敏感、违法虚假信息
恶意灌水、重复发帖
违规侵权、站友争执
附件异常、链接失效
我用的是TBST
微信扫一扫
广告宣传推广
政治敏感、违法虚假信息
恶意灌水、重复发帖
违规侵权、站友争执
附件异常、链接失效
我们都是用的3%BSA
微信扫一扫
广告宣传推广
政治敏感、违法虚假信息
恶意灌水、重复发帖
违规侵权、站友争执
附件异常、链接失效
Primary antibody dilution buffer:1. 1% BSA(stabilizer and blocking)2. 0.1% cold fish skin gelatin(blocking)3. 0.05% sodium azide( preservative)4. 0.01MPBS, PH=7.2( TBS,PH=7.6 used in the primary antibody dilution buffer produce weaker stainning)note:antibody diluted in this buffer can be stored at 4℃ for 6 months without reducing binding activity.this buffer can not be used in diluting HRP conjugated antibody since sodium azide is an inhibitor of HRPSecondary antibody dilution buffer:1. 0.01M PBS, PH=7.22. 0.05% sodium azide(preservative)note: antibody in this buffer can be stored at 4℃ for 6 months without reducing binding activity.Do not use BSA or serum containing reagent to dilute secondary antibody since they bind to BSA or serum therefor reduing antibody affinity. Using TBS to dilute secondary antibody often produing weaker stainning, so using TBS only for the antibodies with high background stainning or for alkaline phosphatase conjugated antibodies since phosphate is a inhibitor of alkaline phosphatase.
微信扫一扫
广告宣传推广
政治敏感、违法虚假信息
恶意灌水、重复发帖
违规侵权、站友争执
附件异常、链接失效
抗体稀释液：1％BSA+0.01MPBS+0.2%叠氮钠，4度保存
微信扫一扫
广告宣传推广
政治敏感、违法虚假信息
恶意灌水、重复发帖
违规侵权、站友争执
附件异常、链接失效
师姐说，稀释一抗的PBS最好是消过毒的，所以我用的细胞培养用的PBS
微信扫一扫
广告宣传推广
政治敏感、违法虚假信息
恶意灌水、重复发帖
违规侵权、站友争执
附件异常、链接失效
那位大侠能把西式一抗的PBS具体要求说一下吗?谢谢
微信扫一扫
广告宣传推广
政治敏感、违法虚假信息
恶意灌水、重复发帖
违规侵权、站友争执
附件异常、链接失效
我第一次稀释一抗.用0.1MPBS希望不会影响一抗
微信扫一扫
广告宣传推广
政治敏感、违法虚假信息
恶意灌水、重复发帖
违规侵权、站友争执
附件异常、链接失效
请问楼上细胞培养用的PBS 可以么？我实验室的人说，组化的和细胞培养用的PBS 不一样啊？
微信扫一扫
广告宣传推广
政治敏感、违法虚假信息
恶意灌水、重复发帖
违规侵权、站友争执
附件异常、链接失效
免疫组化常用的PBS (0.01M PBS, pH 7.2):
Na2HPO4 (anhydrous) -------------------------- 1.09g
NaH2PO4 (anhydrous) -------------------------- 0.32g
NaCl ------------------------------------------- 9 g
Distilled water --------------------------------- 1000 ml
Mix to dissolve and adjust pH to 7.2
Store this solution at room temperature. Dilute 1:10 with distilled water before use and adjust pH if necessary. PBS缓冲液，又名Gomori缓冲液，由单价的磷酸二氢盐和双价的磷酸一氢盐组成，通过变化每种盐的组分，配置出PH为5.8~8.0的缓冲液，具备很强的缓冲能力，水中高度可融，但存在如下缺点：1.抑制多种酶促反应；2.在乙醇中沉淀，故不可用于沉淀DNA和RNA；3.可以螯合Ca++和Mg++等。个人认为虽然各种PBS的组分不完全相同，但其主要是起缓冲PH值的作用，只要浓度一致，在保证等渗的条件下，IHC和cell culture的PBS是可以通用的
微信扫一扫
广告宣传推广
政治敏感、违法虚假信息
恶意灌水、重复发帖
违规侵权、站友争执
附件异常、链接失效
ch76 免疫组化一抗稀释液是怎么配的,能用PBS或TBS吗.谢谢用PBS或TBS都行，还可以用封闭液来稀释一抗，效果也很好
微信扫一扫
广告宣传推广
政治敏感、违法虚假信息
恶意灌水、重复发帖
违规侵权、站友争执
附件异常、链接失效
关于丁香园您所在位置： &
&nbsp&&nbsp&nbsp&&nbsp
局灶性脑缺血再注mri功能成像与stat3激活的实验研究.pdf 55页
本文档一共被下载：
次 ,您可全文免费在线阅读后下载本文档。
下载提示
1.本站不保证该用户上传的文档完整性，不预览、不比对内容而直接下载产生的反悔问题本站不予受理。
2.该文档所得收入(下载+内容+预览三)归上传者、原创者。
3.登录后可充值，立即自动返金币，充值渠道很便利
需要金币：280 &&
局灶性脑缺血再注mri功能成像与stat3激活的实验研究
你可能关注的文档：
··········
··········
--------------------------Page1------------------------------徐州医学院硕士学位论文缩略词表Abbreviation缩略词英文全称中文全称ADCdiffusioncoefficientapparent表观弥散系数CBFcc残bralbloodflow脑血流量CBVcerebralbloodvolume脑血容量CTcomputedtomography计算机断层摄影DWIdiffusion弥散加权成像weightedimagingEPIecho平面回波成像planarimagingFLA瓜fluidattenuationinverse液体衰减翻转恢复recovery瓜侧functionalresonancemagneticimaging功能性磁共振成像Gd-DTPADTPAgadolinium钆喷酸葡胺megli．1mmcI／Rischemia／reperfi坶ion缺血／再灌注JAKJanuskinaseJanus酪氨酸蛋白激酶MCAOmiddlecerebralocclusion大脑中动脉闭塞artery删magnetic磁共振成像reSOllRll∞imagingMTTmeantransittime平均通过时间NEIenhancementnegativeintegral负性增强积分PMperfusionweighted灌注加权成像imagingROIofinterestregion感兴趣区S1：f叮transducersandactivatorssignal信号转导子与转录激活子oftranscription盯Cchloridetriphenyltetrazolium红四氮唑删timetominimum到达最低信号强度时间--------------------------Page2------------------------------徐州医学院硕士学位论文论文独创性声明本论文g屋丝挂堕壁垒矗灌注丛墼功能盛堡墨墨王堑≥邀适的塞验蛋荭》是我个人在导师指导下进行的研究工作及取得的研究成果。论文中除了特别加以标注和致谢的地方外，不包含其他人或机构已经发表或撰写过的研究成果。其他同志对本研究的启发和所做的贡献均己在论文中作了明确的声明并表示了谢意。作者签名：——墓垒忙论文使用授权声明本人完全了解徐州医学院有关保留、使用学位论文的规定，即：学校有权保留送交论文的复印件和电子文档，允许论文被查阅和借阅；学校可以公布论文的全部或部分内容，可阻采用影印、缩印或其它复制手段保存论文。保密的论文在解密后遵守此规定。作者签名：—雌导师签名：--------------------------Page3------------------------------徐州医学院硕士学位论文局灶性脑缺血再灌注MRI功能成像与STAT3激活的实验研究中文摘要目的研究大鼠局灶性脑缺血再灌注的Mlu表现、神经元变化及可逆损伤区，transdugel-sandactivatorsof以及缺血区域信号转导子与转录激活子．3(signaltranscription-3。STAT3)激活变化，探讨其与MRI表现的关系。方法雄性SD大鼠99只，随机分为A假手术组、B缺血2h组和c缺血6h组，缺脉闭塞(middlecerebralartery化、免疫印迹法(Westernblot,WB)检测s州r3蛋白表达和磷酸化水平。结果假手术组DWI、PWI未示异常，B、c组再灌注前可见部分右侧大脑半球DWI呈高信号，ADC值降低，PWI示部分右侧大脑半球灌注缺损。再灌注前c对面积逐渐变小，CBV基本恢复正常，C组DWI相对面积轻度缩小，局部仍存在结果显示随着缺血时间延长，神经元坏死加重。免疫组化定位：STAT3在胞浆中表达，P-STAT3在胞核中表达。Westernblot半定量：缺血再灌注不引起STAT3蛋2--------------------------Page4------------------------------徐州医学院硕士学位论文白表达的变化，但可诱导缺血区域磷酸化水平增加，随着再灌注时间延长，24h达化正性相关。结论(1)大鼠脑组织STA∞蛋白于细胞胞浆内表达，P—S瞄们于胞核内表相关。关键词脑缺血，磁共振成像，SⅨr3FunctionalMIUandSTAT3activationafterInvestigationFocalCerebralIschemiaandinRatsRcpeffusionAbstractTotheofMRI、thevariationofneuron、theobiectiveinvestigateappearanceandtheactivationofSTAT3inthe
正在加载中，请稍后...扫二维码下载作业帮
拍照搜题，秒出答案，一键查看所有搜题记录
下载作业帮安装包
扫二维码下载作业帮
拍照搜题，秒出答案，一键查看所有搜题记录
【高分】免疫组化结果到底用卡方检验还是t检验?我做的是免疫组化的实验，现在数据已经出来了，我的计算方法是：蛋白阳性染色为淡黄色、棕黄色或棕褐色。每个标本取15张切片，每张切片在染色均匀区随机选取5个高倍视野( ×100)，每个视野计数100个细胞，由两位高年资病理科医生各自独立进行判断，采用二级计分法统计结果，并取平均值（mean score，MS）。判断标准：根据染色强度，将结果分为3级，分别表示为：1+，2+，3+；计算每100个细胞中阳性细胞数，然后二者相乘，即为最后评分。理论上结果的范围为0～300分 。最后用t检验 得出P值。
空白对照组
176.08±9.093
146.44±6.402
169.46±9.813
147.58±6.652
但是我看很多文章似乎不是这么计算的，是每张切片随机观察具有代表性的10个高倍镜视野，根据胞膜胞质染色程度及染色细胞百分比进行评分：基本不着色者为0分，着色淡者为1分，着色适中者为2分，着色深者为3分；着色细胞占计数细胞百分比≤5%为0分，6%~25%为1分，26%~50%为2分，>50%为3分。将每张切片着色程度得分与着色细胞百分比得分相乘为其最后得分，0~1分为阴性（-），2~3分为弱阳性（+），≥4分为强阳性（++）。之后结果用卡方检验。我的数据不知是否一定要用卡方检验，什么情况下用哪种统计方法？
丶逆天丶122
扫二维码下载作业帮
拍照搜题，秒出答案，一键查看所有搜题记录
率的比较用卡方检验，均值比较用t检验。比较着色细胞百分比是率的比较，所以要用卡方检验。每100个细胞中阳性细胞数的比较属于均值比较，所以要用t检验。
为您推荐：
扫描下载二维码细胞库/细胞培养
ELISA试剂盒
实验室仪器/设备
原辅料包材
体外检测试剂
【求助】stat3免疫组化
【求助】stat3免疫组化
来源：丁香园论坛
点击次数：820
想请教个问题，做stat3的免疫组化，是选用stat3抗体，还是p-stat3抗体？看到国外大部分文章都做p-stat3，而国内有些文章用stat3抗体，搞不明白
stat3抗体只是检测总蛋白，看活性必须要做P-stat3。
在转录水平就应该做EMSA
谢谢，再请教一下，应该只有磷酸化的stat3才能进行核内转移，那么做stat3抗体，为什么做免疫组化也会有核内染色显示？
还有，据说磷酸化的指标做WB时容易被降解，做免疫组化时会存在这样的问题吗？
本文由丁香园论坛提供，想了解更多有用的、有意思的前沿资讯以及酷炫的实验方法的你，都可以成为师兄的好伙伴 师兄微信号：shixiongcoming
wudihero007
相关实验方法
本网站所有注明“来源：丁香园”的文字、图片和音视频资料，版权均属于丁香园所有，非经授权，任何媒体、网站或个人不得转载，授权转载时须注明“来源：丁香园”。本网所有转载文章系出于传递更多信息之目的，且明确注明来源和作者，不希望被转载的媒体或个人可与我们联系，我们将立即进行删除处理。
试剂（盒）
丁香通采购热线：400-
Copyright (C)
DXY All Rights Reserved.