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this.p={ dwrMethod:'queryLikePosts',fpost:'2a10',userId:,blogListLength:30};长颈虫（Dileptus sp.）口胞器、胞咽及表膜下结构的电镜观察--《哈尔滨师范大学》2012年硕士论文
长颈虫（Dileptus sp.）口胞器、胞咽及表膜下结构的电镜观察
【摘要】：对一种长颈虫的口胞器、胞咽和表膜下的结构做了扫描电镜以及透射电镜的观察。主要结果如下：（1）胞口位于喙的基部腹面，由汇集成135根微管束的围口动基列包围，当微管束收缩时（直径约为0.4μm），放射状排列成圆盘，将胞口封闭。当微管束拉伸时（直径则变为约0.36μm），向胞口内陷，胞口打开。胞口无论闭合还是张开其直径都约为16μm，表明微管束的收缩或伸长不改变胞口的大小，只关系到其是否堵着胞口，由此决定胞口的开闭。取食槽缝隙的两侧也有这样的微管束，它们的功能应与喙捕食有关，具体作用机理尚不清楚。（2）胞咽呈无篮底的篮筐状，直径约6μm，由直径约0.08μm和0.19μm的两种纤维编织而成。（3）表膜下存在两种类型的毒丝泡，扫描电镜下：Ⅰ型毒丝泡，呈两头稍细的棍棒状，长约5μm，中间部分直径约0.75μm，两头部分直径约0.32μm。在取食槽缝隙两侧的微管束之间的表膜下大量分布。Ⅱ型毒丝泡，呈卵状，大小约1.6×0.8μm。在体区表膜下大量分布，而在喙部则较少。在细胞质中也能看到许多处于不同发展阶段的两类毒丝泡。（4）表膜下有非常发达的纤维系统，这种纤维系统由直径约0.14μm的纤维编织形成，附着在表膜上。其功能为：将胞质内的一些细胞器（如线粒体、射出体）和其它一些结构绑缚、固定在细胞质中；保持细胞的形态。（5）表膜下其它结构：表膜下有多个表膜泡，其中每两个表膜泡之间形成一个向胞质内的凸起，形成的这些凸起排列规则，直径约1.4μm。表膜下有一种由纤维层构成的纤丝鞘结构，这种纤丝鞘结构将虫体细胞质分成内外两部分，其中外层厚约1.4μm，大致相当于其它类群的皮层部分。表膜下有许多线粒体密集于紧靠纤丝鞘的内层细胞质内。透射电镜下还可见表膜下外层细胞质内有两类圆形结构，一类内部为浅色匀质，直径约0.7μm，另一类内部为深色致密，直径约0.5μm。可能为两种皮层颗粒。扫描电镜下还可见表膜下内层细胞质内有许多大小约为4×2.5μm、3.5μm的椭球状和球状的结构。很可能是线粒体。
【关键词】：
【学位授予单位】：哈尔滨师范大学【学位级别】：硕士【学位授予年份】：2012【分类号】：Q954【目录】：
摘要7-8ABSTRACT8-10第1章 前言10-14 1.1 纤毛虫口胞器、胞咽结构的研究现状10-11 1.2 纤毛虫皮层结构的研究现状11-12 1.3 长颈虫的研究现状12-13 1.4 本课题研究的目的及意义13-14第2章 材料与方法14-21 2.1 实验动物14
2.1.1 分类地位14
2.1.2 采集与培养14 2.2 实验试剂14-15
2.2.1 扫描电子显微镜技术中所需要的主要试剂及溶液配制14-15
2.2.2 透射电子显微镜技术中所需要的主要试剂及溶液配制15 2.3 主要仪器设备15 2.4 实验方法15-21
2.4.1 虫体蛋白银染色制片和观察15-17
2.4.2 扫描电镜样品制备和观察17-19
2.4.3 透射电镜样品制备和观察19-21第3章 结果21-23 3.1 该种长颈虫的光镜观察21
3.1.1 活体形态的光镜观察21
3.1.2 虫体蛋白银染色制片的光镜观察21 3.2 口胞器结构的电镜观察21 3.3 胞咽结构的电镜观察21-22 3.4 表膜下结构的电镜观察22-23
3.4.1 表膜下射出体结构的电镜观察22
3.4.2 表膜下纤维系统的电镜观察22
3.4.3 表膜下其它结构的电镜观察22-23第4章 讨论23-27 4.1 口胞器结构23-24 4.2 胞咽结构24 4.3 表膜下结构24-27
4.3.1 表膜下的射出体24-25
4.3.2 表膜下的纤维系统25
4.3.3 表膜下的其它结构25-27小结27-28参考文献28-32图版Ⅰ32-33图版Ⅱ33-34图版Ⅲ34-35图版Ⅳ35-36图版说明36-38Explanation of Plate38-41作者简介41-42攻读学位期间发表的学术论文42-43致谢43
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【引证文献】
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高晶;[D];哈尔滨师范大学;2012年
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京公网安备75号泥鳅蛋白抗氧化肽的分离纯化及抗疲劳、抗癌功效研究--《华南理工大学》2010年博士论文
泥鳅蛋白抗氧化肽的分离纯化及抗疲劳、抗癌功效研究
【摘要】：
本文以泥鳅蛋白为原料,通过可控酶解技术制备抗氧化肽,利用体外化学模型和体内动物模型综合评价了泥鳅多肽的抗氧化活性。在此基础上利用动物模型评价其抗疲劳功效,利用细胞模型评价其抗癌功效。然后采用多种分离技术手段对泥鳅多肽进行分离纯化,并采用反相高效液相色谱联用电喷雾质谱对目标肽段进行一级氨基酸序列的鉴定,最后研究了泥鳅多肽在加工储藏过程中,以及在体外模拟胃肠道消化过程中的抗氧化活性稳定性。
泥鳅是一种高蛋白(粗蛋白含量高达17.4%)、低脂肪的食品原料,适合于蛋白酶解生产活性多肽。泥鳅蛋白水解产物的抗氧化活性与酶的种类和水解度密切相关。当水解度增加至23%时,用Papain酶解的产物显示出很强的抗氧化性,其清除?OH、DPPH?、ABTS?+自由基和还原力分别为56.08%、95.48%、2.8033 mM Trolox和1.458。采用Alcalase2.4L、Protamex、Papain、PTN6.0S、Flavorzyme500MG五种酶来水解泥鳅蛋白,发现对泥鳅蛋白进行适度酶解能提高其营养价值(除了Flavorzyme500MG酶解产物外,各产物的氨基酸分均高于泥鳅蛋白),综合比较产物的蛋白质利用率、肽得率和水解度、DPPH?、?OH和O2-?三种自由基清除能力的差异,最终选择Papain为泥鳅蛋白酶解的最佳用酶。采用响应面法优化泥鳅蛋白酶解工艺条件,得出最佳条件为:加酶量3‰(Papain活力为6×105 U/g)、酶解温度为55℃、酶解时间为4.5h,测得清除?OH的EC50值为17.00±0.54 mg/mL,与模型预测值16.76mg/mL无显著性差异(P0.05)。
采用6种体外化学模型综合评价泥鳅多肽的抗氧化活性,结果表明泥鳅多肽具有较强的体外抗氧化活性,其清除?OH、DPPH?能力、螯合铜离子能力、抑制脂质过氧化能力分别比相同摩尔浓度的谷胱甘肽高0.4、0.46、0.78和3.11倍(泥鳅多肽的平均分子量约为谷胱甘肽的5倍)。当泥鳅多肽质量浓度为谷胱甘肽浓度的3.5倍左右时,两者还原力相当。体内抗氧化活性结果表明泥鳅多肽能使小鼠体内的抗氧化酶系——超氧化物歧化酶(SOD)、过氧化氢酶(CAT)和谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)的活力分别比空白组提高了1.7%-8.5%、36%-49%和13%-27%,表明泥鳅多肽具有较强的体内抗氧化活性。
与空白对照组相比,泥鳅多肽可显著延长小鼠的力竭游泳时间达20%-28%;能延缓或减少小鼠运动时机体中葡萄糖和肝糖原的消耗,加速清除小鼠血液中乳酸和血清尿素氮的积累,还能提高小鼠体内抗氧化酶系的活力,证明泥鳅多肽可以提高小鼠游泳的耐力,具有抗疲劳功效。通过分析泥鳅多肽体内抗氧化活性与其抗疲劳功效之间的相关性,发现两者是显著相关的。
细胞实验结果表明,泥鳅多肽对肝癌细胞HepG2、结肠癌细胞Caco2和乳腺癌细胞MCF-7均有显著的抑制增殖作用。随着多肽浓度的增加,抑制作用增强,其EC50值分别为16.69 mg/mL、9.92 mg/mL和15.91mg/mL。
采用超滤、离子交换色谱、凝胶过滤色谱、半制备型和分析型RP-HPLC等系列技术对泥鳅多肽进行了分离纯化,所得目标肽段清除?OH能力比分离前提高了9.14倍,也比相同摩尔浓度的GSH活性强11.6倍,说明分离纯化可显著地富集抗氧化肽。最后用RP-HPLC-ESI-MS-MS对功能肽段的氨基酸序列组成进行了鉴定,得到目标肽段的氨基酸序列为Pro-Ser-Tyr-Val,分子量464.2 Da。经肽谱库和美国化学文摘检索,该肽段为首次发现的具有显著抗氧化活性的四肽(清除?OH的EC50值为1.86±0.19mg/mL)。泥鳅抗氧化肽的稳定性研究表明泥鳅多肽的耐热性较好;耐光性较差,宜避光保存;在酸性和中性条件下其抗氧化活性变化不显著,在碱性条件下很快失活;Cu2+和Zn2+浓度的增加能显著降低其抗氧化活性(P0.05),而Mg2+、Ca2+和K+则对其影响不显著;糖类对其抗氧化活性的影响大小先后顺序依次为:葡萄糖蔗糖海藻糖;冷冻和喷雾干燥方式对泥鳅肽抗氧化活性的影响不存在显著差异(P0.05)。
在模拟胃肠道消化过程中,胃蛋白酶主要将泥鳅多肽水解成小片段,而胰酶能将泥鳅多肽水解得更加彻底(分子量小于250Da的肽段增加了110%),释放出更多的游离氨基酸。模拟消化结束后,泥鳅肽组成中有38.1%是游离氨基酸,而肽的主要组分为分子量小于500Da的肽段,验证了多肽经胃肠道消化后主要以二肽、三肽和四肽的形式被吸收,而非全部是氨基酸。与消化前的泥鳅肽相比,消化后的产物不仅抗氧化活性没有损失,而且生成了一些抗氧化活性更强的肽段,其清除?OH、ABTS?+自由基、还原力和螯合铜离子能力分别比消化前提高了12%、5%、77%和12%,说明泥鳅抗氧化肽具有较好的耐受胃肠道酶系消化的能力。
【关键词】：
【学位授予单位】：华南理工大学【学位级别】：博士【学位授予年份】：2010【分类号】：TS201.2【目录】：
ABSTRACT8-15
第一章 绪论15-41
1.1 引言15
1.2 生物活性肽的生理功能及其研究进展15-16
1.3 抗氧化肽的研究进展16-21
1.3.1 抗氧化肽的生产方法16-17
1.3.2 酶解法生产抗氧化肽的工艺研究17-18
1.3.3 抗氧化肽的分离纯化方法研究18-20
1.3.4 抗氧化肽的结构鉴定20-21
1.4 抗疲劳的研究现状21-25
1.4.1 疲劳产生的原因22-24
1.4.2 抗疲劳作用的功能学评价方法24-25
1.4.3 卫生部批准的抗疲劳作用的功能性食品概况25
1.5 抗癌生物活性物质的研究现状25-28
1.5.1 癌症的危害25-26
