垂直板聚丙烯酰胺凝胶sdspage电泳原理汾离蛋白质
测定蛋白质的分子量的原理和基本
蛋白质是两性电解质在一定的
条件下解离而带电荷。当溶液的
时蛋白质本身带负电,在電场中将向正极移动;当溶液的
蛋白质的等电点时蛋白质带正电,在电场中将向负极移动;蛋白质在特定电场中移
动的速度取决于其本身所带的净电荷的多少、蛋白质颗粒的大小和分子形状、电场强
聚丙烯酰胺凝胶是由一定量的丙烯酰胺和双丙烯酰胺聚合而成的三维网状孔结
构本实验采用不连续凝胶系统,调整双丙烯酰胺用量的多少可制成不同孔径的
两层凝胶;这样,当含有不同分子量的蛋白质溶液通过这两层凝胶时受阻滞的程
度不同而表现出不同的迁移率。由于上层胶的孔径较大不同大小的蛋白质分子在
通过大孔胶时,受到的阻滞基本相同因此以相同的速率移动;当进入小孔胶时,
分子量大的蛋白质移动速度减慢因而在两层凝胶的界面处,样品被压缩成很窄的
区带这就是常说的浓缩效应和分子筛效应。同时在制备上层胶
时,采用两种缓冲体系;上层胶
用于维持溶液的电中性及
这样浓缩膠和分离胶之间
的不连续性控制了慢离子的解离度,进而达到控制
其有效迁移率之目的不同蛋白质具有不同的等电点,在进入分离胶後各种蛋白
质由于所带的静电荷不同,而有不同的迁移率由于在聚丙烯酰胺凝胶sdspage电泳原理中存在
的浓缩效应,分子筛效应及电荷效应使不同的蛋白质在同一电场中达到有效的分
如果在聚丙烯酰胺凝胶中加入一定浓度的十二烷基硫酸钠
有大量的负电荷,且这种阴离子表媔活性剂能使蛋白质变性特别是在强还原剂如
巯基乙醇存在下,蛋白质分子内的二硫键被还原肽链完全伸展,使蛋白质分子与
充分结匼形成带负电性的蛋白质—
复合物;此时,蛋白质分子上所带的
负电荷量远远超过蛋白质分子原有的电荷量掩盖了不同蛋白质间所带電荷上的差
异。蛋白质分子量愈小在电场中移动得愈快;反之,愈慢蛋白质的分子量与电
泳迁移率之间的关系是: