WBrna跑胶3条带的含义跑成了这个样子,求助求助

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【求助】wb很跑出两条条带如何解释?
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这个帖子发布于4年零21天前,其中的信息可能已发生改变或有所发展。
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abcam抗体做wb,跑出了两个条带,并且两个道都是全或无的形式,很奇怪的现象,不知道如何解释?是否是因为该蛋白有两个isform形式?望大侠相助。见下图:几个道组织的顺序分别是:正常、肿瘤、正常、肿瘤、正常、肿瘤、正常、肿瘤
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肿瘤中该蛋白可能存在修饰,建议去打质谱看看是什么修饰
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麦克林托克 肿瘤中该蛋白可能存在修饰,建议去打质谱看看是什么修饰 您好,想继续请问一下,所谓的修饰一般包括什么?修饰后会导致该蛋白的功能变化吗?
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您好,想继续请问一下,所谓的修饰一般包括什么?修饰后会导致该蛋白的功能变化吗? 修饰有很多种,磷酸化,泛素化,乙酰化,甲基化,糖基化等很多种。拿磷酸化来举例,一些激酶是在磷酸化后具有活性入核转录基因。而另一些蛋白可能是是失去某些磷酸化后才具有某些功能。在肿瘤细胞种就有一些例子,某蛋白在肿瘤组织中高度活化
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WB跑成这样是什么原因啊,求助??已有1人参与
求助啊,这是一条内参的条带,但是我不知道为啥会是这样,是我哪个环节出问题了吗??求帮助。。。
QQ图片35.png
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加油科研小马达。
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specify一下问题在哪儿?
如果你是说最右侧lane的条带有红线的话,那你用LASCAN的时候把标亮饱和信号钩选去掉就可以了。
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【求助】WB条带跑成了这个样子,,求助求助
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这个帖子发布于3年零157天前,其中的信息可能已发生改变或有所发展。
本人跑的是大鼠TRPM7蛋白 之前借用别人的肝癌细胞试条件后可以得到清晰的条带 现在用我自己的蛋白就是跑不出来 内参都很好很浓的条带 但是目的蛋白跑成了下面这个样子 背景很黑是因为我显影的时候因为一直看不到条带所以显影太久 但是我很不明白为什么会有那么对称的2块白色的东东 难道是反显影的条带么?我是8%分离胶5%浓缩胶 湿转2个小时 300mA
封闭一个小时 洗膜3次一次10min 用ECL发光试剂盒进行曝光 滴上显色液关灯感觉整片膜都有亮光 然后压片3分钟左右出来就成这样了请问各位大神么 这到底是什么原因呢 这2块白色的东东实在太诡异了 感激不尽!
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DNA酶切后电泳,条带呈复带的原因做双酶切,跑出来每个带都像一个“=”,都分别由两个极近的带组成.求可能的原因
作业帮用户
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你酶切的DNA是什么?质粒的话,双酶切中间有几十bp以上,切出来的条带就是两条,这个你应该能判断的.如果是pcr产物酶切出现了两条极近的带,那么很有可能是因为pcr产物纯化时有杂带污染,一开始跑胶的时候看不出来,后来你回收浓缩再加上酶切,再跑电泳的时候就出现了两条极近的带.其实将这两条带回收(上面那条是目的条带的可能性要大些),进行连接,只要操作和实验条件好的话,菌落的阳性率也挺高的,因为是双酶切连接.
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【实验求助】LC3B WB条带疑问
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这个帖子发布于3年零230天前,其中的信息可能已发生改变或有所发展。
最近做WB检测自噬标志蛋白LC3B,前列腺癌细胞DU145,LNCAP的样品,sigma的抗体,说明书说是能检测2条带分别是16、18kd。但是我一直都只能检测看到16K的,仔细看还是2条。如果加TG诱导的话,发现在lncap中出现一条低于15kd的条带,很奇怪。这是怎么回事呢?难道下面那条才是LC3BII?,可是大小不对,如果15k那条是LC3BII的话也符合诱导趋势。我搞不明白了。有哪位高手能为我解惑啊?
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hotmeteor 编辑于
丁香园准中级站友
分离胶是百分之几的?lncap
24h中出现一条低于15kd的条带不是正常的条带,因为他的形状和上面的形状一致。是不是曝光的时候出了问题?lncap
0 、8h有2条带,分得不是很开,有可能条带没有跑开。可以试试浓度更大的分离胶。
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用的是15%的SDSPAGE。NC膜,300mA转2h,5%milk 1h, 1抗孵育过夜,3*15min tbst, 2抗室温下孵育2h而且我不是用HRP 2抗,用的是IR680的二抗,孵育洗膜后就直接扫描得到的图像,不存在曝光的问题。
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个人意见:24hr那个带是LC3-II。你用15%的胶应该是合适的。其实简单的办法是用Rapamycin处理一下细胞。这个会导致I和II的上调。看一下哪几个带上去就是了。如果用BafilomycinA或者Chloroquine共处理,会看到更多的蛋白。这两个东东抑制降解。
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