1.5.2 抗肿瘤活性肽的研究现状26-28
1.6 泥鳅药用价值高28-30
1.7 本课题研究的立论依据和主要研究内容30-32
1.7.1 立论依据30
1.7.2 研究内容30-32
参考文献32-41
第二章 泥鳅蛋白酶解工艺的研究41-59
2.1 引言41
2.2 材料与方法41-45
2.2.1 材料41-42
2.2.2 主要仪器42
2.2.3 主要试剂42-43
2.2.4 酶解工艺流程43
2.2.5 测定方法43-45
2.3 结果与讨论45-54
2.3.1 泥鳅的基本成分测定45-48
2.3.2 水解程度对泥鳅蛋白酶解产物抗氧化活性的影响48-54
2.4 本章小结54-56
参考文献56-59
第三章 泥鳅蛋白酶解工艺条件的优化59-78
3.1 引言59-60
3.2 材料与方法60-63
3.2.1 试验材料60
3.2.2 主要仪器设备60
3.2.3 主要试剂60-61
3.2.4 试验方法61-63
3.3 结果与讨论63-74
3.3.1 单酶酶解泥鳅蛋白的特性研究63-70
3.3.2 响应面法优化泥鳅蛋白酶解工艺条件70-74
3.4 本章小结74-75
参考文献75-78
第四章 泥鳅多肽抗氧化、抗疲劳和抗癌功效的研究78-103
4.1 引言78-79
4.2 材料与方法79-84
4.2.1 材料79
4.2.2 主要仪器设备79-80
4.2.3 主要试剂80
4.2.4 实验方法80-84
4.3 结果与讨论84-95
4.3.1 泥鳅多肽的抗氧化活性评价84-88
4.3.2 泥鳅多肽对小鼠抗疲劳功效的研究88-92
4.3.3 泥鳅多肽抑制癌细胞增殖作用92-95
4.4 本章小结95-97
参考文献97-103
第五章 泥鳅蛋白抗氧化肽的分离纯化及结构鉴定103-126
5.1 引言103-104
5.2 材料与方法104-110
5.2.1 材料104
5.2.2 主要仪器104-105
5.2.3 主要试剂105
5.2.4 实验方法105-110
5.3 结果与讨论110-120
5.3.1 膜超滤法分离纯化LPH110
5.3.2 离子交换层析法分离LPH110-112
5.3.3 凝胶层析法分离纯化LPH112-114
5.3.4 RP-HPLC 分离纯化LPH114-116
5.3.5 组分 A4-3b 功能肽因子的氨基酸组成及序列鉴定116-120
5.4 本章小结120-122
参考文献122-126
第六章 泥鳅抗氧化肽的稳定性研究126-147
6.1 引言126
6.2 材料与方法126-130
6.2.1 材料及仪器设备126-127
6.2.2 实验方法127-128
6.2.3 各因素对泥鳅多肽抗氧化活性的影响128-130
6.3 结果与讨论130-143
6.3.1 温度对泥鳅多肽抗氧化活性的影响130
6.3.2 pH 值对泥鳅多肽抗氧化活性的影响130-131
6.3.3 光照对泥鳅多肽抗氧化活性的影响131-132
6.3.4 干燥方式对泥鳅多肽抗氧化活性的影响132
6.3.5 金属离子对泥鳅多肽抗氧化活性的影响132-133
6.3.6 食品配料对泥鳅多肽抗氧化活性的影响133-135
6.3.7 模拟胃肠消化道酶系对泥鳅多肽抗氧化活性的影响135-143
6.4 结论143-145
参考文献145-147
结论与展望147-151
攻读博士学位期间取得的研究成果151-154
致谢154-155
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